鹽酸地芬尼多雜質烯化合物的制備及結構確證

曹鳳習，劉 暉 ，靳茂禮 ，周建敏，劉 珠

(1.河北省石家莊市食品藥品檢驗所，河北 石家莊 050031;2.石藥集團新諾威制藥股份有限公司，河北 石家莊 050031)

鹽酸地芬尼多(difenidol hydrochloride)是臨床常用的抗暈止吐藥，用于治療高血壓、美尼爾氏綜合征等引起的眩暈癥，口服吸收迅速，療效確切。鹽酸地芬尼多化學名為α，α－二苯基－1－哌啶丁醇鹽酸鹽，系由1，3－氯溴丙烷為原料，經烷基化、格式反應、水解、成鹽而得[1－2]。在其生產過程中極易產生1個主要雜質，該雜質是生產過程中因酸性介質而產生的鹽酸地芬尼多的脫水產物，依據1990年版《中國藥典(二部)》藥典注釋[2]及相關文獻[3]，可判定其主要雜質為1，1－二苯基－4－哌啶－1－丁烯鹽酸鹽(簡稱烯化合物)。為了更好地控制產品質量，擬對該雜質進行定量測定。由于目前沒有雜質對照品，筆者參考文獻[3]制備出烯化合物精制品，并通過紅外、紫外、高效液相色譜、質譜等確證其結構，結果與文獻[3，5]基本一致;并對制備出的烯化合物精制品進行標定，以此作為烯化合物對照品，可用于鹽酸地芬尼多原料及其制劑有關物質檢查中雜質烯化合物的定量測定[6]。

1 儀器與試藥

ABI3200型LC－MS(美國AB公司);LC－20AD型高效液相色譜儀(日本島津公司)。鹽酸地芬尼多原料(湖南湘江千金藥業有限公司，批號為080206);甲醇、三乙胺為色譜純(進口)，其余試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 制備

取鹽酸地芬尼多原料2 g，加乙醇20 mL使溶解，再加2 mol/L的鹽酸溶液10 mL，置60℃水浴中加熱15 min，取出，蒸干，得酸化產物;加二氯乙烷40 mL，溫熱使溶解，邊搖邊滴入石油醚(沸程90～120℃)至微顯混濁，待溶劑自然揮散，析出結晶;再重結晶，得無色片狀結晶，即烯化合物。干燥后測其熔點為173.2～173.9 ℃。

2.2 結構確證

2.2.1 檢測條件

液相色譜部分:色譜柱為VP－ODS C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流動相為甲醇 －0.5%三乙胺溶液(用冰醋酸調節 pH至 4.0)－ 甲醇(44 ∶56);流速為 1.0 mL/min;柱溫 30 ℃ ;進樣量 5 μL。

質譜部分:電噴霧離子化正離子檢測方式(ESI+);質核比范圍 200～400;離子源電壓 5 000 V;霧化氣流速 10 L/min(高純氮氣)，加熱輔助氣流速10 L/min(高純氮氣)，氣簾氣流速10 L/min(壓縮空氣);離子源溫度400℃。錐孔電壓10 V，去簇電壓65 V，碰撞能量25 eV，檢測方式為全掃描一級質譜、選擇離子二級全掃描質譜檢測方式。

2.2.2 溶液配制

精密稱取烯化合物精制品適量，加甲醇溶解并稀釋成每1mL中含烯化物0.5 μg的溶液，作為對照品溶液。取本品25 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加甲醇適量，振搖使溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.2.3 烯化合物精制品色譜、光譜及質譜行為

采用正離子檢測方式對雜質烯化物精制品溶液進行高效液相色譜(HPLC)、質譜(MS)和二級串聯質譜(MS/MS)分析，保留時間為14.27 min，準分子離子[M+H]+峰 m/z為 292;對 m/z為292進行二級全掃描質譜分析，產生的主要碎片離子有 m/z 129，91，推測其質譜裂解途徑如圖1至圖5所示。

2.2.4 供試品定性檢測

在相同的色譜及質譜條件下，對供試品溶液進行HPLC、MS和MS/MS分析，檢測到在保留時間為14.27 min，準分子離子[M+H]+峰 m/z為292;對 m/z為292進行二級全掃描質譜分析，產生與烯化合物精制品相同的碎片離子，且紫外光譜、保留時間均與烯化合物精制品相同，紫外圖譜及液相色譜圖見圖6和圖7。結合紫外光譜、液相色譜保留時間及準分子離子和二級質譜裂解碎片等幾方面的信息，可以證明供試品溶液產生的主要雜質(即保留時間為14.27 min的色譜峰)與通過將鹽酸地芬尼多酸化得到的烯化物精制品一致。

2.2.5 紅外光譜定性

取烯化合物結晶在紅外分光光度計上檢測、分析，紅外光譜圖見圖 8。可見，3 030，3 053，3 077 cm－1(υC=C－H)，2 397 ～2 601 cm－1(υ+NH)，1 638 cm－1(υC=C)，1 600 ～1 440 cm－1(υ苯環骨架)，762，697 cm－1(δ苯環相鄰5H);與文獻[3]基本一致。結合紫外光譜、紅外光譜、液相色譜保留時間及準分子離子和二級質譜裂解碎片等幾方面的信息，可以進一步證明將鹽酸地芬尼多酸化得到的結晶即為烯化合物，供試液中產生的主要雜質即為烯化合物。

2.3 標定

色譜條件同鹽酸地芬尼多有關物質檢查[4]，采用VP－ODS C18色譜柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm)，以 0.5%三乙胺溶液(用磷酸調PH 至 4.0)－甲醇(44∶56)為流動相，流速為 0.8 mL/min;檢測波長為210 nm，柱溫30℃。取烯化合物精制品25 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加流動相適量，振搖使溶解，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液;精密量取20 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按面積歸一化法計算烯化合物的含量。結果樣品含量為99.96%，表明該烯化合物精制品純度很高，可以作為對照品使用。

3 討論

在反相HPLC法測定鹽酸地芬尼多原料的有關物質研究中發現，在將原料進行酸破壞時，酸化過頭，液相色譜圖中鹽酸地芬尼多主峰幾乎全部轉化為其主要雜質。由此結合文獻，采用鹽酸地芬尼多原料經酸化處理，再提取得到結晶，經結構確證，此結晶即為烯化合物，與鹽酸地芬尼多產生的主要雜質保留時間一致，故確定鹽酸地芬尼多產生的主要雜質為烯化合物。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:化學工業出版社，2005:490.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典1990年版二部藥典注釋[M].北京:化學工業出版社，1990:513－515.

[3]汪文濤.眩暈停中的雜質及其檢定[J].藥物分析雜志，1984，4(1):8－12.

[4]曹鳳習，姜建國，劉紅莉.RP－HPLC測定鹽酸地芬尼多原料的有關物質[J].中國現代應用藥學，2009，26(8):661 －664.

[5]張茜茹，曹鳳習，姜建國.高效液相色譜－電噴霧電離－質譜法分析鹽酸地芬尼多的相關物質[J].中國藥業，2010，19(10):41－42.

[6]曹鳳習，劉紅莉.高效液相色譜法測定鹽酸地芬尼多原料中雜質烯化合物的含量[J].中國藥業，2011，20(5):19－20.