sB7-H3與原發性高血壓患者尿微量白蛋白的關系

張小民 趙楚敏 劉春榮 宋月霞 張光波

B7-H3是新發現的免疫分子，該分子在腫瘤免疫及自身免疫病方面具有重要作用［1］。在項研究中，我們利用sB7-H3酶聯檢測方法，通過對96例高血壓合并蛋白尿患者血清標本的檢測，對sB7-H3的表達與疾病的關系進行了分析。我們發現sB7-H3可能與高血壓腎損害病變程度密切相關。報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2009年6月至2010年12月唐山市人民醫院收治的原發高血壓病患者96例，根據MAU分為觀察組(n=48)，30≤UAE(尿白蛋白排泄量) ＜300 mg/24 h和對照組(n=48)，UAE＜30 mg/24 h。選擇同期健康體檢者40例作為健康組。

1.2 納入與排除標準 所有病例均符合“2005年高血壓診斷治療指南”判定標準。排除標準：惡性腫瘤、繼發性高血壓、外周血管病及合并心、肝、腎功能不全、瓣膜病、糖尿病、甲亢、結締組織病及自身免疫性疾病。

1.3 方法

1.3.1 鼠抗人B7-H3單克隆抗體(克隆號為4H7和21D4)來源于蘇州大學生物技術研究所;sB7-H3酶聯檢測試劑盒來自蘇州大學附屬第一醫院臨床免疫學實驗室。

1.3.2 生化指標及sB7-H3蛋白的檢測：觀察組和對照組分別與住院后次日清晨6∶00～7∶00，健康組體檢當日清晨空腹抽取外周靜脈血5 ml，2 500～3 000 r/min離心3～5 min分離血清6 h內完成，-70℃凍存待測。采用免疫透射比濁法測定血漿C-反應蛋白(CRP)，試劑盒由Beckman公司提供，常規生化測定血漿總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDLC)、高密度脂蛋白(HDL-C)、肌酐(Cr)。血清中sB7-H32蛋白的檢測嚴格按照臨床免疫學實驗室方法進行實驗操作。簡言之：以鼠抗人B7-H3單抗4H7為包被抗體，4℃過夜;次日用1%BSA封閉，4℃過夜;洗板后，加入B7-H3融合蛋白作為標準品，和1∶10稀釋的血清樣本作為待檢測標本，同時加入生物素標記的21D4單抗(bio-21D4)，室溫孵育3 h，洗板后加入avtin-HRP室溫反應30 min，洗板后加入TMB顯色，以OD450 nm為檢測波長，在Bio-Rad 550酶標儀上讀取OD值。以軟件Curve-Expert 1.3進行結果分析。

1.3.3 血壓測定：采用袖帶汞柱式血壓計測右上臂血壓，取Korotkoff第一音和第五音為收縮壓和舒張壓，測量3次，各間隔1 min，取其平均值。均在安靜休息15 min后測血壓。

1.3.4 MAU的檢測：于入院或就診次晨收集24 h尿，甲醛防腐，測24 h尿量，并充分混勻后取少量離心，取上清液存放在-24℃冰箱動存備用。采用放射免疫法(RIA)用北京和儀器廠bh6020型放免計數器測定尿的微量白蛋白濃度。根據MAU的濃度×尿量，得UAE(mg/24 h)。

1.4 統計學分析應用SPSS10.0統計軟件，計量資料以±s表示，組間比較采用單因素方差分析，計數資料采用χ2檢驗，相關性采用直線相關分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般情況 3組血脂血糖等一般情況比較基本相同(P＞0.05)，健康組與對照組、觀察組的血壓比較差異有統計學意義(P＜0.05)，對照組與觀察組血壓比較差異無統計學意義(P ＞0.05)。見表1。

表1 3組一般情況比較±s

表1 3組一般情況比較±s

注：與健康組比較，*P ＜0.05;與觀察組比較，#P ＜0.05

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2.2 2組sB7-H3、CRP比較 檢測結果表明觀察組患者體內sB7-H3及CRP表達水平較對照組相比明顯升高(P＜0.01)。見圖 1、2，表 2。

圖1 sB7-H3在高血壓伴MAU的表達

圖1 CRP在高血壓伴MAU的表達

表2 sB7-H3在高血壓合并MAU患者體內的表達分±s

表2 sB7-H3在高血壓合并MAU患者體內的表達分±s

注：與對照組比較，*P＜0.01

對照組(n=48) 23±9 3.9±1.2觀察組(n=48) 35±11* 6.4±1.1*

3 討論

研究證實共刺激分子免疫球蛋白B7家族及細胞因子與高血壓、冠心病大動脈病變密切相關［1，2］。但與微動脈特別是微循環的相關性筆者尚未見報道。研究顯示hs-CRP水平＞0.77 mg/L時，尿微量白蛋白的發生明顯增高，提示炎癥反應參與了微量白蛋白尿的發生。微量白蛋白尿預示非特異性血管功能失常，特別是內皮功能失調。研究顯示炎性反應具有促進內皮功能損害的作用，并參與了高血壓病及高血壓病腎功能損害的發生發展［3-5］。可能還伴隨免疫功能的異常［6］。而微量蛋白尿與內皮功能障礙呈明顯負相關。為進一步探討微量蛋白尿與免疫反應的關系，我們利用酶聯檢測試劑藥盒，通過對96例高血壓患者血清的檢測，結果發現sB7-H3在高血壓合并微量蛋白尿患者體內的表達水平明顯高于對照組(P＜0.01)。觀察結果顯示，CRP、sB7-H3的增高與微量蛋白尿的變化呈相關性，高血壓微量蛋白尿組的CRP sB7-H3顯著增高。證實了免疫反應及慢性炎癥在高血壓微量白蛋白尿的發生發展中發揮重要作用與上述報道一致也進一步證實高血壓病合并微血管病變與免疫反應及慢性炎癥密切相關。

總之，該項研究從血管免疫炎癥機理入手，利用sB7-H3酶聯檢測方法，通過對96例高血壓合并微量蛋白尿患者血清中sB7-H3的表達及分析，首次發現sB7-H3在高血壓合并微量蛋白尿病人血清中具有遠較對照人群為高的表達水平。鑒于此，B7-H3能協同刺激CD+4，CD+8T細胞的增殖，特異性的促進干擾素-γ(IFN-γ)分泌表達，對白細胞介素-8(IL-8)，腫瘤壞死因子-α(TNF-α)也有適度的上調作用［7］。因此，sB7-H3 通過參與血管免疫炎性反應，促進腎小球損傷的發生和發展。本研究提示，通過某種途徑對sB7-H3介導的免疫炎性反應進行有效的干預也許是治療高血壓腎損害的新途徑，這也為我們研究高血壓腎血管病變的免疫學機制提供了新的線索與思路。

1 張小民，宋月霞，劉春榮，等.sB7-H3與高血壓合并頸動脈粥樣硬化的關系.中華高血壓雜志，2007，15：76-77.

2 張小民，趙楚敏，宋月霞，等.sB7-H3與急性心肌梗死預后的關系.心臟雜志，2010，22：81-83.

3 嚴江濤，葉輝，江道文.微量白蛋白尿與血漿高敏C反應蛋白的關系.中華心血管病雜志，2005，33：534-535.

4 賴劍波，江勇，姚志軍.苯那普利對高血壓腎病患者鳥微量白蛋白和C反應蛋白的影響.中華高血壓雜志，2009，17：76-77.

5 Liao YH，Wei YM，Wang M，et al.Autoantibodies against AT1-receptor and 1-adrenergic receptor in patients with hypertension.Hyertens Res，2002，25：641.

6 謝秀梅，李志凌，李兢，等.老年原發性高血壓微量白蛋白尿與血管內皮功能及頸總動脈粥樣硬化.高血壓雜志，2006，14：94-96.

7 Chapoval AI，Ni J，Lau JS，et al.B7-H3：a costimulatory molecule for T cell activation and IFN-γ production.Nat Immunol，2001，2：269-274.