膽管癌中TWIST蛋白、Kiss-1蛋白和上皮黏附素的表達及臨床意義

安 陽 邱寶安 趙文超

解放軍海軍總醫院肝膽外科，北京 100048

浸潤和轉移是膽管癌病變進展中的重要生物學行為，也是患者死亡的重要原因。Kiss-1和上皮黏附素（E-cadherin）高表達對細胞的惡變及轉移有抑制作用[1]。TWIST能通過抑制E-cadherin的表達來調節腫瘤細胞上皮-間質轉化，從而促進腫瘤浸潤和轉移[2]。本實驗應用免疫組織化學技術檢測膽管癌中TWIST、Kiss-1和E-cadherin的表達情況，探討TWIST、Kiss-1和E-cadherin與膽管癌臨床病理特征的關系，旨在為揭示腫瘤的發生發展提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

選擇膽管癌根治術切除后留取的蠟塊組織109例作為觀察組，均符合WHO中關于膽管癌的診斷標準，并由病理主治醫師閱片再次確認。本組患者年齡為46～76歲，平均（55.4±2.5）歲，其中男 58例，女 51例，術前均未進行放化療，同時選取病理證實為正常膽管黏膜組織70例作為對照組，年齡為 46～75 歲，平均（55.1±3.7）歲，其中男 35 例，女35例。兩組在性別、年齡等一般資料上比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白表達的檢測

TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白均購自武漢博士德生物工程有限公司，檢測應用免疫組化SP法，應用二氨基聯苯胺（DAB）顯色，由病理科主管技師進行操作，并在顯微鏡下進行顯色，嚴格質量控制，減少人為誤差。

1.3 結果判定方法

結果的判斷均由兩位病理主治醫師共同閱片得出。Kiss-1和E-cadherin陽性染色均位于細胞膜和細胞質，E-cadherin蛋白陽性染色位于細胞膜，呈棕黃色為陽性細胞，合并計算高倍鏡下（400×）隨機選擇的10個視野中陽性細胞占全部計數腫瘤細胞的百分率，平均每個視野呈陽性反應的細胞數≥10%為陽性，無明顯陽性反應或陽性反應的細胞數＜10%為陰性。

1.4 統計學方法

數據應用SAS 6.12進行統計分析，兩組間比較采用χ2檢驗，并進行線性相關分析，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白在膽管癌及正常膽管黏膜組織中的表達

TWIST在膽管癌組織中的陽性表達明顯高于對照組，而Kiss-1和E-cadherin在膽管癌組織中的陽性表達明顯低于對照組。見表1。

2.2 TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白的表達與膽管癌臨床病理特征的關系

TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白在膽管癌不同分化程度、浸潤深度及不同淋巴結轉移中的表達差異有統計學意義，見表2。

2.3 膽管癌中TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白表達的相關性

應用SAS軟件進行線性相關分析顯示，觀察組中TWIST和 Kiss-1（r=-0.45，P=0.0198）、TWIST 和 E-cadherin（r=-0.48，P=0.0095）的表達具有負相關性，而Kiss-1和 E-cadherin 的表達具有正相關性（r=0.44，P=0.0130）。

3 討論

腫瘤進展過程中出現基因和蛋白表達的異常，其中抑癌基因的失活是導致腫瘤增殖失控性增生、浸潤和遠處轉移的基礎。TWIST基因是一種高度保守的堿性螺旋轉錄因子，最初在果蠅中發現，是HLH超家族的成員，參與機體的多種調節過程[3-4]。尤其是中胚層發育及形態形成過程及誘導細胞移動及組織塑形中起重要作用[5-6]。E-cadherin是鈣依賴的黏附素家族的一個經典成員。在腫瘤的浸潤生長和轉移過程中，黏附起到重要作用。近年來，有關緊密連接蛋白及黏附分子功能的研究日趨增多，并證實了其在腫瘤發生發展中的重要作用[7]。Kiss-1是一種新發現的抑癌基因，也是應用微細胞介導技術在黑色素細胞株中提取并分離的，Kiss-1定位于染色體1q32，包括4個外顯子，編碼產生54個氨基酸。正常情況下Kiss-1在正常黏膜中高表達，對抑制腫瘤向周圍組織浸潤有重要作用，而當其表達下降時，Kiss-1對腫瘤增生及浸潤的抑制作用下降，引發腫瘤惡性生長的生物學行為。

本實驗通過免疫組織化學技術檢測膽管癌中TWIST、Kiss-1和E-cadherin的表達，結果顯示TWIST在膽管癌組織中高表達，Kiss-1和E-cadherin在膽管癌組織中低表達，提示三種蛋白均與膽管癌細胞的惡變有關。結果顯示TWIST、Kiss-1和E-cadherin在不同分化、不同浸潤深度、不同淋巴結轉移患者中的表達有明顯的差異，提示三種蛋白可能參與了腫瘤的進展，即TWIST、Kiss-1和E-cadherin異常表達后參與了腫瘤的分化過程及淋巴結轉移過程，使腫瘤遷移能力增強。TWIST、Kiss-1和E-cadherin參與了腫瘤的分化，由于腫瘤的分化是腫瘤發生過程中最重要的階段，也說明了TWIST、Kiss-1和E-cadherin對腫瘤的分化起核心作用。由于分化、浸潤深度及淋巴結轉移均與患者的預后相關，因此，三種蛋白可能與預后有一定關系。實驗結果顯示TWIST、Kiss-1和E-cadherin具有相關性，提示三種蛋白具有協同作用，即TWIST不僅具有調節以E-cadherin為主的黏附作用[8-9]，還具有調節Kiss-1的作用，使腫瘤的轉移潛能增強[10]。惡性腫瘤侵襲和轉移的先決條件是癌細胞脫離原發灶，而在此過程中起作用是的異常表達的E-cadherin[11-13]，當TWIST對其調節作用下降時，使腫瘤細胞間的黏附作用下降，腫瘤細胞易于離開原發灶，在遠隔器官進行定植，形成轉移癌[14-15]。在此過程中TWIST調節的Kiss-1也可以改變細胞外基質和基底膜的完整性。因此Kiss-1和E-cadherin的表達缺失以及TWIST的表達增加是促進腫瘤浸潤和轉移的重要因素，使腫瘤抑制基因與細胞外基質降解形成了一個協同的過程，共同參與腫瘤的發展。

總之，TWIST、Kiss-1和E-cadherin異常表達在膽管癌發生發展中起重要作用，三者具有協同效應，共同促進腫瘤的進展。

表1 TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白在膽管癌及正常膽管黏膜組織中的表達[n（%）]

表2 TWIST、Kiss-1和E-cadherin蛋白的表達與膽管癌臨床病理特征的關系[n（%）]

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