胃癌組織中Stat3的活化及P53、C－erb－B2的表達(dá)

從 麗，陶 林，趙 瑾，周 勐，陳 成，張文杰，3＊

（1.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院 病理學(xué)教研室，新疆 石河子832002；2.石河子大學(xué)新疆地方與民族高發(fā)病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；3.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院生殖醫(yī)學(xué)中心，湖北 武漢430030；4.吉林大學(xué)白求恩第二醫(yī)院，吉林 長春130041）

胃癌是全球范圍內(nèi)第二大常見惡性腫瘤，其發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，參與因素很多。胃癌的臨床生物學(xué)行為受眾多分子及信號傳導(dǎo)途徑的影響，因而臨床病理學(xué)表現(xiàn)差異很大。信號傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子（signal transducers and activators of transcription，Stats）是細(xì)胞因子和生長因子受體信號的下游效應(yīng)物，其中原發(fā)活性Stat3（原發(fā)具有活性之磷酸化信號傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子3，p－Stat3）的異常活化和表達(dá)是腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程中一個(gè)極其重要的因素。Stat3信號途徑是一條從細(xì)胞膜到細(xì)胞核的快捷途徑：細(xì)胞因子和/或生長因子作用于細(xì)胞表面受體，Stat3可通過酪氨酸或絲氨酸激酶的活化，成為p－Stat3并形成二聚體轉(zhuǎn)移入核［1］。p－Stat3進(jìn)入核內(nèi)與DNA應(yīng)答元件結(jié)合，引起基因的表達(dá)，已被定義為癌基因［2］，發(fā)揮促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的作用。

P53基因是基因研究最為廣泛深入的抑癌基因之一。基因突變是P53正常功能喪失的主要方式，突變型P53蛋白喪失抑癌活性，卻可促進(jìn)惡性轉(zhuǎn)化，由抑癌基因轉(zhuǎn)為原癌基因。C－erbB－2，又稱為neu或HER－2，是一種酪氨酸激酶受體，其活化可傳遞增殖信號從而促進(jìn)細(xì)胞增殖生長，是表皮生長因子受體（EGFRs）家族成員，是一種細(xì)胞來源的癌基因，在多種腫瘤中可見其癌基因和蛋白產(chǎn)物（P185）過度表達(dá)、擴(kuò)增。P53、C－erb－B2的檢測已作為常用的免疫組化指標(biāo)用于胃癌的臨床病理輔助診斷。

因此，本研究擬分別采用免疫組織化學(xué)（IHC）方法，探討p－Stat3的活化水平在胃癌臨床病理學(xué)中的意義及其與P53、C－erb－B2的關(guān)系。

1 對象與方法

1.1 對象 采用分層系統(tǒng)抽樣的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，選取2003－2007年石河子大學(xué)第一附屬醫(yī)院手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的胃癌74例，正常胃組織53例，高級別上皮內(nèi)瘤變21例；胃癌組男53例，女21例；年齡29－80歲，平均年齡59.2歲。病理分型高－中分化腺癌31例，低分化腺癌43例。按美國癌癥聯(lián)合委員會（AJCC）2010年修訂的胃癌TNM分期系統(tǒng)進(jìn)行分期：T1＋T2（浸潤未達(dá)漿膜層）13例，T3＋T4（浸潤達(dá)漿膜層）61例；無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移44例；Ⅰ期11例，Ⅱ期19例，Ⅲ期35例，Ⅳ期9例。標(biāo)本常規(guī)甲醛固定，24h內(nèi)取材，石蠟包埋，5 μm連續(xù)切片。

1.2 試劑和方法

兔抗人p－Stat3單克隆抗體購自abcam公司，C－erbB－2、P53試劑盒均購自北京中杉生物技術(shù)有限公司。采用免疫組化鏈菌素親生物素蛋白－過氧化酶（S－P）法，DAB顯色，操作步驟按試劑盒說明書進(jìn)行。陽性對照為已知的乳腺癌組織切片，陰性對照采用PBS代替一抗的方法。

1.3 結(jié)果判定

染色結(jié)果由二位主治醫(yī)師以上的病理專家，采用雙盲法，參照1996年全國免疫組織化學(xué)技術(shù)與診斷標(biāo)準(zhǔn)化專題研討會意見獨(dú)立判讀。p－Stat3以細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。高倍鏡下取5個(gè)視野，各計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞。染色強(qiáng)度以陽性細(xì)胞呈色為標(biāo)準(zhǔn)：無特異著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細(xì)胞占計(jì)數(shù)細(xì)胞百分比：≤5%為0分，6%～25% 為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，≥76%為4分。最終結(jié)果按染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞所占的百分比的乘積得分：0分為陰性（－）；1～4分為弱陽性（＋）；5～8分為中度陽性（＋＋），9～12分為強(qiáng)陽性（＋＋＋）。＋為低活化，＋＋～＋＋＋為高活化。

C－erbB－2的表達(dá)以胞膜和（或）胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，P53的表達(dá)以細(xì)胞核中出現(xiàn)為陽性。陽性染色的癌細(xì)胞數(shù)≤25%為陰性，＞25%為陽性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)錄入統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0，進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。

2 結(jié)果

2.1 p－Stat3在胃癌及癌旁組織中的活化水平

p－Stat3陽性信號主要位于細(xì)胞核中。p－Stat3在胃癌組織中的活化程度明顯高于癌旁組織（P＜0.05），上皮內(nèi)瘤變高于正常胃組織（P＜0.05），見表1。

表1 p－Stat3在胃癌、正常胃組織及高級別上皮內(nèi)瘤變組織中的活化程度

2.2 p－Stat3活化、P53、C－erb－B2表達(dá)在胃癌患者中的臨床病理學(xué)意義

p－Stat3在低分化胃癌組的活化程度明顯高于高－中分化胃癌組，且與浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期具有顯著性相關(guān)。P53與分化程度、臨床分期具有顯著性相關(guān)，C－erb－B2分別與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和臨床分期具有顯著性相關(guān)。p－Stat3、P53、C－erb－B2均與年齡、性別無顯著性相關(guān)（見表2）。

表2 胃癌中p－Stat3、P53、C－erb－B2的表達(dá)及其臨床病理學(xué)意義

2.3 胃癌組織中p－Stat3活化程度與P53、C－erb－B2表達(dá)之間的關(guān)系

在p－Stat3高活化的50例胃癌組織中，42例P53陽性，36例 C－erb－B2陽性。胃癌組織中p－Stat3活化程度與P53表達(dá)水平在統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著相關(guān)（P＜0.05），與 C－erb－B2表達(dá)無顯著性相關(guān)（P＞0.05）。

表3 胃癌中p－Stat3與P53、C－erb－B2表達(dá)之間的關(guān)系

3 討論

胃癌的細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)研究顯示，癌基因與胃癌的關(guān)系十分密切。胃癌的發(fā)生和發(fā)展是以原癌基因激活和抑癌基因失活為基礎(chǔ)的，多基因、多步驟、多階段的復(fù)雜過程，涉及多個(gè)分子作用機(jī)制和信號傳導(dǎo)途徑。其中，P53、C－erb－B2表達(dá)水平的檢測已作為常用的免疫組化指標(biāo)用于胃癌的臨床病理輔助診斷。

近年來，Stats信號傳導(dǎo)通路在胃癌中的作用逐漸被人們重視，而Stat3是Stats信號通路家族中一個(gè)關(guān)鍵性的信號通路。目前，學(xué)者們在對 的研究中發(fā)現(xiàn)，Stat3具有促進(jìn)腫瘤增殖，抗凋亡，促血管生成等作用，因此被定義為一種癌基因［3］。我們的研究結(jié)果顯示，正常胃粘膜中沒有活性p－Stat3，但隨著病變加重，p－Stat3活化率逐漸增高，胃癌組織中的活化率高于上皮內(nèi)瘤變組織（表1）。本研究的重要發(fā)現(xiàn)是，p－Stat3活化程度分別與胃癌的分化程度、浸潤程度和癌轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)。如表2所示，p－Stat3活化率在低分化癌中高于中分化/高分化癌；在癌浸潤達(dá)漿膜層者高于癌浸潤未達(dá)漿膜層者；在臨床晚期患者（Ⅲ－Ⅳ期）高于臨床早期患者（Ⅰ－Ⅱ期）；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。孫瑩、周樂等［4，5］在胃癌和甲狀腺癌中分別運(yùn)用了IHC和 Western－blot得出Stat3、p－Stat3的表達(dá)在癌組織高于正常組織，與我們p－Stat3的研究結(jié)果是一致的。Stat3的異常活化可以導(dǎo)致由Stat3通路調(diào)節(jié)的下游基因過多表達(dá)，引發(fā)組織細(xì)胞中一系列的病理生理學(xué)變化，從而影響癌變及癌進(jìn)展。本研究揭示的這種規(guī)律性相關(guān)提示，高活化的p－Stat3可能參與了胃癌從瘤變到癌變的全過程，具有促進(jìn)胃癌的浸潤和轉(zhuǎn)移的潛能。本研究的意義在于，臨床上對活檢組織進(jìn)行p－Stat3檢測，可能在胃癌的早期預(yù)警，惡性程度及癌轉(zhuǎn)移評估上具有提示作用。鑒于此，很有必要對Stat3在胃癌中的作用進(jìn)行深入研究。

P53基因是基因研究最為廣泛深入的抑癌基因之一。基因突變是P53正常功能喪失的主要方式，突變型P53蛋白喪失抑癌活性，卻可促進(jìn)惡性轉(zhuǎn)化，由抑癌基因轉(zhuǎn)為原癌基因。目前就P53基因改變與其胃癌臨床病理意義，研究者們意見尚不一致［6，7］。我們的研究結(jié)果顯示在低分化胃癌P53蛋白表達(dá)明顯高于高－中分化者，且在臨床分期Ⅲ－Ⅳ期者高于Ⅰ－Ⅱ期者，在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（35/44）略高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（22/30），但是無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與前面學(xué)者的研究結(jié)果也有一定的差異。p－Stat3活化程度與P53的表達(dá)水平具有統(tǒng)計(jì)學(xué)高度相關(guān)。我們的研究結(jié)果顯示p－Stat3在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中也起到了重要的作用，且與P53共同反應(yīng)胃癌的病理、臨床生物學(xué)行為。

C－erbB－2，又稱為neu或 HER－2，是一種細(xì)胞來源的癌基因，在多種腫瘤中可見其癌基因和蛋白產(chǎn)物（P185）過度表達(dá)、擴(kuò)增。研究者已在多種腺癌中觀察到 C－erbB－2基因的擴(kuò)增，C－erbB－2蛋白的過表達(dá)也與胃癌的多種臨床病理學(xué)行為有關(guān)［8－10］。本研究發(fā)現(xiàn)，C－erbB－2在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的胃癌患者中表達(dá)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，且在臨床分期Ⅲ－Ⅳ期者高于I－II期者，提示檢測胃癌C－erbB－2表達(dá)情況對胃癌的侵襲和預(yù)后判斷有一定的意義。

綜上所述，p－Stat3可能參與了胃癌的發(fā)生、發(fā)展、浸潤/轉(zhuǎn)移的全過程。如果深入及大樣本研究能重復(fù)本研究結(jié)果，Stat3信號通路有希望成為胃癌防治的候選靶分子或靶通路。P53的表達(dá)與活性p－Stat3的相關(guān)，提示檢測p－Stat3聯(lián)合P53，對胃癌的輔助診斷、胃癌增殖狀態(tài)的評估、胃癌惡性程度和癌浸潤/轉(zhuǎn)移潛能的預(yù)測可能具有更為全面而重要的臨床參考意義。

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