VG染色在慢性肝病組織中的應用

姜晶 王彩芹

慢性肝病包括慢性肝炎和肝硬化，最基本的病理特征之一為肝內纖維結締組織彌漫性增生，纖維間隔的形成。本研究應用VG（Van Gieson）染色方法，探討由慢性肝炎到肝硬化過程中肝內膠原纖維的增生，分布變化，以鑒別不同類型的慢性肝炎和肝硬化，探討慢性肝病組織中膠原纖維可能起源，為肝硬化的早期診斷及其防治提供組織病理學依據。

1 資料與方法

1.1 一般材料 選自北華大學附屬醫院和基礎醫學院的尸檢，活檢材料，共40例，其中慢性肝炎9例，均為肝穿刺標本，在31例肝硬化標本中，外科切除20例，尸體解剖11例。標本均用10%中性福爾馬林液固定，常規石蠟包埋，制片，厚5μm，待做HE及VG染色。

1.2 方法 常規HE染色 石蠟切片脫蠟水洗，蘇木精將組織切片適當過染，水洗后經鹽酸酒精分化，弱氨水顯藍，使細胞核呈鮮明藍色，胞質背景無色，再經水洗后用伊紅將胞質等染成粉紅色至紅色，脫水、透明、封固。光鏡觀察，確定病理診斷及病理類型。做VG染色：切片按常規脫蠟水洗，用Weiger氏鐵蘇木精染核15min,自來水充分沖洗，用顯微鏡觀察細胞核著色程度，用蒸餾水洗后以VG染液染5min，直接用新的95%酒精急速分化兼脫水，約需8s,無水酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

2 結果

2.1 HE染色 根據肝組織損傷程度確定慢性肝炎和肝硬化的病變類型。9例慢性肝炎中：輕型慢性肝炎2例，中度慢性肝炎4例，重度慢性肝炎3例；31例肝硬化中，不完全分割3例，細節結型17例（圖1），粗結節型11例。

2.2 VG染色 經VG染色顯示慢性肝病組織內膠原纖維增生及分布狀況。VG染色后將膠原纖維染成深粉紅色，肝細胞質染成黃色，而核呈棕黑色。

圖1 HE染色，200倍視野下，細節結型肝硬化形成的假小葉較小，其周邊的纖維間隔內有大量炎細胞浸潤。

圖2 VG染色，200倍視野下，假小葉周邊的纖維間隔呈深粉紅色。

2.2.1 膠原纖維在慢性肝炎組織中的分布 (1)輕型慢性肝炎：肝小葉結構無破壞，僅在匯管區及其周邊組織內有少量膠原纖維分布；（2）中度慢性肝炎：肝小葉結構大部分得以保存，僅在肝小葉內形成少許條索狀纖維間隔；（3）重度慢性肝炎：增生的膠原纖維形成纖維間隔，并分割肝小葉，新生的膠原纖維條索由匯管區或肝細胞壞死灶向肝小葉內延伸，分割肝小葉結構。匯管區明顯增寬，膠原纖維成寬帶狀，結構疏松深染。

2.2.2 膠原纖維在肝硬化組織中的分布 （1）不完全分割型肝硬化（早期肝硬化）：膠原纖維間隔不完整，且間隔較薄，可見不完整或盲端的纖維間隔向小葉內伸延，假小葉結構尚未完全形成；（2）細節結型肝硬化：形成的假小葉較小，其周邊的膠原纖維間隔較薄，較均勻（圖2）；（3）粗結節性肝硬化：形成的假小葉較大，其周邊的纖維間隔不規則，寬窄不均，間隔較寬處膠原纖維融合成束，并形成編織狀，甚至發生玻變。

3 討論

肝纖維是肝臟對各種原因所致肝損傷的代償修復反應，表現為肝內纖維結締組織增生與沉積，是多種慢性肝病共同的病理過程[1]。VG染色表明，輕型慢性肝炎僅有少量膠原纖維分布在匯管區及其周圍。中度慢性肝炎在肝實質內也能見到纖維條索。重型慢性肝炎膠原纖維起源于碎片狀，橋接壞死灶，并形成纖維間隔分割肝實質。在肝硬化病變中，粗結節型其周圍纖維間隔較寬，而細節結型其間隔較窄。纖維結締組織間隔較寬表明與壞死灶內網狀支架塌陷、膠原化有關，而較細間隔與肝內炎灶細胞活化有關。在肝臟受到損害時，肝星狀細胞（HSC）被激活，表達多種細胞因子及受體，大量增殖合成細胞外基質（ECM）[2]。纖維間隔內增生的纖維組織也與Kupffer氏細胞與激活的活化的HSC密切相關[3-4]。激活的HSC分化為肌纖維母細胞和成纖維樣細胞，并分泌產生膠原纖維分割肝實質。Kim等[4]報道，慢性肝炎損傷后，活化的HSC和肝成纖維細胞是肝細胞生長因子作用靶點。此處多種損傷肝的因素，如慢性肝炎、酒精性肝病、藥物損害、肝外膽道阻塞以及維生素A過多等均使貯脂細胞數目增多，其周圍可見明星的膠原纖維增生。

肝纖維化是多種肝病的共同病理過程，是由不同原因引起的慢性肝損傷，激活HSC促進以膠原為主的ECM合成和分泌增多，降解減少或代償不足，從而使ECM在肝內異常沉積而引起肝的纖維化病變，肝纖維化系由肝結締組織彌漫性增生所致，大多數慢性肝病向肝硬化發展的必經階段，其病變特點為肝內彌漫性纖維增生，但無假小葉和再生結形成。已證實肝纖維化是可逆病變[5]，因此能否阻止或逆轉肝纖維化是慢性肝病對病因治療之外的重要環節。Tomiya等[6]報道，支鏈氨基酸可以作用肝臟，通過誘導肝臟產生HGF而達到治療肝纖維化的目的。應用VG染色顯示膠原纖維在肝組織內分布，對探討慢性肝病肝纖維化的形成機制有重要實用價值，臨床上在治療肝損傷同時，也考慮抗纖維化治療，可能對肝纖維化的防治具有指導意義，值得深入探索。

[1]張孝盈，李菲.慢性乙型肝炎纖維化治療中肝纖維化指數的臨床意義[J].江蘇醫藥，2011，37（11）:1285-1287.

[2]黃強.銀杏葉提取物對大鼠纖維化肝臟NF-κB活性的抑制作用[J].中國中醫急癥，2010，19(12):2102-2103.

[3]Bhunchet E,Eishi Y,Wake K.Contribution of immune response to the hepatic fibrosis induced by porcine serum[J].Hepatology,1996,23(4):811-817.

[4]Kim WH,Matsumoto K,Bessho K,et al.Growth inhibition and apoptosis in liver myofibroblasts promoted by hepatocyte growth factor leads to resolution from liver cirrhosis[J].Am patho1,2005,166(4):1017-1028.

[5]Pinzani M,Rombouts K.Liver fibrosis from the bench to clinical targets[J].Dig liver Dis,2004,36(4):231-242.

[6]Tomiya T,Omata M,Fujiwara K.Significance of branched chain amino acids as possible stimulators of hepatocyte growth factor[J].Biochem Biophy Res Commun,2004,313(2)：411-416.