β防御素-2和γ干擾素在尖銳濕疣皮損中表達(dá)的研究

屈麗 甄莉

尖銳濕疣（CA）是由人乳頭瘤病毒（HPV）感染引起的常見(jiàn)性傳播疾病之一，主要通過(guò)性接觸傳染。由于CA的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，且有資料表明，某些生殖器的乳頭瘤病毒感染還與腫瘤的發(fā)生有關(guān)[1]，因此該病已引起人們的廣泛重視。IFN-γ又稱(chēng)免疫干擾素，在拮抗細(xì)胞內(nèi)病毒感染起重要作用[2]。人β-防御素2是人體中可誘導(dǎo)性的防御素，是機(jī)體抵御病原微生物入侵的重要組成部分，并與多種皮膚病的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)[3]，而HBD-2與尖銳濕疣的相互關(guān)系，國(guó)外鮮有報(bào)道，國(guó)內(nèi)還未曾有類(lèi)似報(bào)道，筆者研究HBD-2、IFN-γ在尖銳濕疣皮損中的表達(dá)，以進(jìn)一步探討HBD-2和IFN-γ在尖銳濕疣的發(fā)病和轉(zhuǎn)歸中的作用。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本 收集近3年經(jīng)臨床與病理確診為尖銳濕疣的病例，25例入選的尖銳濕疣患者均為本院皮膚性病門(mén)診就診的初發(fā)CA患者，25例尖銳濕疣患者中，男15例，女10例，年齡20～65歲，病程15 d～7個(gè)月。取20例尋常型銀屑病患者皮損標(biāo)本作為陽(yáng)性對(duì)照，男12例，女8例，年齡18～75歲，病程1個(gè)月～2年。取本院整形外科美容整形手術(shù)患者作為正常對(duì)照組，共25例，男15例，女10例，年齡16～45歲。入選所有病例3個(gè)月內(nèi)均未接受免疫療法及其他治療，且排除自身免疫性疾病和其他感染性疾病。

1.2 方法 蠟塊行4 μm切片，常規(guī)脫蠟、水化，檸檬酸修復(fù)，磷酸鹽緩沖液（PBS）浸洗，3%過(guò)氧化氫滅活，PBS浸洗后，山羊血清室溫孵育20 min，滴加一抗，HBD-2、IFN-γ的一抗來(lái)自武漢博士德公司，工作濃度分別為1：100、1：200，4 ℃過(guò)夜，PBS浸洗后，滴加二抗（武漢博士德公司），顯色，封片。省略一抗作為陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定 顯微鏡下觀察，HBD-2、IFN-γ以胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。陰性結(jié)果為不著色。每張切片于光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)選取5個(gè)高倍鏡視野（×400）。利用MIAS22000圖像分析系統(tǒng)件測(cè)定陽(yáng)性區(qū)域平均光密度值，以平均光密度值代表陽(yáng)性產(chǎn)物表達(dá)的多少。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)各組平均光密度值進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間比較采用Wilcoxon秩和檢驗(yàn)，指標(biāo)間相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HBD-2的表達(dá) 正常皮膚的基底層可見(jiàn)HBD-2的少量表達(dá)，尖銳濕疣皮損的基底層可見(jiàn)表達(dá)。銀屑病皮損的表皮全層可見(jiàn)表達(dá)。HBD-2在尖銳濕疣表皮中的表達(dá)，比正常皮膚高（Z=-5.147，P<0.05），但比銀屑病皮損低（Z=-7.174，P<0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 IFN-γ的表達(dá) 在正常皮膚的表皮層可見(jiàn)IFN-γ的表達(dá)，尖銳濕疣皮損基底層表達(dá)可見(jiàn)表達(dá)，在銀屑病皮損的表皮全層可見(jiàn)表達(dá)。IFN-γ在尖銳濕疣表皮的表達(dá)比正常皮膚和銀屑病（Z=-6.311，P<0.05；Z=-7.230，P<0.05）均低。見(jiàn)表1。

2.3 相關(guān)性分析 尖銳濕疣組中HBD-2和IFN-γ的相關(guān)系數(shù)r為0.123，P=0.467>0.01，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，在尖銳濕疣中HBD-2和IFN-γ無(wú)相關(guān)性。

表1 HBD-2、IFN-γ在尖銳濕疣、銀屑病和正常人皮膚的表達(dá)情況

3 討論

自1984年中性粒細(xì)胞分離出HNP-3以來(lái)，已有數(shù)十種防御素被發(fā)現(xiàn)，其中β-防御素2是人體中第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的可誘導(dǎo)的防御素，也是目前研究最深入的防御素之一。1997年Harder[4]發(fā)現(xiàn)銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中HBD-2表達(dá)增高，此后在包皮、肺、氣管、口腔黏膜、皮膚的上皮及腫瘤組織中均發(fā)現(xiàn)其表達(dá)。國(guó)內(nèi)外多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)，防御素有廣譜抗細(xì)菌、抗真菌、抗病毒活性和細(xì)胞毒性等作用并與多種疾病的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)[5]。近年來(lái)，對(duì)艾滋病的研究發(fā)現(xiàn)，HIV-1誘導(dǎo)HBD-2mRNA的表達(dá)量為正常口腔上皮細(xì)胞產(chǎn)生HBD-2的4倍[6]。研究發(fā)現(xiàn)HBD-2在尖銳濕疣皮損中的表達(dá)較正常皮膚高，但較銀屑病皮損中的HBD水平低，推測(cè)HBD-2在尖銳濕疣的轉(zhuǎn)歸上有著重要的作用。

對(duì)IFN-γ在尖銳濕疣皮損區(qū)的表達(dá)的研究中發(fā)現(xiàn)，IFN-γ的表達(dá)主要見(jiàn)于基底層，較正常對(duì)照組及銀屑病組均偏低，這與郭雨良等[7]使用ELISA法檢測(cè)了尖銳濕疣疣體中IL-2和IFN-γ的水平的實(shí)驗(yàn)結(jié)果是一致的，這種低表達(dá)可能是導(dǎo)致尖銳濕疣發(fā)病和病情反復(fù)的重要原因，一些研究表明CA的發(fā)生、消退、復(fù)發(fā)及癌變都與機(jī)體的免疫功能有關(guān)[8]。尖銳濕疣患者主要是因?yàn)門(mén)h1與Th2功能失衡，Th1型細(xì)胞因子，如IFN-γ的降低使細(xì)胞免疫功能下降[9]，不能有效的清除病毒，Cauda等[10]的研究亦證明了這個(gè)觀點(diǎn)。

HBD是通過(guò)各種刺激因子包括細(xì)菌和各種炎癥因子刺激產(chǎn)生的（例如TNF-α，IFN-γ和IL-1）[11]，但是這些基因轉(zhuǎn)錄激活的分子機(jī)制尚未定義[12]。Kanda等[13]通過(guò)測(cè)定銀屑病血清中HBD-2及多個(gè)細(xì)胞因子的水平分析了HBD-2對(duì)人外周血中T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的影響，發(fā)現(xiàn)患者血清HBD-2水平比對(duì)照組高，并且IFN-γ，IL-17，TNF-α，IL-1β等增加了角質(zhì)形成細(xì)胞分泌HBD-2，HBD-2在T細(xì)胞可能結(jié)合了PTX敏感性G蛋白偶聯(lián)受體（S），通過(guò)JNK，MEK/ERK和PI3K/Akt途徑促進(jìn)IFN-γ，TNF-α，IL-10等的產(chǎn)生，HBD-2和IFN-γ有著相互促進(jìn)的作用。

Kreuter[14]的研究就表明，在角質(zhì)形成細(xì)胞中HPV病毒可以誘導(dǎo)HBD-2的產(chǎn)生，人乳頭狀瘤病毒誘導(dǎo)HBD可能是由于病毒的E5蛋白激活了表皮生長(zhǎng)因子受體所導(dǎo)致的，而具體的機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。研究顯示尖銳濕疣皮損中的HBD-2和IFN-γ不成正比，推測(cè)HBD-2可能是由病毒分子直接上調(diào)的，或者在尖銳濕疣中防御素與IFN-γ相互誘導(dǎo)的途徑受到了阻礙。IFN-γ的降低可能是導(dǎo)致尖銳濕疣難治和易復(fù)發(fā)的一個(gè)重要原因，而HBD-2高于正常皮膚卻低于銀屑病的皮損處，可能是由于尖銳濕疣雖然產(chǎn)生了一定的防御素的表達(dá)，但不足以完全抵御HPV的感染，這與Meyer-Hoffert等[15]得出的尖銳濕疣患者相對(duì)尋常疣低水平表達(dá)HBD-2，且臨床上皮疹持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)的結(jié)果是相一致，這項(xiàng)研究為尖銳濕疣的治療提供新的思路。

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