新疆維吾爾族群體色氨酸羥化酶 1基因 T3804A位點多態性與抑郁癥的關聯

趙宗峰 張艷君 王慧琴 依布拉音

抑郁癥是常見精神性疾病,具有高發病、高復發、高致殘和高自殺率的特點[1]。遺傳學發現 5-羥色胺(5-HT)以及參與其代謝和轉運物質的某些基因多態性與抑郁癥存在相關性[2],TPH1是 5-HT合成的限速酶,可能參與情感障礙的起病[3]。TPH1T3804A(rs623580)多態性位點距離外顯子 1C有 3個單核苷酸,T-A的變異可影響 TPH1轉錄活性,導致5-HT的濃度下降,因此可能引發抑郁癥[4]。目前國內對于此位點乃至位點民族差異的研究仍不多見,本研究旨在探討新疆維吾爾族群體 TPH1基因 rs623580位點單核苷酸多態性與抑郁癥的關系。

1 對象與方法

1.1 對象 104例維吾爾族抑郁癥患者 (男性 43例,女性 61例)來自我院臨床心理科,90例維吾爾族正常體檢者(男性 37例,女性 53例)來自我院體檢中心,正常對照組與研究組男女比例相近。抑郁癥的診斷標準同時符合《中國精神障礙分類與診斷標準 (第 3版 )》(CCMD-3)和《美國精神障礙診斷與統計手冊(第 4版 )》(DSM-Ⅳ ),既往無精神病史,排除嚴重軀體疾病和其他精神疾病等情況。對照組樣本二系三代無精神疾病家族史。入組成員對研究知情同意。104例研究組年齡 19～ 61歲 ,平均 (37.62± 8.92)歲 ,病程 1～ 37月 ,90例對照組年齡 18～ 61歲,平均(36.14± 8.21)歲,兩組年齡差異無統計學意義。

1.2 方法

1.2.1 基因組 DN A的提取及特定片段的 PCR擴增 采集空腹外周靜脈血 3～ 4ml,放置于 5ml的 EDTANa2抗凝管中,-80℃冰箱儲存。用 TIANGEN血液基因組 DNA提取試劑盒提取樣本 DN A。PCR引物序列由北京鼎國生物技術工程有限責任公司合成,上游引物為 5’-TAAT TATCCTCCCTCCAAGT-3’,下 游 引 物 為 5’-CT TACCCATTCA ATTACCAC-3’。 PCR反應總體系為40μL,反應液為:10xbuffer(含 Mg2+,20μM/μL)4μL,dNT P(10 μM/μL)1 μL,TaqDNA 聚合 酶 (2U/μL)1μL,模板 DNA 1μL,上下游引物各 1μL(10μM/μL),加 ddH2O至 40μL,在PTC-100 PCR擴增儀上擴增。反應程序:95℃預變性 5min,進入循環,95℃變性 45s,51℃退火 1min,72℃延伸 45s,共 30個循環;72℃延伸 10min,4℃保存。反應結束后取 5 μL擴增產物于 1?TAE緩沖液中用 1%瓊脂糖凝膠電泳 20min(恒壓150V),電泳結果在凝膠成像系統下拍照并保存。

1.2.2 測序分型 擴增產物由北京鼎國生物技術工程有限責任公司進行目的片段測序,結果返回后對相應位點分型并記錄。

1.3 統計處理 應用擬合優度檢驗,計算基因型分布是否符合 Hardy-Weinberg平衡。應用 SPSS10.0分析基因型以及等位基因頻率的分布差異。

2 結 果

2.1 Hardy-Weinberg平衡檢驗 研究組 (i2=1.710,P=0.425)與對照組 (i2=1.662,P=0.436)的 rs623580位點基因型頻率分布符合 Hardy-Weinberg平衡法則。按性別分亞組后,男性研究組 (i2=0.071,P=0.965)與對照組(i2=0.078,P=0.962)的 rs623580位點基因型頻率分布符合Hardy-Weinberg平衡法則。女性研究組(i2=2.212,P=0.331)與對照組 (i2=2.258,P=0.323)的 rs623580位點基因型頻率分布亦符合 Hardy-Weinberg平衡法則。

2.2 研究組與對照組 rs623580位點基因型與等位基因頻率分布的比較 研究組 104例中,3種基因型分別為 21(20.2%)例、 51(49.0%)例、 32(30.8%)例。對照組 90例中 ,3種基因型分別為 33(36.7%)例、36(40.0%)例、21(23.3%)例。兩組 rs623580多態性的各基因型和等位基因頻率差異具有統計學意義(i2=6.560,P=0.038和i2=5.517,P=0.019)。研究組 A/A基因型頻率及 A等位基因頻率均高于對照組,見表 1。

表1 兩組 rs623580位點基因型與等位基因頻率分布的比較[n(%)]

2.3 女性、男性研究組與對照組 rs623580位點基因型與等位基因頻率分布的比較 研究組與對照組按性別分亞組,分別比較 rs623580位點基因型與等位基因頻率,結果顯示,女性研究組與女性對照組基因型頻率差異(i2=8.026,P=0.018)和等位基因頻率差異(i2=7.154,P=0.007)具有統計學意義。女性研究組 A/A基因型頻率及 A等位基因頻率均高于女性對照組。男性研究組與男性對照組基因型頻率差異和等位基因頻率差異不具有統計學意義,見表 2。

表2 女性、男性研究組與對照組 rs623580位點基因型與等位基因頻率分布的比較[n(%)]

3 討 論

TPH基因在 5-HT的新陳代謝中具有重要作用[5],是 5-HT合成的限速酶,T PH的生理活性和表達水平正常與否影響著 5-HT的血濃度,通過增強或減弱 5-HT及其代謝物的作用強度,進而影響它在中樞神經系統的功能,可能引發抑郁癥。本研究所選擇的多態性位點 T3804A,位于 TPH1上1B內含子嘧啶富足區,rs623580位點發生 T-A的突變后,可形成 AA、AT、TT3種基因型。本實驗的研究結果表明,研究組與對照組 TPH1基因 rs623580位點的基因型頻率差異和等位基因頻率差異具有統計學意義。同時,在研究組中 AA基因型頻率高于對照組的頻率,等位基因 A的頻率也明顯高于對照組的頻率,此與王兵[6]Jiajun Shi[7]等人的研究一致。研究組與對照組按性別分亞組,女性研究組與對照組基因型頻率差異和等位基因頻率差異具有統計學意義。男性研究組與對照組基因型頻率差異和等位基因頻率差異不具有統計學意義。女性研究組中的 AA基因型頻率高于女性對照組的頻率,女性研究組中等位基因 A的頻率也明顯高于女性對照組的頻率。因此推測 TPH1基因 T3804A位點與抑郁癥的發病可能具有關聯性,A等位基因可能是抑郁癥的易感基因。考慮到抑郁癥是一種多基因遺傳疾病,并且研究的結果會受到樣本容量、地區差異、種族差異、環境因素與遺傳因素的相互作用等方面的影響,仍需進一步探討該基因與抑郁癥的關聯性。

[1]閔文蛟,孫學禮.抑郁癥致病相關基因的遺傳學研究 [J].華西醫學,2007,22(4):904-905

[2]陳鵬宇,胡澤卿.5-羥色胺能系統在抑郁癥中的研究進展 [J].神經疾病與精神衛生,2008,8(4):325-327

[3]楊福中,禹順英,施慎遜.國內抑郁癥遺傳學研究 [J].上海精神醫學,2008,20(4):245-248

[4]Paoloni- Giacobino A, Mouthon D, LambercyC, etal.Identification and analysis of new sequence variants in the human tryptophan hydroxylase(T PH)gene[J].Mol Psychiatry,2000,5(1):49-55

[5]Te- Jen Lai,Chia- Yen Wu,Hsu- Wen Tsai,et a1.Polymorphism screening and haplotype analysis of the tryptophan hydrox ylase gene(TPH1)and association with bipolar affective disorder in Taiwan[J].BM C Medical Genetics,2005,6(14):1-10

[6]王兵.色氨酸羥化酶基因 T3792A位點遺傳多態性與抑郁癥的相關性及法醫學意義[D].沈陽:中國醫科大學,2008

[7]Jiajun Shi,Judith A.Badner,Eiji H attori,et al.Neurotransmission and bipolar disorder: A systematic family based association study[J].Am J Med Genet B Neuropsychiatr Genet,2008,147B(7):1270-1277