MB-80E細菌內毒素檢測系統在血站應用及意義

周曉紅 常素華 紀亮

《血站技術操作規程》2012年版中把血站使用的一次性采血袋內毒素檢測不作為必須檢測項目，但本血站于2006年初采用MB-80E細菌內毒素檢測儀對購入血站的一次性血袋和注射器進行內毒素定量檢測，經過6年的使用，確認應用該系統定量檢測血袋、注射器中污染內毒素的方法可靠，能提供準確的結果?，F將檢測不同規格血袋、注射器內毒素的結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 檢測對象 一次性采血器材(包括注射器、血袋)。

1.2 主要試劑

1.2.1 EKT-5 mset動態內毒素檢測試劑盒(規格:前處理液0.90 ml，主劑:0.2 ml)(北京金山川科技發展有限公司提供)每批試劑均在有效期內。

1.2.2 內毒素工作質控品效價:1EU/ml(批號050801.050802.070618.090525.100709.110507)。

1.3 儀器 MB-80E細菌內毒素檢測儀、混勻器(北京金山川科技發展有限公司)恒溫培養箱(湖北黃石醫療器械有限公司)。

1.4 檢測方法 動態濁度法。

1.4.1 樣品檢測 ①血袋檢測:首先打開血袋各通道，將各聯袋中液體混勻，排入真空袋，吸取真空袋內液體100μl加入前處理液0.9 ml用水中混勻后，再取二者混合后液體100μl在加入另一支前處理液0.9 ml用水中(100倍稀釋)，取混勻后的稀釋液0.20 ml加入反應主試劑中溶解，轉入無熱源平底玻璃管中，用MB-80E細菌內毒素檢測儀進行自動檢測。②無菌注射器檢測:至少取3支，抽取0.9%Nacl注射液至總刻度容量，液體振洗兩次，封閉在(37±2)℃恒溫箱中，保持2 h取原液200 ul加入反應主劑中在混勻器中混勻后移入無熱源平底玻璃管內用MB-80E細菌內毒素檢測儀進行自動檢測。

1.4.2 內毒素工作質控品檢測 取質控品稀釋液1 ml添加到內毒素工作質控品中，封口后置旋渦混合器上振搖15 min，作為內毒素工作質控品對照液，從該液中取0.20 ml加入試劑盒反應主劑中溶解，轉入無熱源平底玻璃管中，用MB-80E細菌內毒素檢測儀進行自動檢測。

1.4.3 標準內毒素配制溶液 制成3個濃度的稀釋液最低濃度高于所用的試劑標示的檢測限，每個濃度做3支平行管，同時做2支陰性對照，根據線性回歸分析，相關系數均值r=0.987。

1.4.4 干擾試驗 選擇標準線最近中點的內毒素濃度作為供試品干擾試驗中添加的內毒素濃度，計算內毒素回收率。

2 結果

見表1。

表1 一次性采血器材細菌內毒素檢測結果

3 討論

從表中可見，內毒素質控品檢測結果均在規定范圍內(0.5～2.0EU/ml)表明每批血袋、注射器內毒素檢測數據準確、可靠。干擾試驗內毒素回收率范圍在50% ～200%，表明在此實驗條件下供試品溶液已無干擾。

細菌內毒素檢測要求條件非常高，對檢測所使用的試管和一次性吸頭必須做到去熱源，實驗環境最好在百級凈化條件下進行。如果去熱源的試管和吸頭達不到標準或環境條件太差，容易出現假陽性結果;另一方面，實驗人員在操作過程中，鱟試劑和細菌內毒素標準品加入的量一定要準確，如果加入的量過多或過少則容易發生假陽性或假陰性結果，同時向測定試管內加入液體時不要出現氣泡，以免影響檢測結果。

內毒素是一個強力的熱源物質，每毫升血液中達皮克級的內毒素就能使人發燒。內毒素血癥可能是免疫低下患者原因不明發燒的因素之一。

通過對血站一次性采血器材中內毒素的定量檢測，不僅可以直觀反映一次性采血器材的內在安全，而且對于血站選擇一次性采血器材的供應商具有重要的參考價值。用MB-80E細菌內毒素檢測系統檢測血袋中微量污染內毒素，快速、準確。檢測數據均符合國家藥品標準[1，2](5.56EU/ml)，表明選擇生產廠家的產品可信賴.因此，保證采集血液安全，嚴格控制每一批一次性采血器材中的內毒素是十分必要的。

[1]國家藥品監督管理局.國家藥品標準.血液保存液Ⅲ.WS-10001-(HD-0176)-2002.

[2]國家藥品監督管理局.國家藥品標準.紅細胞保存液.WS-10001-(HD-0230)-2002.