人體脂肪的高效液相色譜-蒸發光散射分析

王 磊，史曉凡，許英健，張 芳

（1.南京市公安局 雨花臺公安分局，江蘇 南京 210041；2.中國刑事警察學院，遼寧 沈陽 110035）

微量油脂是各種刑事案件和交通事故案件現場中一種常見的微量物證，特別是在兇殺、焚尸、碎尸、分尸等惡性案件中，準確地鑒定現場遺留的油脂殘渣是否是人體油脂，對于案件性質的確定、原始現場的判斷、作案工具的認定至關重要。因此，建立一種科學、有效的人體油脂鑒定方法是十分必要的。

關于動物油脂的分析方法，國內外的食品科學、油脂學、醫藥衛生等領域的學者們進行了很多相關性的研究，建立了一些分析方法，刑事科學技術領域中也有一些文獻報導[1-2]。主要有氣相色譜法[3-5]，氣-質聯用技術[5-7]，紅外光譜法[8-9]等。

人體脂肪的主要組分是高級脂肪酸甘油酯，其分子結構中只含有三個酯基，無其它發色團或助色團存在，缺乏適當的適用于紫外檢測器進行檢測的發色團和助色團，難以采用高效液相色譜－紫外檢測法對其組成成分進行分離分析。蒸發光散射檢測器是一種通用型的檢測器，它不同于紫外檢測器和熒光檢測器，其響應不依賴于樣品化學性質，任何揮發性低于流動相的樣品在蒸發光散射檢測器上都可以產生響應，不受其官能團的影響。對于人體油脂中的各種高級脂肪酸甘油酯組分均有響應。因此，本文采用高效液相色譜-蒸發光散射檢測法（HPLC-ELSD）對人體脂肪進行種屬的分析研究。

1 材料與方法

1.1 實驗樣品

人體油脂、豬脂、牛脂、羊脂、鴨脂樣品。

1.2 試劑與甘油三酯標準品

乙腈（色譜純）、丙酮、二氯甲烷、冰乙酸（均為分析純）、蒸餾水；1-棕櫚酸-2-油酸-3-硬件脂酸甘油酯（POSt）、1，2-肉豆寇酸-3-棕櫚酸甘油酯（MMP）、1，3-硬脂酸-2-棕櫚酸甘油酯（StPSt）、1，3-油酸-2-棕櫚酸甘油酯（OPO）（均為色譜純）。

1.3 儀器及條件

安捷倫1100液相色譜儀，蒸發光散射檢測器（SOFTA-300S）；

色譜柱：C18柱4μm（3.9mm×150 mm）；柱溫：35℃。

1.4 樣品制備

分別取約2mg上述人體脂肪及動物油脂樣品，丙酮溶解，油脂溶液進行HPLC-ELSD分析；將人體脂肪分別進行日曬至腐敗、焚燒、水煮、烘烤等處理，處理后的人體脂肪樣品如上所述用丙酮溶解提取，進行HPLC-ELSD分析。

2 結果與討論

2.1 人體油脂HPLC-ELSD分析條件的選擇

以不同配比的二氯甲烷-乙腈、冰乙酸的濃度、漂移管溫度為三個實驗因素，用正交實驗設計法進行分析條件的選擇。每個因素取三個水平、三因素三水平，應用正交設計表，組成9種HPLC-ELSD分析條件進行正交試驗（見表1）。

表1 三因素三水平實驗設計表

正交實驗結果表明，改變二氯甲烷與乙腈的配比，對油脂中各組分的分離度沒有太大的影響，也沒有分離出新的組分，只是隨著乙腈比例的增大，色譜峰的保留時間延長，峰形變寬；加入冰乙酸，抑制油脂中游離脂肪酸的解離，增強其在固定相上的保留；而漂移管溫度在60℃和70℃時，油脂的響應值較高。因此確定人體脂肪HPLC-ELSD分析條件是，流動相：二氯甲烷－乙腈－冰乙酸（30∶70∶0.2 v/v/v），漂移管溫度：70℃。

2.2 人體油脂種屬的HPLC-ELSD分析

在確定的HPLC-ELSD分析體系下，人體油脂和常見的動物油脂均得到了有效的分離分析。并且人體油脂與其他常見動物油脂的色譜特征顯著不同，在肉豆蔻酸-肉豆蔻酸-棕櫚酸甘油酯（MMP）前有二個相對保留值為0.77、0.83較強的特征色譜峰，動物油脂此色譜峰較弱；人體油脂的棕櫚酸-油酸-硬脂酸甘油酯（POSt）色譜峰較弱，動物油脂則較強；動物油脂中均含有硬脂酸-棕櫚酸-硬脂酸甘油酯（StPSt）組分，而人體油脂中無此組分；人體油脂中MMP的相對含量較高，動物油脂則較低（見圖1）。

圖1 人體油脂及四種動物油脂的HPLC-EL

58個不同個體人體脂肪樣品HPLC-ELSD分析結果表明，不同個體人體脂肪的色譜特征相同，色譜圖中主要色譜峰的峰數相同，色譜峰的相對保留時間相近，但色譜峰的相對峰面積比有所不同（見圖2）。

圖2 不同個體人體油脂HPLC-ELSD圖

2.3 不同條件處理后人體脂肪的HPLC-ELSD分析

研究中分別對腐敗、焚燒、烘烤、水煮處理后的人體油脂、豬脂進行了HPLC-ELSD分析。結果表明，經過各種人為處理和自然環境條件下保存至腐敗后，油脂會發生一些酸敗、分解等反應，但其主要組分-高組脂肪酸甘油酯不會全部分解，仍會有脂肪酸甘油酯存在，所得液相色譜圖中仍可反映人體脂肪的色譜特征（見圖3）。

2.4 案例應用

2011年4月5日，哈爾濱市某區王某（女）被殺害后，尸體被焚燒。提取焚尸現場的玉米稈兒，被害人焚燒后的衣服殘片。經檢驗，從玉米稈兒、焚燒后紡織品殘片上檢出人體油脂（見圖4）。

3 結論

在本論文所建立的動物油脂高效液相色譜-蒸發光散射檢測體系下，人體油脂中各種脂肪酸甘油組分得到了有效的分離分析，人體油脂與動物油脂色譜特征差異顯著，根據所得色譜數據能夠準確地對人體油脂的種屬進行準確的鑒定，且檢驗結果不受檢材存在環境的干擾。

圖3 不同條件處理后人體油脂的HPLC-ELSD圖

圖4 麥桿提取物中人體油脂的HPLC-ELSD圖

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