抗癆膠囊與抗癆丸中有效成分巖白菜素的測定

溫俊霞， 任艷平， 朱 紅， 張蘭桐*

(1.河北省胸科醫院藥學部 河北 石家莊050041;2.河北醫科大學藥學院藥物分析教研室 河北 石家莊050017)

抗癆膠囊與抗癆丸主要功能為散瘀止血，祛痰止咳，是用于治療浸潤性肺結核、肺虛久咳，痰中帶血的中成藥。這兩種藥物的主要成分均為矮地茶、百部、穿破石、五指毛桃、白及、桑白皮，其藥材組方比例也相同。但其質量控制標準均沿用部頒標準 (抗癆膠囊為中藥成方制劑第三冊WS3-B-0555-91，抗癆丸為中藥成方制劑第七冊WS3-B-1336-93)，僅用化學鑒別法來做主要成分鑒別，質量控制標準較為單一。

巖白菜素 (Bergenin)是抗癆膠囊與抗癆丸的主藥矮地茶的主要有效成分，屬于異香豆素類化合物，具有良好的鎮咳、祛痰、抗炎、護肝、抗病毒和神經保護作用，現已廣泛應用于臨床。矮地茶Japanese Ardisia Herb為紫金牛科植物的干燥全草，為抗癆膠囊與抗癆丸組方中的主藥。《中國藥典》(2010年版)對矮地茶中巖白菜素進行定量測定，因此通過對抗癆膠囊及抗癆丸中有效成分巖白菜素進行定性、定量測定，可在一定程度上探討這兩種制劑的質量控制標準，從而為提高其質量控制標準提供依據。

1 儀器與材料

美國Agilent-1200高效液相色譜儀 (四元泵，自動進樣器，在線脫氣機，柱溫箱);Agilent chem office色譜工作站;二極管陣列檢測器 (DAD);色譜柱為DiamonsilTMC18柱(250 mm×4.6 mm，5μm);KQ-100A型超聲清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司);LG16-W型離心機 (北京醫用離心機廠);BP211D型十萬分之一天平 (德國Sartorius公司)。

巖白菜素對照品 (100315124-10473563)由上海同田生物技術有限公司提供;不同批次抗癆膠囊1(制藥有限公司1)與抗癆丸 (制藥有限公司2)均購于河北省胸科醫院，抗癆膠囊2(制藥有限公司3)購于石家莊康泰大藥房，詳見表1。甲醇、乙腈均為色譜純 (美國Tedia試劑公司)，水為二次重蒸水，其余試劑均為分析純。

表1 樣品批次及來源

2 方法與結果

2.1 色譜條件［1-13］DiamonsilTMC18色譜柱 (250 mm×4.6 mm，5μm);檢測波長為275 nm;柱溫為30℃;以甲醇-水 (20∶80)為流動相進行等度洗脫;體積流量1.0 mL/min;進樣體積10μL。

2.2 溶液的制備［1-13］

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取巖白菜素對照品適量，用甲醇配制成質量濃度為0.6 mg/mL的對照品溶液，即得對照品溶液。

2.2.2 樣品溶液的制備 分別取抗癆膠囊、抗癆丸內容物粉碎，過60篩，精密稱取0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入75%甲醇25 mL，搖勻，精密稱定，超聲提取40 min，取出，放冷，再精密稱定，缺失的質量用75%甲醇補足，搖勻，離心10 min(10 000 r/min)取上清液，即得。

2.3 標準曲線的制備 精密吸取對照品貯備液0.625、1.25、2.5、5、10 mL，分別置50 mL量瓶中，進樣并記錄峰面積，以各成分的峰面積對應質量濃度來進行線性回歸分析，以巖白菜素質量濃度為橫坐標 (X)，相應峰面積為縱坐標 (Y)，繪制標準曲線，經回歸處理得回歸方程為Y=14 378X+33.702(r=0.999 9)，結果表明，巖白菜素質量濃度在7.823×10－3～0.625 8 mg/mL呈良好的線性關系。

2.4 精密度試驗 按照2.1項下方法，在同一天內對同一份樣品連續測定6次，所得數據經分析后為日內精密度;在連續3 d內對同一份樣品進行測定，所得數據經分析后為日間精密度。結果表明巖白菜素的日內、日間精密度RSD分別為0.42%和1.56%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩定性試驗 按照2.2.2項下方法制備供試品溶液，分別于0、4、8、12、24 h取供試品溶液進樣并測定峰面積。結果表明巖白菜素含有量的RSD均小于0.8%，表明該方法于24 h內基本穩定。

2.6 加樣回收率試驗 分別取已測定的抗癆膠囊1與抗癆丸3批，各取3份，按照標準加入法的要求，分別精密加入低、中、高3種不同質量濃度的對照品溶液，按第2.2.2項下制備供試品溶液的方法來制備樣品溶液，注入HPLC分析，測定樣品溶液中巖白菜素的量，并計算平均回收率。結果表明:抗癆膠囊中巖白菜素的低、中、高3種不同質量濃度的回收率范圍均在98.4% ～102.2%之間，RSD小于2%，結果見表2。

表2 加樣回收率實驗結果

2.7 樣品測定 取1～7號樣品按照第2.2.2項下的方法制備樣品溶液，按上述色譜條件進行測定，記錄峰面積并計算質量分數。樣品及巖白菜素對照品色譜圖見圖1。測得巖白菜素的平均質量分數結果見表3。

圖1 巖白菜素對照品 (A)、抗癆膠囊1(B)、抗癆丸 (C)、抗癆膠囊2(D)HPLC色譜圖

表3 樣品中巖白菜素測定結果

3 討論

3.1 分別比較了甲醇-水、乙腈-水等不同的流動相系統進行梯度、等度洗脫試驗，選擇分離系數好，時間盡可能短的最佳流動相條件，最終確定甲醇-水 (20∶80)等度洗脫作為定量測定條件。

3.2 通過DAD檢測器，對主要色譜峰在200～400 nm之間進行全波長掃描，選擇出峰數較多，各組分都有較好吸收的波長275 nm作為檢測波長。

3.3 比較了不同溫度20℃、25℃、30℃、35℃對分離效果的影響，最終選擇30℃作為合適的柱溫。

3.4 分別考察了提取方式 (超聲和加熱回流)，提取時間(20 min、30 min、40 min、50 min和60 min)，提取溶劑(水、25%、50%、75%及100%甲醇)對不同色譜圖的影響，最終確定以75%甲醇超聲提取40 min作為最佳提取條件。

3.5 由結果看出，3種樣品中巖白菜素平均質量分數有較大差別。抗癆膠囊2中巖白菜素質量分數最高，平均達到5.99 mg/g，而抗癆膠囊1與抗癆丸中巖白菜素的平均質量分數分別為0.56 mg/g與1.72 mg/g，差異明顯，因而得知，在所測樣品中，抗癆膠囊2主要成分的質量分數均較其他兩批制劑高。其可能的原因為不同廠家生產的制劑由于其制備工藝不同，所用原藥材產地、添加輔料及賦形劑不同，均有可能造成所生產的藥品在某一成分量上存在差別。

4 結論

通過HPLC法對不同廠家生產的抗癆膠囊與抗癆丸中的有效成分巖白菜素進行了定量測定，并對所測數據結果進行了分析比較。表明所測樣品中抗癆膠囊2的巖白菜素量，遠遠高于其他兩批樣品。

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