牛奶中β-內(nèi)酰胺類和四環(huán)素類抗生素檢測方法

文 / 扶 勝 杜祥樂

（北京勤邦生物技術(shù)有限公司）

隨著奶牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，抗生素在預(yù)防和治療奶牛疾病方面得到了廣泛的應(yīng)用。生鮮牛奶中抗生素的來源主要有：①治療泌乳期病牛時使用的抗生素會從奶牛內(nèi)移到乳腺殘留并進入牛奶中。資料表明，治療期間的奶牛，其擠出的牛奶5 天內(nèi)都有抗生素殘留。②為了預(yù)防奶牛疾病并提高產(chǎn)量，在奶牛飼料中添加抗生素也會造成牛奶中抗生素的殘留。③由于牧場管理不善，擠奶、儲奶沒有嚴格的衛(wèi)生制度和配套設(shè)施，人為添加可造成牛奶抗生素的污染。

人們食用含有抗生素的牛奶，會引發(fā)過敏、機體產(chǎn)生耐藥性等問題，所以世界各國禁止含有抗生素的奶制品在市場上流通。這樣政府對企業(yè)的監(jiān)控就增加了在收奶過程中抗生素的檢測項目。市場上隨之產(chǎn)生了相應(yīng)的快速檢測產(chǎn)品。快速檢測產(chǎn)品可以分為試劑盒和試紙條兩大類，其大部分都是基于免疫學(xué)中的相關(guān)原理進行研發(fā)的。試劑盒能夠配合酶標(biāo)儀出具相應(yīng)的檢測數(shù)據(jù)，適合企業(yè)監(jiān)控抗生素殘留，建立相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫；而試紙條則在現(xiàn)場檢測及收奶環(huán)節(jié)用得比較多。目前，我國市場上的檢測產(chǎn)品國外生產(chǎn)商占據(jù)了相當(dāng)大的比例，而國內(nèi)一些企業(yè)也采用特異性的抗體抗原反應(yīng)及免疫層析分析技術(shù)，應(yīng)用β-內(nèi)酰胺類和四環(huán)素類抗生素抗體競爭結(jié)合β-內(nèi)酰胺類和四環(huán)素類抗生素偶聯(lián)物和樣品中可能含有β-內(nèi)酰胺類和/或四環(huán)素類抗生素的原理，研發(fā)出了可同時快速檢測牛奶中β-內(nèi)酰胺類和四環(huán)素類試紙條產(chǎn)品（A產(chǎn)品）。本文對該產(chǎn)品的檢測項目及檢測限、操作步驟、判定標(biāo)準(zhǔn)、產(chǎn)品優(yōu)點等進行了介紹。

1 產(chǎn)品檢測項目及檢測限

試紙條產(chǎn)品可檢測的項目和檢測限如表1所示。

2 檢測操作步驟

檢測操作步驟如圖1所示：（1）準(zhǔn)備好牛奶樣品，編好號碼，并恢復(fù)到室溫；（2）從原包裝中取出試劑桶，打開后取出所需數(shù)量的微孔試劑和試紙條，并做好標(biāo)記；（3）吸取編好號的牛奶樣品溶液，滴加200 μL于微孔中；（4）緩慢抽吸5 次充分與微孔中試劑混勻，混合液顏色呈粉紅色，開始計時，孵育5 min；（5）將標(biāo)記好的試紙條插入微孔中，印有“max”線端朝下，使之充分浸入溶液中，室溫孵育5 min；（6）取出試紙條，根據(jù)圖2判定結(jié)果。

表1 產(chǎn)品檢測項目及檢測限

表2 與國內(nèi)市場主流β-內(nèi)酰胺類等檢測產(chǎn)品對比

圖1 檢測操作步驟

圖2 判定方法

判定方法如下：陰性（－）：T線和B線和C線都顯色，判為陰性；β-內(nèi)酰胺類陽性（＋）：C線和T線顯色，B線無顯色，判為陽性；四環(huán)素類陽性（＋）：C線和B線顯色，T 線無顯色，判為陽性；β-內(nèi)酰胺類和四環(huán)素類陽性（+）：C線顯色，T 、B線無顯色，判為陽性。需要注意的是：如果未出現(xiàn)C線，表明操作過程不正確或試紙條已變質(zhì)失效，應(yīng)重新測試；試紙條若需記錄存檔，需在讀數(shù)后，立即剪去試紙條“max”線端的海綿墊，晾干后存檔。

3 與國內(nèi)市場上β-內(nèi)酰胺類等檢測產(chǎn)品的對比

上述產(chǎn)品與目前國內(nèi)市場上的主流產(chǎn)品的對比情況如表2所示。

4 產(chǎn)品優(yōu)點

試紙條產(chǎn)品與國外相關(guān)試紙條比較具有體積小、易儲存、攜帶方便、不需要儀器設(shè)備、操作簡單、可現(xiàn)場檢測且不需加熱、可通過肉眼判斷等優(yōu)點，特別適合奶站、乳品企業(yè)分公司進行原奶質(zhì)量控制。