食物殘渣STR分型破案1例

劉亞舉，蘇偉民

（1.許昌市公安局 刑事科學技術研究所，河南 許昌 461000；2.長葛市公安局 刑偵大隊，河南 長葛461500）

1 案例

1.1 案情簡要

2012年6月下旬至9月上旬，某轄區內先后發生多起入室盜竊案，受害人早上離家外出務工，晚上回家時發現家中被盜?？彬炄藛T在不同的現場分別提取到1.7cm×2.1cm咀嚼過的油條食物殘渣1份和咬嗑的瓜籽殼11粒，所有物證均在案發當天提取，第二天送至DNA室，受理后立即進行DNA檢驗。

1.2 DNA檢驗及結果

將油條食物殘渣平均放入兩支1.5mL離心管中，編為1號、2號檢材；取8粒瓜籽殼也平均放入兩支1.5mL離心管中，編為3號、4號檢材。檢材采用英國LGC公司AGOWA sbeadex?磁珠法法醫試劑盒進行手動DNA提取，具體步驟如下：（1）細胞裂解：在離心管內加入200μL裂解液FN和9μL PK（試劑盒自帶，干粉狀，加9mL純水溶解混勻），漩渦震蕩5S，65℃保溫 30min。（2）磁珠結合 DNA：離心后取 190μL 上清液于新的離心管，同時加入380μL結合液FN和10μL磁珠，充分混勻溶液，室溫放置2min（期間震蕩數次），將離心管置于磁力架上，1min后吸去液體。（3）洗滌：加300μL洗液FN1，震蕩混勻，室溫放置5min（期間震蕩數次），置于磁力架上，1min后吸去液體；再加300μL洗液FN2，重復上述步驟；最后加300μL純水，再重復上述步驟。（4）洗脫DNA：加60μL洗脫液FN，充分混勻溶液，62℃溫浴10min（期間震蕩數次），震蕩后速置于磁力架上，3min后吸取50μL DNA溶液備檢。

按照Identifiler試劑盒說明書配制PCR反應液，其中取反應液混合物6μL和上述模板DNA4μL在9700型擴增儀上標準程序進行復合擴增。擴增產物在3500XL型遺傳分析儀上檢測，用GeneMapper IDX軟件進行STR分型。結果顯示，1～4號檢材均未得到完整STR分型。于是將1號、2號油條食物殘渣DNA溶液合并于Microcon-100柱管中，3號、4號瓜籽殼DNA溶液合并于另外一個Microcon-100柱管中，其中Microcon-100柱管為斜底面，型號30K。然后在Eppendorf冷凍離心機上先14 000rpm離心30min，最后再1 000rpm離心10min，分別得到濃縮DNA溶液15μL左右。將濃縮后的DNA溶液仍按上述方法擴增檢測，最終得到完整DNA分型（見圖1）。

1.3 DNA數據庫比對

將STR分型結果錄入至本市DNA數據庫系統后，與江蘇一現場物證串并，并比中2010年9月安徽省某市檢驗入庫的違法人員姚某（男性，19歲，系本報道發案地居民）。抓獲姚某后，供述了上述等多起入室盜竊案件。

2 討論

由于口腔黏膜上皮細胞具有代謝旺盛、易脫落等特點，在外力作用下可以遺留在相應的載體上，當承載體和外部接觸后，由于環境的影響，這些檢材就會有不同程度的DNA降解和混合大量不同種類的抑制劑，導致DNA提取和PCR擴增失敗，繼而得不到完整STR分型結果，給后期的分析帶來困難，因此去除PCR抑制劑和樣品DNA回收量是成功的關鍵。

磁珠法核酸純化技術是利用強永磁體以確保DNA進行有效分離，省略了離心和苯酚等有機溶劑提取步驟。LGC公司AGOWA sbeadex?法醫試劑盒的磁珠呈咖啡色，顆粒微小，具有小尺寸效應和表面效應，無沉淀易于分散，其磁粒是被修飾過的超順性粒子，可以對小的或大的DNA片段進行有效地、高質量地純化；非極性的結合緩沖溶液改變DNA的周圍存在環境，驅使極性的DNA特異性結合到極性的磁珠表面，適量的磁珠，偶聯得到的DNA產量和質量高；經過兩種洗液和純水洗滌增強了去除抑制劑的作用，洗滌過程中無需干燥即可洗脫，節省了操作時間，60μL洗脫液溶解的DNA半定量效果好，并能對產量進行均一化，使下游的擴增檢測得到的STR峰型尖銳清晰、均衡性好，無非特異性產物。該試劑盒不僅可以手動操作，而且也可以在自動化設備上使用[1]，適用于法醫現場各類檢材。在本案中，為了保證檢材被裂解液充分浸沒，故將每份檢材分成2份進行DNA提取，由于60μL的洗脫體積沒有得到完整STR分型，于是將每同種檢材的DNA溶液合并，并聯合使用了斜底面（30K）的 Microcon-100柱[2]，沒有額外變換DNA溶液成分，只是將多余水分過濾掉，集中了DNA溶液濃度，從而成功檢出STR分型。

圖1 A為油條食物殘渣STR分型，B為咬嗑瓜籽殼STR分型

我國DNA數據庫高速發展，庫容豐富，實驗室間聯網運行，實現了資源共享，共同發展。該案的快速偵破也是得益于DNA數據庫的發展成果，DNA數據庫的快速發展也促進著實驗室檢驗方法的提高，最終實現破案效益的最大化。

[1]孫大成，孫善永，姜曜恒，等.應用自動化工作站批量提取生物檢材 DNA[J].法醫學雜志，2011，27（1）：54-55.

[2]顧麗華，董研，張晨，等.濃縮DNA法結合miniSTR分型技術檢驗微量 DNA[J].法醫學雜志，2010，26（5）：361-363.