氣相色譜法測定香茅揮發油中檸檬醛

王 勇， 胡雄飛， 賴偉勇

(海南醫學院藥學院，海南海口571101)

香茅為禾本科香茅屬植物香茅Cymbopogon citratus(DC．)Stapf的干燥全草，又名檸檬草、檸檬香茅。主要分布于福建、臺灣、廣東、海南、廣西、湖南、四川、貴州、云南等省區。具有祛風通絡、溫中止痛、止瀉的功效，臨床上常用于治療感冒頭身疼痛、風寒濕痹、脘腹冷痛、泄瀉、跌打損傷，瘀血腫痛、月經不調，產后水腫、食欲不佳等。香茅中的主要成分為揮發油和黃酮類化合物，其中揮發油中主要成分為檸檬醛 (香葉醛和橙花醛)、月桂烯和香葉醇等［1］。現代藥理學研究表明香茅具有抑菌［2］、抗瘧［3］、抗 HIV［4］、抗抑郁［5］、免疫調節和腫瘤抑制等多種活性［6］。香茅精油的主要成分為檸檬醛，不僅適用于調配食用香精，同時還是合成紫羅蘭酮、甲基紫羅蘭酮的重要原料。目前對香茅揮發油的研究多集中于化學成分的GCMS 鑒別［7-8］、指紋圖譜［9］及香葉醇［10］的定量測定方面。但尚未見對其中主要成分檸檬醛進行測定的文獻報道。本研究采用氣相色譜法，以環己酮為內標物，對香茅揮發油中的檸檬醛定量測定，以期為香茅藥材的質量控制方法提供理論依據。

1 儀器與材料

島津GC-14C毛細管氣相色譜儀，2010色譜數據工作站，氫火焰離子化檢測器 (FID)，島津AUW220D電子分析天平。檸檬醛對照品 (東京化成工業株式會社，批號U5DMK，純度＞98%)，環己酮 (廣州化學試劑廠，純度＞99.5%)，無水乙醇 (分析純，廣州化學試劑廠)，無水硫酸鈉 (分析純，天津市大茂化學試劑廠)。香茅藥材共8批，經海南醫學院藥學院中藥鑒定學教研室曾念開博士鑒定為禾本科香茅屬植物香茅 Cymbopogon citratus(DC．)Stapf的干燥全草。

2 方法與結果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品貯備液的制備 精密稱取檸檬醛對照品適量，置10 mL量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，得質量濃度為25.342 mg/mL的對照品貯備液。

2.1.2 內標溶液的制備 精密稱取環己酮內標物適量，置25 mL量瓶中，加無水乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度為10.368 mg/mL的內標溶液。

2.1.3 供試品溶液的制備 取低溫烘干香茅藥材，切成長約2 cm的小段，取約10 g，精密稱定，置500 mL圓底燒瓶中，加入200 mL蒸餾水，按《中國藥典》2010年版(一部)附錄ⅩD甲法提取各樣品揮發油［11］，加適量無水硫酸鈉脫水，振搖，靜置，過夜，得淡黃色揮發油0.10～0.12 mL(收率1.0% ～1.2%)，加適量無水乙醇分次轉移至10 mL量瓶中，定容，精密吸取1.0 mL，置10 mL量瓶中，加入內標溶液1.0 mL，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 色譜條件及系統適用性試驗 色譜柱為SE-54石英毛細管柱(0.25 mm×30 m，0 25μm);氫火焰離子化檢測器(FID);載氣為氮氣;進樣方式為分流進樣，分流比為50∶1;進樣量為1μL;進樣口溫度為230℃;檢測器溫度為250℃;程序升溫，以50℃為起始溫度，先以5℃/min升至80℃后，再以3℃/min升至110℃，再以12℃/min升至230℃，保持4 min。在上述色譜條件下，理論塔板數按香葉醛計算大于50 000，各峰與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。對照品和供試品氣相色譜圖見圖1。

圖1 對照品 (A)和供試品 (B)色譜圖

2.3 線性關系考察 分別精密吸取檸檬醛對照品貯備液0.2、0.5、1.0、2.0、4.0 mL置10 mL量瓶中，精密加入內標溶液1.0 mL，再加無水乙醇定容至刻度，搖勻，得到各混合對照品溶液，進樣1μL，在2.2項色譜條件下測定。以對照品檸檬醛質量濃度 (mg/mL)為橫坐標 (X)，以對照品檸檬醛與內標物環己酮的峰面積的比值為縱坐標(Y)，繪制標準曲線，得回歸方程Y=0.958 9X－0.097 7(r=0.999 9)，表明檸檬醛質量濃度在0.506 84～10.136 8 mg/mL范圍內，與內標峰面積呈良好線性關系。

2.4 精密度試驗 取同一對照品溶液在2.2項色譜條件下連續進樣6次，以檸檬醛與內標物峰面積的比值計算RSD為0.98%(n=6)。

2.5 重復性試驗 取同一批香茅藥材 (海南海口20110830)6份，按2.1.3項下方法制備供試品溶液，在2.2項色譜條件下測定，計算檸檬醛的含有量，檸檬醛的平均質量分數為0.95 mg/g，RSD為1.13%(n=6)。

2.6 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別于配制后0、1、2、4、8、12、24 h分別進樣，以檸檬醛和環己酮峰面積的比值計算RSD值為1.85%(n=7)。試驗結果表明，供試品溶液在24 h內穩定性良好。

2.7 回收率試驗 稱取已測定的同一批香茅藥材 (海南海口20110830)約5 g，共9份，按低、中、高質量濃度分別加入檸檬醛對照品 (10.21 mg/mL)0.8、1.0、1.2 mL，每一質量濃度各3份，按照2.1.3項下方法制備供試品溶液，在2.2項色譜條件下進樣，測定，計算回收率。結果低、中、高3個加入量的平均回收率 (n=9)為97.2%，RSD為1.81%。

2.8 樣品測定 取不同產地、批次香茅藥材約10 g，精密稱定，按2.1.3項下方法制備供試品溶液，在2.2項色譜條件下進行測定，按內標對比法計算香茅揮發油中檸檬醛的質量分數。測定結果見表1。

表1 香茅揮發油中檸檬醛測定結果 (n=3)

3 討論

本實驗以環己酮為內標物，采用氣相色譜法對水蒸氣蒸餾法提取的香茅揮發油中的檸檬醛進行定量測定，建立的方法具有簡便、快速、準確等特點，可作為香茅揮發油成分質量控制方法。

通過對8批香茅樣品測定的結果表明，不同產地的香茅揮發油中的檸檬醛量存在一定差異，這些差異可能與香茅的氣候條件、生長環境、采收季節、貯藏時間及干燥方式等有關。曾考察過陰干、低溫烘干及日光曝曬等干燥方式，發現陰干過程中香茅藥材含水量較高，干燥速度較慢，且易發生霉變，日光曝曬香茅揮發油損失較大，低溫烘干揮發油的提取率較高，因此采用低溫烘干的方式對藥材進行干燥。另外由于香茅中檸檬醛具有較強的揮發性，粉碎后放置一段時間，揮發油的收率和檸檬醛的量均會急劇下降，因此本實驗采取將低溫烘干后的香茅藥材冷凍保存，臨用前切成約2 cm的小段進行提取。

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［11］國家藥典委員會．中華人民共和國藥典:2010年版一部［S］．北京:中國醫藥科技出版社，2010:附錄ⅩD．