末稍血靜置時間對血小板檢測結果的影響

孫家祥 李艷

末稍血靜置時間對血小板檢測結果的影響

孫家祥 李艷

目的 探討末稍血采集后靜置時間對血小板檢測結果的影響。 方法 隨機選取60例健康體檢者采集末稍血加入EDTA-K2抗凝管混勻后分別在0 min、5 min、10 min、15 min、30 min上機進行血細胞分析, 觀察血小板變化。同時取末稍用草酸胺血小板稀釋液行顯微鏡人工計數, 并以此作為血小板計數的參考。結果 ①60例中有41例各時間段血小板結果差異無統計學意義(P＞0.05)；有18例0 min與5 min血小板計數結果明顯減少(P＜0.01), 10 min以后才趨穩定；有1例在15 min以后才趨穩定。②與手工計數結果比較, 0 min與5 min血小板計數結果明顯降低, 差異非常顯著(P＜0.01)；10 min以后血小板計數結果趨于穩定, 10 min、15 min、30 min計數結果差異無統計學意義(P＞0.05), 分別與手工計數結果比較差異也無統計學意義(P＞0.05)。結論 末稍血采取后至少應放置10 min方能進行血小板計數, 放置15 min以后則更穩定。

末稍血；靜置時間；血小板計數；準確性

血細胞分析是目前臨床應用最重要的常規檢測項目之一, 國內實驗室普遍使用EDTA-K2抗凝靜脈血分析。但對于部分靜脈抽取有困難的特殊病人有時仍會采集末稍血進行檢測, 在門急診檢驗中更為普遍。實際工作中, 末稍血采取后在不同時間檢測血小板結果有時會有差異, 甚至會造成嚴重誤差, 因此檢測時間的規范尤為重要。但目前國內文獻道不一, 也暫無相關標準出臺。作者隨機選擇了60例健康體檢者采集末稍血后在不同時間進行血細胞分析, 以觀察血小板結果變化, 現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 隨機選取來本院健康體檢需行血細胞分析的60例個體采集末稍血, 均排出心、腦、肝、腎、肺等臟器的器質性及免疫性疾病。其中男35例,女25例, 年齡16~62歲,平均(32.5±13.3)歲。

1.2 儀器與材料 Sysmex-800i血細胞分析儀及配套試劑；Olympus雙目顯微鏡；EDTA-K2抗凝管；牛鮑氏血小板計數池；微型混勻振蕩器；草酸胺血小板稀釋液［1］；瑞一姬染色液。

1.3 檢測與分析 由臨床經驗豐富的高年資檢驗技師用BD一次性無痛采血針采集無名指末稍血約350 μl加入EDTA-K2抗凝管, 立即用微型混勻振蕩器混均。采集過程中盡可能避免過度擠壓造成組織液的混入。血液混勻后在0 min(即刻)、5 min、10 min、15 min、30 min上機進行血細胞檢測分析。同時取血20 μl加入0.38 ml草酸胺血小板稀釋液,按操作規程行顯微鏡人工計數, 并以此作為血小板計數的參考。

各時間段分別涂血片一張經瑞-姬染色觀察血小板分布情況。

1.4 統計學方法 所有數據取兩次平行計數均值。采用SPSS 11.0軟件包進行數據統計。數據以均數±標準差( x-±s)表示, 組間比較采用配對t檢驗進行數據分析, 以α=0.05為檢驗水準, P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同時間血小板檢測結果 與手工計數結果比較, 0 min與5 min血小板計數結果明顯減少, 差異有統計學意義(P＜0.01)；10 min以后血小板計數結果趨于穩定, 10 min、15 min、30 min計數結果差異無統計學意義(P＞0.05), 分別與手工計數結果比較差異無統計學意義(P＞0.05), 見表1。

表1 60例末稍血靜置不同時間及人工計數血小板檢測結果( x-±s, ×109/L)

2.2 不同時間血小板檢測結果差異所占比例 60例個體中, 有41例各時間段血小板結果差異無統計學意義(P＞0.05),占68.3%；有18例0 min與5 min血小板計數結果明顯降低(P＜0.01), 10 min以后才趨穩定, 占30%；有1例在15 min以后才趨穩定占1.7%。

2.3 血涂片血小板分布情況 經瑞-姬染色觀察,凡血小板計數結果偏低者,血涂片均顯示有血小板聚集或衛星現象；結果越低,聚集越明顯, 10 min以后這種聚集或衛星現象基本消失。

3 討論

發揮止血與凝血重要功能的血小板及其相關參數越來越受到廣泛關注,目前已有報道血小板參數與多種疾病相關,因此血小板在機體的作用已大大超出了傳統概念。但血小板參數的分析首先是建立在血小板計數的準確性之上, 保證計數的準確是其他參數的關鍵。一直以來, 檢驗工作者基本達成共識, 末稍血采取以后必須放置一段時間才能進行血小板計數, 但放置多長時間文獻報道不一。有認為放置5 min者,有認為放置15~30 min者, 還有認為測定最佳時間為采血后30~60 min［2-5］。而作者的研究結果表明, 并不是每個患者在采血后立即檢測都會造成血小板降低, 這種發生率為30%左右, 有98.3%的人在采血后10 min測定血小板即可獲得準確結果, 這與孫良宏的報道基本一致［6］, 15 min后檢測則更為穩定。在門急診工作中, 由于一般末稍血采取后, 均能在30 min內出具報告, 所以作者只研究了30 min內血小板變化情況。實際上, 血液采集后, 標本也不能放置太長, 否則會造成血小板變形自溶或產生構型改變, 導致儀器不正常識別,再次造成血小板計數假性降低。

在采血后立即檢測會造成血小板假性降低,多數學者認為血小板膜內附著許多微絲, 其主要成分為肌動蛋白和肌凝蛋白, 與微管環周束共同支持偽足的形成。當采集末梢全血時, 標本中或多或少混入少量組織液, 加之EDTA抗凝劑的存在, 促使血小板的形態立即發生變化, 這時血小板外膜形成的微小管游離端向外伸展與膜內的微絲共同作用,在血小板周圍形成絲狀偽足, 數個這樣的血小板偽足相互纏繞形成血小板假性聚集體, 在應用血液分析儀進行檢測時, 儀器誤認為是小紅細胞或小白細胞而不納入血小板計數范圍, 造成血小板計數假性降低。隨著時間延長, EDTA能使血小板由盤狀變為球狀, 血小板偽足回縮到胞質內, 相互纏繞的血小板解散, 再次回到自然姿態［7］, 從而血小板計數恢復正常。

因此,在門急診檢驗進行血細胞分析時,我們不能盲目求快,僅強調檢驗報告的及時性,而忽略報告本身帶來的誤差。建議末稍血采集后至少應放置10 min才能進行血小板計數, 這樣方能獲得準確結果, 放置15 min以后檢測則更穩定。

［1］ 葉應嫵, 王毓三, 申子瑜．全國臨床檢驗操作規程．第3版．南京：東南大學出版社, 2006:136．

［2］ 馬雨東.血細胞分析儀測定血小板時抗凝劑等影響因素分析.檢驗醫學與臨床, 2010,7(11):1078-1080.

［3］ 申蕙蕓, 崔靜.血液分析儀計數血小板假性異常的影響因素分析.實用醫技雜志, 2008,15(28):3863-3864.

［4］ 鄧宗奎.血液分析儀血小板計數的影響因素與全程質量控制.檢驗醫學與臨床, 2009,6(19):1688.

［5］ 程暉,劉更夫,袁桂榮.血小板計數偏低誤差實驗探討及對策.現代檢驗醫學雜志, 2006,21(5):91-92.

［6］ 孫良宏.末梢全血待測時間對白細胞及血小板計數的影響.中國現代藥物應用, 2010,4(3):59-60.

［7］ 汪玄文.血液分析儀血小板計數影響因素的探討.工企醫刊, 2010, 23(1):75-76.

Influence of standing time of peripheral blood to the results of platelets count

SUN Jia-xiang, LI Yan.
Department of clinical laboratory,The People's Hospital of Deyang City, Deyang 618000, China

Objective To explore the influence of standing time of peripheral blood after taking to the results of platelets count .Methods Randomly selected 60 cases of healthy check-up people and taken the peripheral blood to anticoagulant EDTA-K2 tube,which was detected at 0 minute, 5 minutes, 10 minutes, 15 minutes and 30 minutes after blending by automatic hematology analyzer.Observed changes in platelets .At the same time, the peripheral blood platelets diluented with oxalic acid amine diluent were counted through microscope by artificial,which platelets count as reference.Results ①of the 60 cases, 41 cases each time period showed no significant difference in platelets count (P＞ 0.05); 18 cases at 0 minute and 5 minute platelets significantly reduced (P<0.01), 10 minutes later it stabilized; there was one case platelets stabilized only after 15 minutes.②Comparison of results with the manual counting, platelets significantly reduced at 0 minutes and 5 minutes, the difference was significant (P<0.01); 10 minutes later the platelets count result tended to be stable, 10 minutes, 15 minutes, 30 minutes count results were not significantly different (P＞0.05), respectively, compared with manual counting results had no statistical significance (P>0.05).Conclusions Peripheral blood after taking should be placed at least 10 minutes for platelets count, after 15 minutes platelets are more stable.

Peripheral blood; Standing time; Platelets count; Accuracy

618000 四川德陽市人民醫院檢驗科