高效液相色譜法測定偏癱復原膠囊中阿魏酸含量

張 杰 ，趙文法 ，王 振

（1.山東省聊城市藥品檢驗所，山東 聊城 252000； 2.山東中醫藥大學，山東 濟南 250355）

偏癱復原膠囊處方來源于聊城市中醫院名老中醫的臨床經驗方，由川芎、當歸等6味藥組方，有補氣活血、祛風化痰的功效，用于氣虛血瘀、風痰阻絡引起的中風癱瘓、半身不遂、口眼歪斜、痰盛氣虧、言語不清、足膝浮腫、行步艱難、筋骨疼痛、手足拘攣。此方已在臨床使用多年，實踐證明其組方合理，療效確切。2010年版《中國藥典(一部)》收載的川芎、當歸都采用了高效液相色譜（HPLC）法控制其中阿魏酸的含量[1]。相關文獻報道多采用反相高效液相色譜法測定含有當歸和川芎的復方制劑中的阿魏酸的含量[2－6]，亦有少數采用分光光度法、波層掃描法等來檢測阿魏酸的含量[7－10]。本試驗在參考大量文獻的基礎上，采用HPLC法對偏癱復原膠囊中主要成分阿魏酸進行了含量測定，報道如下。

1 儀器與試藥

Agilent1200型高效液相色譜系統（美國安捷倫公司）；BT125D型電子分析天平（北京賽多利斯天平有限公司）；KQ100型超聲波藥品處理機（昆山市超聲儀器有限公司）。阿魏酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110773－200611）；偏癱復原膠囊（聊城市中醫醫院，批號分別為 201202001，201202002，201202003）；甲醇（色譜純，天津賽孚瑞科技有限公司），其他化學試劑均為市售分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：Diamonsil C18柱（250 mm ×4.6mm，5 μm）；流動相：70% 甲醇 －0.1% 磷酸水溶液（30 ∶70）；波長：320 nm；流速：1.0 m L ／min；柱溫：30 ℃；進樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

避光操作，精密稱取經五氧化二磷減壓干燥12 h的阿魏酸對照品適量，精密稱定，加70%甲醇稀釋成10μg／mL的溶液，即得對照品溶液。避光操作，取本品內容物約1.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，密塞，稱定質量，水浴加熱回流30 min，放冷至室溫，再稱定質量，用70%甲醇補足減失的質量，搖勻，取續濾液，即得供試品溶液。取按處方不加川芎和當歸的樣品適量，依照供試品溶液制備方法制備陰性對照品溶液。

2.3 方法學考察

干擾試驗：分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，按2.1項下條件測定。結果表明，陰性對照品溶液中在與阿魏酸對照品溶液保留時間相應的位置無色譜峰，說明處方中其他組分對測定無干擾。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關系考察：取阿魏酸對照品，精密稱定，制成 0.1，1，5，10，20，50，100 μg／m L 的溶液，在 2.1 項色譜條件下，分別注入液相色譜儀測定，以質量濃度為橫坐標（X），峰面積為縱坐標（Y），繪制標準曲線，計算回歸方程為 Y＝57.682X＋5.370 6，相關系數 r＝1.000。結果表明，阿魏酸質量濃度在 0.1～100μg／mL 范圍內與峰面積呈良好線性關系。

精密度試驗：取同一對照品溶液，按2.1項下色譜條件測定，進樣10μL，連續進樣6次，以峰面積計算。結果阿魏酸的 RSD為0.90%，表明儀器精密度良好。

穩定性試驗：依法制備供試品溶液，分別在 0，2，6，12，20，24 h時進樣 10μL，以峰面積計算，結果阿魏酸的 RSD為1.44%，表明供試品溶液在24 h內穩定。

重現性試驗：取同一批號的樣品，依法制備供試品溶液，平行制備5份，按2.1項色譜條件測定，以峰面積計算含量。結果阿魏酸的 RSD為2.20%，表明方法重現性符合要求。

加樣回收試驗：精密稱取已知含量的供試品（批號為201202001，含量為 0.10 mg ／粒，標示裝量為 0.4 g）精密加入一定量的阿魏酸對照品，按2.2項下操作，同時制備6份，按2.1項下色譜條件測定，結果見表1。

表1 阿魏酸加樣回收試驗結果（n＝5）

2.4 樣品含量測定

對3批樣品進行測定，分別按2.2項下方法制備樣品，按2.1項下色譜條件測定，以峰面積計算含量。結果批號為201202001，201202002，2012003的樣品含量分別為 0.104，0.105，0.107mg ／粒。

3 討論

預試驗時比較了加熱回流30min、超聲30min和超聲60min等不同的方法，結果加熱回流30 min有利于供試品溶液的制備，測定的阿魏酸含量較高。

阿魏酸溶液在堿環境中易分解，選用酸性的0.1%磷酸水溶液作為流動相，而且阿魏酸對光不穩定，試驗過程中應避光操作。試驗表明供試品溶液在24 h內穩定性較好。

本研究參考國內外大量有關阿魏酸含量測定方法的文獻資料并多次試驗，結果顯示，本方法簡便、準確，結果穩定，可用于控制偏癱復原膠囊的質量及本品中阿魏酸含量的質量評價。

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