舒康平喘膠囊的薄層色譜鑒別

李 陽，韓 濤，景 明，吳紅彥，趙 磊，余曉暉

(甘肅中醫(yī)學(xué)院，甘肅省高校中(藏)藥化學(xué)與質(zhì)量研究省級重點實驗室，甘肅蘭州 730000)

支氣管哮喘是一種由多種細胞特別是嗜酸粒細胞、T淋巴細胞、肥大細胞等參與的氣道慢性炎性疾病，屬于中醫(yī)學(xué)“哮病”范疇，是嚴(yán)重威脅人類健康的一種主要慢性疾病［1］。舒康平喘膠囊是在中醫(yī)理論的指導(dǎo)下，根據(jù)痰飲理論及哮病的致病因素由純中藥組方而成［2］，該制劑主要由威靈仙、仙鶴草、桔梗、地龍等組成，具有豁痰化痰、宣肺平喘、軟堅散結(jié)、活血化瘀的作用，主要用于治療哮喘。通過對舒康平喘膠囊純中藥制劑的研究，以完善和補充中醫(yī)藥對該病的辨證論治規(guī)律，更好地保障人群健康。為控制舒康平喘膠囊的質(zhì)量，保證用藥安全有效，對方中的威靈仙、仙鶴草、桔梗、地龍4味藥分別進行了薄層色譜定性鑒別研究。

1 材料

ZF7C三用紫外分析儀(上海康華生化儀器制造廠);硅膠G(青島海洋化工有限公司);齊墩果酸對照品(中國藥品生物制品檢定所，110709—200505);其他所用試劑均為分析純。舒康平喘膠囊(由甘肅中醫(yī)學(xué)院科研實驗中心自制)，對照藥材購自于蘭州復(fù)興厚藥材有限責(zé)任公司，經(jīng)甘肅中醫(yī)學(xué)院楊扶德老師鑒定均為正品。

2 方法及結(jié)果

2.1 威靈仙薄層定性鑒別［3-8］

2.1.1 制備對照品溶液 精密稱取適量齊墩果酸對照品，用無水乙醇配成0.45 mg/mL對照品溶液，備用。

2.1.2 制備供試品溶液 取舒康平喘膠囊內(nèi)容物粉末4 g，加乙醇50 mL，加熱回流2 h，濾過，濾液濃縮至約20 mL，加鹽酸3 mL，加熱回流1 h，加水10 mL，放冷，加25 mL石油醚(60～90℃)，振搖，蒸干溶劑，用10 mL無水乙醇將殘渣溶解，為供試品溶液，備用。

2.1.3 制備對照藥材溶液 取威靈仙對照藥材1 g，按2.1.2項下方法制得對照藥材溶液。

2.1.4 制備陰性樣品液 按樣品處方配比，稱取不含威靈仙的其他藥材，模擬生產(chǎn)工藝制成缺威靈仙的陰性對照膠囊，按2.1.2項下方法制成陰性樣品液。

2.1.5 薄層色譜及結(jié)果 依照藥典中薄層色譜法［3］，將以上供試品溶液、對照藥材溶液、對照品溶液、陰性樣品溶液各吸取約4μL，在同一硅膠G板上分別點樣，環(huán)己烷-丙酮-醋酸乙酯(5∶2∶1)展開，取出待晾干后噴以顯色劑(10%的硫酸乙醇溶液)，在105℃加熱至斑點清晰顯色。與對照藥材色譜對照，供試品色譜在相應(yīng)位置上顯出相同顏色的斑點，陰性樣品沒有產(chǎn)生干擾。見圖1。

2.2 仙鶴草薄層定性鑒別［3-4，9-11］

2.2.1 制備供試品溶液 取舒康平喘膠囊粉末4 g，加石油醚(60～90℃)30 mL，超聲提取30 min，過濾，濾液揮干溶劑，殘渣加2 mL三氯甲烷溶解，得到供試品溶液［3］。

2.2.2 制備對照藥材溶液 取仙鶴草對照藥材1 g，按2.2.1項下方法制備得對照藥材溶液。

圖1 威靈仙薄層鑒別

2.2.3 制備陰性樣品溶液 按樣品處方配比，稱取不含仙鶴草的其他藥材，模擬生產(chǎn)工藝制成缺仙鶴草的陰性對照膠囊，按2.2.1項下方法制成陰性樣品液。

2.2.4 薄層色譜及結(jié)果 依照藥典中薄層色譜法［4］，將以上供試品溶液、陰性樣品溶液各吸取4μL，對照藥材溶液吸取3μL，于同一硅膠G板上分別點樣，使用環(huán)己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(25∶5∶1)展開，取出待晾干后噴以顯色劑(10%硫酸乙醇溶液)，在105℃加熱至斑點清晰顯色。與對照藥材色譜對照，供試品色譜在相應(yīng)位置上顯出相同顏色的斑點，陰性樣品沒有干擾。見圖2。

圖2 仙鶴草薄層鑒別

2.3 桔梗薄層定性鑒別［3-4，12-14］

2.3.1 制備供試品溶液 取舒康平喘膠囊粉末4 g，加7%硫酸乙醇-水(1∶3)混合液20 mL，回流提取3 h，冷卻后，用20 mL三氯甲烷振搖提取2次，合并三氯甲烷液，加30 mL水洗滌2次，棄去洗液，三氯甲烷液中加無水硫酸鈉脫水，過濾，蒸干濾液，殘渣加1 mL甲醇溶解，為供試品溶液。

2.3.2 對照藥材溶液的制備 稱取桔梗對照藥材1 g，按2.3.1項下制備對照藥材溶液。

2.3.3 制備陰性樣品溶液 按樣品處方配比，稱取不含桔梗的其他藥材，模擬生產(chǎn)工藝制成缺桔梗的陰性對照膠囊，按2.3.1項下方法制成陰性樣品液。

2.3.4 薄層色譜及結(jié)果 依照藥典中薄層色譜法［4］，將以上供試品溶液、對照藥材溶液、陰性樣品溶液各吸取5μL，同一硅膠G板上分別點樣，石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯(30∶10)展開，取出待晾干后噴以顯色劑(10%硫酸乙醇溶液)，在105℃加熱至斑點清晰顯色。與對照藥材色譜對照，供試品色譜在相應(yīng)位置上顯出相同顏色的斑點，陰性樣品沒有產(chǎn)生干擾。見圖3。

圖3 桔梗的薄層色譜鑒別

2.4 地龍薄層定性鑒別［3-4，15-17］

2.4.1 制備供試品溶液 取5 g舒康平喘膠囊粉末，加30 mL三氯甲烷，使用超聲提取30 min，過濾，水浴上蒸干溶劑，殘渣用1 mL三氯甲烷溶解，制成供試品溶液。備用。

2.4.2 制備對照藥材溶液 稱取1 g地龍對照藥材，按2.4.1項下方法制備得對照藥材溶液。

2.4.3 制備陰性樣品溶液 按樣品處方配比，稱取不含地龍的其他藥材，模擬生產(chǎn)工藝制成缺地龍的陰性對照膠囊，按2.4.1項下方法制成陰性樣品液。

2.4.4 薄層色譜及結(jié)果 依照藥典中薄層色譜法［4］，分別吸取3μL上述供試品溶液、對照藥材溶液和陰性樣品溶液，于同一硅膠G板上分別點樣，使用苯-醋酸乙酯-甲酸(8∶2∶0.2)展開，取出待晾干后噴以顯色劑(10%硫酸乙醇溶液)，在105℃加熱至斑點清晰顯色，或在檢測波長365 nm紫外燈下觀察。顯色結(jié)果，與對照藥材色譜對照，供試品色譜在相應(yīng)位置上顯出相同顏色的斑點;紫外燈(365 nm)下檢視時，在與對照藥材相應(yīng)的位置有橙紅色熒光斑點。見圖4。

圖4 地龍的薄層色譜鑒別

3 討論

3.1 對威靈仙的鑒別試圖采用甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶3∶0.2)、苯-三氯甲烷-冰醋酸(10∶2∶0.2)等為展開劑，展開時分離效果不好，斑點不明顯，且陰性有干擾;后改用環(huán)己烷-丙酮-醋酸乙酯(5∶2∶1)為展開劑，分離效果好，斑點圓整且無干擾，Rf值適中。

3.2 仙鶴草的鑒別曾參考宮瘤消膠囊的樣品處理方法和鑒別條件［10］，但供試品色譜中無與對照藥材相應(yīng)的斑點;后以丹芩顆粒中仙鶴草的薄層鑒別為參考［9］，進行樣品處理，以環(huán)己烷-醋酸乙酯-冰醋酸(25∶5∶1)為展開劑，分離效果好，斑點清晰，無干擾。

3.3 地龍中含有多種氨基酸(如鳥氨酸、賴氨酸、絲氨酸等)、中性脂(膽甾醇等)、結(jié)合脂(膽堿縮醛磷脂等)等成分，實驗中曾參照藥典中地龍項下的方法和條件進行薄層色譜分析［4］，結(jié)果在陰性中均有干擾，后參照文獻改為鑒別地龍中的次黃嘌呤［15］，陰性無干擾，且分離較好。

3.4 地龍的薄層鑒別試圖采用甲苯-丙酮(9∶1)、醋酸乙酯-冰醋酸-水(8∶2∶1)、環(huán)己烷-三氯甲烷-水(8∶3∶0.3)、環(huán)己烷-冰醋酸-水(8∶2∶1)等為展開劑，在紫外(365 nm)下檢視陰性均有干擾;后調(diào)整為苯-乙酸乙酯(9∶1)展開，噴10%硫酸乙醇溶液顯色，陰性無干擾，但斑點分離效果不佳，Rf值偏小;經(jīng)摸索最終選定苯-醋酸乙酯-甲酸(8∶4∶0.2)為展開劑，斑點清晰，分離效果好，無干擾。

3.5 本研究結(jié)果表明，各薄層色譜所得斑點清晰，分離度良好，專屬性強，陰性樣品無干擾，重現(xiàn)性好，方法簡便易行，可作為該制劑質(zhì)量控制的方法。

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