β2微球蛋白和調節T細胞在非霍奇金淋巴瘤中的應用

黃晶

β2微球蛋白和調節T細胞在非霍奇金淋巴瘤中的應用

黃晶

目的探討血清β2微球蛋白(β2-MG)和CD4+CD25+CD127low/-調節性T細胞(regulatory T cells,Treg)在非霍奇金淋巴瘤(NHL)中的臨床意義。方法對67例非霍奇金淋巴瘤患者按骨髓涂片檢查結果分為淋巴瘤白血病組，有骨髓侵潤組和無骨髓侵潤組。40例健康體檢者為對照組。用AU2700全自動生化分析儀分別對其血清進行β2-MG進行檢測，同時用流式細胞儀檢測外周血CD4+CD25+CD127low/-調節性T細胞表達百分率。結果①非霍奇金淋巴瘤患者的血清β2-MG水平明顯高于對照組(P<0.01)，其中淋巴瘤白血病組和有骨髓侵潤組β2-MG水平高于無骨髓侵潤組(P<0.01);淋巴瘤白血病組高于骨髓侵潤組(P<0.01).3組非霍奇金淋巴瘤患者化療后β2-MG水平均低于化療前的水平(P<0.05)。②非霍奇金淋巴瘤患者、健康對照組外周血CD4+CD25+CD127low/-調節性T細胞占CD4+淋巴細胞的比例分別為6.73±1.79%、4.15±1.43%。非霍奇金淋巴瘤患者Treg細胞表達高于健康對照組，差異有顯著性(P<0.05)；淋巴瘤白血病組和有骨髓侵潤組Treg細胞表達比例明顯高于無骨髓侵潤組(P<0.05)，疾病越嚴重，Treg細胞表達水平越高;非霍奇金淋巴瘤患者化療前外周血CD4+CD25+CD127low/-調節性T細胞水平升高，化療后外周血Treg細胞水平降低，結論血清β2微球蛋白和CD4+CD25+CD127low/-調節性T細胞檢測對非霍奇金淋巴瘤的診斷，療效及預后的判斷具有重要的臨床價值。

非霍奇金淋巴瘤; β2微球蛋白;血清; CD4+CD25+CD127low/-調節性T細胞 流式細胞術

β2微球蛋白(β2-MG)是機體內一種小分子蛋白質，以構成MHC-I類分子發揮作用[1]。非霍奇金淋巴瘤(NHL)是一組高度異質性的淋巴系統惡性腫瘤[2]。由于克隆性增生的淋巴細胞功能不一，并在體內廣泛分布，因此它可以累及任何一個器官。骨髓是其常侵犯的部位之一[3]。淋巴瘤中，β2-MG可以從腫瘤細胞和免疫細胞上脫落，β2-MG升高預示著疾病進展和和預后不良。調節性T細胞(regulatory T cells,Treg)由Sakaguchi等在1995年首次報道，近年來發現調節性T細胞在多種實體腫瘤如卵巢癌、肺癌、肝癌、黑色素瘤、胃腸道腫瘤等患者的外周血和腫瘤局部組織升高[4]可抑制CD4+T細胞、CD8+T細胞的功能，參與腫瘤負調控，作為預后較差的一個獨立指標。我們檢測了67例NHL患者血清中的β2-MG水平和外周血CD4+CD25+CD127low/-調節性T細胞表達百分率，了解其在非霍奇金淋巴瘤中的臨床價值。

1 資料與方法

1.1研究對象 2005年2月至2009年2月在我院住院的NHL患者67例，男43例，女24例，年齡8～74歲，中位年齡48歲。均經病理學或細胞穿刺確診，骨髓涂片檢查分類中淋巴瘤細胞比例≥25%或外周血出現淋巴瘤細胞診斷為淋巴瘤細胞白血?。?%≤淋巴瘤細胞≤20%診斷為骨髓侵潤；<5%或未找到典型淋巴瘤細胞為無骨髓侵潤組[5]。根據上述分類標準將67例患者分為:淋巴瘤白血病20例；骨髓侵潤組23例，無骨髓侵潤組24例。所有患者均除外可能引起血清β2-MG水平和外周血CD4+CD25+CD127low/-調節性T細胞升高的其他疾病。對照組40例均為來我院健康體檢者，男15例，女25例，年齡9歲～76歲，平均年齡51.1歲。

1.2方法 患者治療前及治療2～4個療程后,分別于清晨空腹采集靜脈血4 ml,2 ml EDTA-2K抗凝，流式細胞術分析；2 ml分離出血清，β2-MG采用免疫透射比濁法，在AU2700全自動生化分析儀上進行檢測，試劑由奧林巴斯原廠提供，β2-MG<2 mg/L為正常。

1.3外周血CD4+CD25+CD127low/-Treg檢測 取兩個流式試管，分別加入mouseIgG1-FITC/mouse IgG1 - PE/CD4-PE-Cy5和CD25-FITC/CD127 - PE/CD4-PE-Cy5,每管再加100ul抗凝全血，混勻，避光孵育30 min,2 ml溶血素溶血，PBS洗兩次，流式細胞儀檢測，CellQuest軟件獲取并分析，計算外周血CD4+CD25+CD127low/-Treg占CD4+淋巴細胞比例，試劑均采用美國BD公司產品，包括溶血素(FACSLying)等。FACSCalibur型流式細胞儀購自美國BD公司。

1.4統計學方法 采用SPSS 17.0軟件包對數據進行統計學分析，組間比較采用t檢驗，P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1①NHL各組的β2-MG水平明顯高于對照組，差異有顯著性(P<0.01),其中淋巴瘤白血病組與骨髓侵潤組β2-MG水平均高于無骨髓侵潤組(P<0.01)；淋巴瘤白血病組β2-MG水平高于骨髓侵潤組(P<0.01)。②NHL患者CD4+CD25+CD127low/-Treg表達高于健康對照組，差異有顯著性(P<0.05)，其中淋巴瘤白血病組與骨髓侵潤組Treg水平均高于無骨髓侵潤組(P<0.05)；淋巴瘤白血病組Treg水平高于骨髓侵潤組(P<0.05)，詳見表1。

2.2①67例非霍奇金淋巴瘤患者治療前的β2-MG的平均檢測結果為(6.60±1.12)mg/L，治療后的檢測結果為(3.45±1.19)mg/L，治療后的檢測結果明顯下降，兩者比較差異有統計學意義(P<0.01)。②化療前外周血CD4+CD25+CD127low/-調節性T細胞水平升高，化療后外周血Treg細胞水平降低，差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表1 各組非霍奇金淋巴瘤患者與對照組Treg和β2-MG檢測結果

表2 67例非霍奇金淋巴瘤治療前，后檢測結果

3 討論

β2-MG是一種相對分子質量較小的蛋白質，為細胞膜上完整組織相容性抗原的一部分。除紅細胞與胎盤滋養層細胞外，所有正常有核細胞與腫瘤細胞表面均存在，是一種非特異性腫瘤標志物，有研究表明惡性淋巴瘤患者血清β2-MG濃度增高，可能是由于細胞周轉增加，它通常反映了腫瘤的負荷，廣泛病變者高于局限病變者[6]。人體β2-MG水平相當恒定，β2-MG容易通過腎小球濾過膜，幾乎全部由近曲小管以胞飲方式攝取，在局部被代謝降解為氨基酸[7]。在排除肝臟，腎臟疾病和自身免疫性疾病后，β2-MG水平明顯增高提示骨髓可能發生侵潤。多數學者認為，β2-MG水平持續升高，提示病情惡化，腫瘤患者治療后β2-MG水平明顯下降者病情多穩定。β2-MG升高組復發率高于β2-MG正常組。本文檢測結果顯示：非霍奇金淋巴瘤組β2-MG含量顯著高于對照組(P<0.01)，差異具有顯著性。淋巴瘤白血病組與骨髓侵潤組β2-MG水平均高于無骨髓侵潤組(P<0.01)；淋巴瘤白血病組β2-MG水平高于骨髓侵潤組(P<0.01)。由此可見：β2-MG是一個重要的非霍奇金淋巴瘤血清學標記物，對非霍奇金淋巴瘤的診斷及對骨髓是否侵潤具有重要的臨床意義。67例非霍奇金淋巴瘤β2-MG水平從化療前的(6.60±1.12)mg/L下降至化療有效后的(3.45±1.19)mg/L，前后有顯著性差異(P<0.01)。以上數據說明，β2-MG升高水平與疾病進展成正比，與治療反應和疾病預后成反比。

本研究顯示NHL患者CD4+CD25+CD127low/-Treg表達率高于健康對照組，其中淋巴瘤白血病組尤高，與無骨髓侵潤組相比有顯著性差異。Treg細胞比例升高可抑制機體免疫功能，可能是NHL腫瘤細胞逃避抗腫瘤免疫反應，導致腫瘤發生、發展的原因之一。

有許多研究表明，腫瘤患者摘除腫瘤組織或化療后體內的CD4+CD25+CD127low/-Treg降低[8]。本研究同時比較了NHL患者化療前與化療后外周血CD4+CD25+CD127low/-調節性T細胞比例，發現化療前外周血Treg細胞比例升高，化療后及緩解期患者較治療前患者外周血Treg細胞比例明顯降低，提示腫瘤負荷與NHL患者體內的CD4+CD25+CD127low/-Treg數量有關，治療或緩解期患者的免疫抑制狀態得到一定糾正，這可能是細胞免疫功能恢復，產生抗腫瘤免疫反應，從而抑制腫瘤生長或殺滅腫瘤的原因之一。CD4+CD25+CD127low/-Treg細胞比例可作為腫瘤患者免疫功能狀態的一種客觀標志，對臨床觀察病情發展有很大的指導意義。

以往研究表明，IPI,LDH,β2-MG對NHL患者的預后有重要提示作用，本研究分析了初診患者Treg細胞表達水平與這些常規預后指標間的關系，結果表明67例初診患者中Treg細胞的表達與IPI,LDH和β2-MG之間呈明顯正相關。

綜上所述，β2-MG代表NHL的腫瘤負荷，Treg細胞可作為腫瘤患者免疫功能狀態的一種客觀標志，項目聯合檢測可以提高疾病的診斷效率，聯合檢測β2-MG和Treg細胞可提高非霍奇金淋巴瘤的療效和判斷預后的敏感度和特異度，對非霍奇金淋巴瘤的治療、復發、轉移提供依據。

[1] Jan K.The HLA system:Firstof two parts.N Engl J Med,2000,343(10):702-709.

[2] 江紅，李佩章，勞明.血清LDH和β2-MG水平與非霍奇金淋巴瘤的預后關系.醫學研究雜志，2008,37(10):91-92.

[3] 李志陽，王金龍，李菊香.非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯后骨髓象分析.實用醫學雜志，2009,25(3):428-429.

[4] Pyzik M,Piccirillo CA.TGF-bet al modulates Foxp3 expression and regulatory activity in distinct CD4+T cell subsets’.J Leukoc Biol,2007,82(2):335-346.

[5] 吳曉芝.血液病診斷與鑒別診斷圖譜.北京：人民衛生出版社，2009:221-226.

[6] 何暉，翟明，劉麗君.NHL患者血清β2-MG和LDH水平與骨髓侵潤的相關性研究.白血病，淋巴瘤，2003,12(1)；18-20.

[7] Federico M,Guglielmi C,Lnminary S,et al.Prognostic relevance of serum β2-microglobulin in patients with follicular lymphoma treated with anthracycline - containing regimens.A GISL study.Haematologica,2007,92(11):1482-1488.

[8] 章圣輝，韓義香，吳建波，等.子宮頸癌患者外周血CD4+、CD25+、CD127low/-調節性T淋巴細胞的含量及腫瘤免疫水平檢測.中華婦產科雜志，2007,42(6)：419-420.

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