管碟法測(cè)定土霉素片含量的影響因素分析

黃依玲

(廣西壯族自治區(qū)南寧市食品藥品檢驗(yàn)所，廣西 南寧 530001)

土霉素片為四環(huán)素類抗生素，目前部頒標(biāo)準(zhǔn)仍采用微生物檢定法[1]測(cè)定其含量。在實(shí)際操作中發(fā)現(xiàn)，影響此法測(cè)定結(jié)果的因素較多，若不注意排除可導(dǎo)致結(jié)果偏差較大。為此，筆者對(duì)該法的部分操作環(huán)節(jié)進(jìn)行探討，分析產(chǎn)生誤差的原因，以保證測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。

1 儀器與試藥

ZY－300A型抑菌圈自動(dòng)測(cè)量?jī)x(北京先驅(qū)威鋒技術(shù)開發(fā)公司);梅特勒－托利多AB265－S型電子天平(梅特勒－托利多儀器有限公司)。試驗(yàn)菌藤黃微球菌[CMCC(B)28 001]來(lái)源于廣西食品藥品檢驗(yàn)所;菌懸液依法制備[2];培養(yǎng)基抗生素微生物檢定培養(yǎng)基Ⅱ號(hào)(pH為6.5～6.6，北京山藥科技開發(fā)公司，批號(hào)為080428);滅菌磷酸鹽緩沖液(pH=6.0)。土霉素片(某制藥有限公司，規(guī)格為每片0.25 g∶25萬(wàn)單位，批號(hào)為20100708);土霉素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為130305－200720)。

2 方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定方法

按部頒標(biāo)準(zhǔn)[1]，取土霉素片10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量(約相當(dāng)于土霉素0.25g)，先加入0.1mol/L鹽酸溶液50 mL，使土霉素溶解，再加滅菌用水至250 mL，搖勻，依法測(cè)定。

2.2 影響因素試驗(yàn)

2.2.1 鋼管的清潔度及重量均勻度

A管，使用過(guò)的鋼管滅菌后先用水洗滌，超聲30 min，水沖洗，再用試驗(yàn)用水沖洗3遍，晾干滅菌后使用;B管，使用過(guò)的鋼管滅菌后用燒開的肥皂液浸泡，趁熱用小毛刷逐個(gè)刷干凈、水沖洗，再用試驗(yàn)用水沖洗3遍，晾干滅菌后使用;C管，將B鋼管進(jìn)行清理、剔除有銹斑或有缺口者并逐個(gè)稱量，按其重量分套，每套鋼管重量差異不超過(guò)±50 mg。按部頒標(biāo)準(zhǔn)[1]要求，分別用A，B，C鋼管進(jìn)行試驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果見表1。可見，使用C管與A管的檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著性差異(t=2.191＜2.776，P＞0.05)、與使用 B 管的檢測(cè)結(jié)果也無(wú)顯著性差異(t=0.611 4＜2.776，P＞0.05);但使用A管檢測(cè)結(jié)果的極差為7%、可信限率為8.6% ～11.8%，使用B管檢測(cè)結(jié)果的極差為3.8%、可信限率為5.4% ～7.9%，兩者每組結(jié)果的可信限率均未達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[3]的要求(5%)。使用C管檢測(cè)結(jié)果的極差為2.6%，可信限率為3.5% ～5.2%。檢驗(yàn)結(jié)果的誤差及可信限率依次為A＞B＞C。結(jié)果表明，使用C管檢測(cè)結(jié)果的誤差小、可信限率較理想，可達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[3]的要求。

表1 鋼管的清潔度及重量均勻度影響因素測(cè)定結(jié)果[含量(%)]

2.2.2 制樣方法

按部頒標(biāo)準(zhǔn)[1]操作，使用C鋼管，分別按下述方法試驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果見表2。方法一，精密稱取樣品，置乳缽中，先加入少量0.1 mol/L鹽酸溶液研磨，再用剩余0.1 mol/L鹽酸溶液將樣品分次轉(zhuǎn)入250 mL容量瓶中，超聲約30 min，再加滅菌用水至刻度，搖勻;方法二，精密稱取樣品，置250 mL容量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液50 mL，直接超聲約30 min，再加滅菌用水至刻度，搖勻。結(jié)果表明，兩種制樣方法的檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著性差異(t=0.064 ＜2.776，P＞ 0.05)。

表2 制樣方法影響因素試驗(yàn)結(jié)果[含量(%)]

2.2.3 抑菌圈擺放角度和位置

對(duì)同一區(qū)組平皿的抑菌圈掃描，抑菌圈擺放的位置不同，兩個(gè)低劑量(S1，T1)抑菌圈幾乎在同一水平，或S1高于T1的角度約為 15 ～ 20°，45°，65°時(shí)，所測(cè)得結(jié)果有較大差異。結(jié)果見表3。抑菌圈擺放的位置不同，結(jié)果極差為7%;當(dāng)S1圈高T1圈的角度達(dá)到或大于45°時(shí)，結(jié)果明顯偏低。

表3 抑菌圈擺放位置影響因素試驗(yàn)結(jié)果[含量(%)]

3 討論

使用過(guò)的鋼管容易殘留試驗(yàn)中的抗生素，應(yīng)將滅菌后的鋼管用燒開的肥皂液浸泡，趁熱用小毛刷逐個(gè)刷干凈后用水沖洗，再用試驗(yàn)用水沖洗3遍，確保清除吸附于鋼管的殘留物。鋼管久用易發(fā)灰、發(fā)暗，出現(xiàn)銹蝕或有缺口，應(yīng)及時(shí)清理剔除，將仍能用的逐個(gè)稱量，按其重量分套(每套鋼圈重量差異不超過(guò)±50 mg)使用。本試驗(yàn)所用的抑菌圈自動(dòng)測(cè)量?jī)x每年或半年均定期進(jìn)行圖像、同一抑菌圈在不同位置測(cè)量、回收率試驗(yàn)誤差、重復(fù)測(cè)量的精密度等指標(biāo)考察(試驗(yàn)用菌為短小芽孢桿菌，對(duì)照品為紅霉素或硫酸慶大霉素)。本試驗(yàn)是在上述各項(xiàng)考察指標(biāo)均達(dá)到檢定規(guī)程要求下進(jìn)行的，之所以出現(xiàn)掃描時(shí)抑菌圈擺放的位置不同，所測(cè)得結(jié)果有較大差異，有可能是與儀器本身掃描的角度有關(guān)，或與所用試驗(yàn)菌不同有關(guān)。建議在用藤黃微球菌進(jìn)行土霉素效價(jià)測(cè)定時(shí)，應(yīng)注意抑菌圈擺放的位置，S1圈高T1圈的角度約20°即可，不應(yīng)過(guò)大。抑菌圈自動(dòng)測(cè)量?jī)x應(yīng)定期進(jìn)行檢定，符合要求才使用。

[1]WS1－C2－0002－89，衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·抗生素藥品(第一冊(cè))[S].

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(二部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:附錄93－附錄98.

[3]中國(guó)藥品生物制品檢定所.中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010:286－295.