LKB1在子宮內膜樣腺癌中的表達及意義

李愛琳，柏興華，鄧博雅，姜彥多，李光

（1.中國醫科大學附屬第一醫院放療科，沈陽 110001；2.中國醫科大學附屬第一醫院婦科，沈陽 110001；3.中國人民解放軍第二零二醫院病理科，沈陽 110003）

LKB1（liver kinase B1，又稱 STK11）基因編碼絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，通過磷酸腺苷激活的蛋白激酶（AMP-activated proteinkinase，AMPK）途徑，下調哺乳動物雷帕霉素靶蛋白 （mammalian target of rapamycin，mTOR）活性，從而抑制細胞生長增殖、誘導細胞凋亡及抑制血管新生，是目前公認的抑癌基因［1～4］。在肺癌、宮頸癌等多種腫瘤中存在該基因的體細胞突變，其突變導致LKB1失活或下調，AMPK蛋白質不能正常激活，不再繼續向mTOR發出抑制信號，導致細胞在能量不足的情況下仍保持生長態勢，從而促進腫瘤發生發展［1，5，6］。Contreras 等［7，8］報道：在鼠模型中LKB1基因突變導致的LKB1表達下調引起高侵襲性子宮內膜樣腺癌的發生，而且LKB1表達缺失的子宮內膜樣腺癌對mTOR抑制劑雷帕霉素高度敏感［9］。目前，LKB1蛋白在人類子宮內膜樣腺癌組織的表達情況及其對子宮內膜樣腺癌發生的影響及與臨床病理因素之間的關系尚不清楚。本研究擬應用免疫組織化學方法檢測LKB1在子宮內膜樣腺癌及子宮內膜單純增生組織中的表達情況，并分析其與子宮內膜樣腺癌臨床病理特征及腫瘤微血管密度（microvessel density，MVD）的關系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

50例子宮內膜樣腺癌組織來自中國醫科大學附屬第一醫院及中國人民解放軍第二零二醫院2006年1月至2010年1月進行手術治療并經病理組織學檢查確診的手術標本。參照國際婦產科聯盟（Federation International of Gynecology and Obstetrics，FIGO）2009年分期標準：Ⅰ期26例，Ⅱ期11例，Ⅲ期 13例；其中高分化（G1）15例，中分化（G2）19例，低分化（G3）16例。所有標本均為原發性腫瘤，術前未接受放化療或激素治療。患者年齡31～66歲，平均54.98歲。同時選取在中國人民解放軍第二零二醫院經手術切除的病理診斷為子宮內膜單純性增生的30例子宮內膜組織進行對照研究。

1.2 主要試劑

濃縮型兔抗人多克隆抗體LKB1（1︰200；Abcam公司，美國）；即用型鼠抗人單克隆抗體CD34（福州邁新生物技術開發公司）；SP試劑盒（福州邁新生物技術開發公司）；DAB顯色試劑盒（福州邁新生物技術開發公司）。

1.3 免疫組織化學染色

組織蠟塊行4 μm厚連續切片，石蠟切片常規脫蠟。采用鏈霉素抗生素蛋白—過氧化物酶（SP）法檢測LKB1蛋白表達，以PBS代替一抗作為陰性對照。按照說明書進行操作。采用雙盲閱片法進行結果判定：細胞質染成淺黃色、黃色或棕黃色者為陽性細胞。在10個高倍視野下（×400）確定細胞染色強度及陽性率百分比。染色強度評分：0分：無色；1分：淺黃色；2分：黃色；3分：棕黃色。陽性細胞數評分：0分：0%，1分：1%～25%，2分：26%～50%，3分：51%～75%，4分＞75%。2項合計乘積為標本的分值，劃分為2組：陰性：0～3分；陽性：≥4分。MVD計數：在低倍鏡下挑選標本中腫瘤血管密集區，在高倍鏡視野下（×400）隨機選擇4個視野，計數CD34陽性的血管數，計數后以±s表示。在比較LKB1表達與子宮內膜樣腺癌MVD的聯系時，根據MVD值將腫瘤分為＜20、20～40、＞40 組。

1.4 統計學分析

采用SPSS 16.0軟件進行數據分析，應用χ2檢驗分析腫瘤組及對照組LKB1表達差異，應用χ2檢驗及Spearman非參數相關分析評價子宮內膜樣腺癌組織中LKB1表達與患者臨床病理參數和MVD的相關性，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 LKB1在子宮內膜樣腺癌、子宮內膜單純性增生組織中的表達及定位

LKB1蛋白在子宮內膜樣腺癌、子宮內膜單純性增生組織中均有表達，其陽性染色呈棕黃色顆粒彌漫性分布于細胞質（圖1）。子宮內膜樣腺癌組織中LKB1表達陽性率［42%（21/50）］明顯低于子宮內膜單純性增生組織［66.7%（20/30）］，差異有統計學意義（P=0.033）。

2.2 LKB1的表達與子宮內膜樣腺癌臨床病理特征及MVD的相關性

LKB1的表達與子宮內膜樣腺癌的病理分級、肌層浸潤相關，而與年齡、淋巴結轉移和FIGO分期無關（P＞0.05）。在病理分級G3的患者中LKB1的表達陽性率低于G1+G2的患者（18.8%vs 52.9%，P=0.022）；在肌層浸潤≥1/2的患者中LKB1的表達陽性率低于肌層浸潤＜1/2的患者（30.0%vs 45.0%，P=0.035）。此外，LKB1的表達與子宮內膜樣腺癌的MVD呈負相關，MVD值高的子宮內膜樣腺癌組織里LKB1表達下調（r=-0.374，P=0.030）。見表1及圖2。

表1 LKB1表達與腫瘤病理參數及MVD的關系Tab.1 Relationship between expression of LKB1 and clinicopathological parameters，MVD in endometrial cancer patients

3 討論

子宮內膜癌是發生于子宮內膜的上皮性惡性腫瘤，以來源于子宮內膜腺體的腺癌最常見，其致癌機制與癌基因、抑癌基因和DNA損傷修復基因的異常表達有關［10］。本研究結果表明：LKB1蛋白在子宮內膜樣腺癌組織中的表達低于單純子宮內膜增生組織中，差異有統計學意義（P=0.033）。Contreras等［7］發現在子宮內膜上皮LKB1突變的小鼠模型中，有53%（8/15）雌鼠在55周齡時發生子宮內膜樣腺癌，認為LKB1表達下調可導致雌鼠子宮內膜樣腺癌發病率升高，提示LKB1蛋白可能抑制子宮內膜樣腺癌發生，并推測其在人類子宮內膜樣腺癌中也存在同樣作用。此外，在乳腺癌及肺癌等其他腫瘤中，也觀察到腫瘤組織中LKB1蛋白的表達明顯降低［11，12］。以上結果均與本研究結果一致。

本研究結果顯示：LKB1的表達下調與子宮內膜樣腺癌低分化相關。Ji等［12］在肺癌中也證實LKB1表達缺失導致肺鱗癌的分化降低。但Contreras等［7］在LKB1表達下調的雌鼠中觀察到高分化子宮內膜樣腺癌的發生，也有LKB1表達與腫瘤分化無關的報道。這些結果的不一致可能與不同物種、疾病和樣本量有關，其機制還有待進一步探討。本研究結果顯示：LKB1的表達下調與子宮內膜樣腺癌的肌層浸潤深度呈正相關，這與Contreras等［7］報道的LKB1表達下調促進子宮內膜樣腺癌高侵襲性的結果一致，也與LKB1在肺癌和乳腺癌中的角色相符［11，12］。但本研究中并未發現LKB1表達與淋巴結轉移及FIGO分期的關系。

Zhuang等［11］報道在人類乳腺癌中LKB1蛋白過表達可以降低MVD，推測LKB1可能通過抑制VEGF表達從而抑制血管新生。本研究發現在子宮內膜樣腺癌中LKB1的表達上調與腫瘤組織MVD呈負相關，推測LKB1可能抑制子宮內膜樣腺癌血管生成過程，但此機制有待進一步研究證明。

綜上所述，LKB1蛋白表達下調與子宮內膜樣腺癌的發生發展密切相關，LKB1蛋白表達的檢測有可能成為子宮內膜樣腺癌早期診斷的分子標志，同時也可能用于子宮內膜樣腺癌侵襲能力的預測。盡管對LKB1抑癌基因在子宮內膜樣腺癌發生、侵襲和血管生成中的作用有了初步認識，但其詳細的作用機制仍未完全明確，它在判斷分期、轉移和預后中的價值也有待于進一步研究。

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