血清MMP-13及TGF-β1檢測在慢性肝病中的臨床價值

范永熙， 萬芙榮

(1.高密市人民醫院檢驗科，山東 高密261500;2.山東省千佛山醫院檢驗科，山東濟南250001)

慢性肝病的重要病理特征之一是肝纖維化，也是進一步向肝硬化發展的主要中間環節。研究表明，基質金屬蛋白酶-13(MMP-13)表達增強，可能是由于慢性炎癥肝組織中活化的肝星狀細胞過度分泌，而在肝癌組織中則主要由腫瘤細胞、間質成纖維細胞等過度分泌而致。MMP-13以酶原形式分泌，被激活后形成Ⅳ型膠原酶，降解、破壞肝癌周圍細胞外基質中的Ⅳ、Ⅴ型膠原及明膠，使肝癌細胞沿缺失基膜向外浸潤，導致侵襲與轉移發生［1］。轉化生長因子-β1(TGF-β1)則是細胞生長和分泌的多功能調節因子，參與促進細胞增殖中信號的傳遞，在肝癌組織中能誘導肝細胞發生凋亡，引起癌細胞惡性增殖，促使肝癌發展、播散。我們分析了慢性肝病(慢性肝炎、肝硬化、肝癌)患者血清MMP-13及TGF-β1水平，探討其在肝癌發生、發展中的臨床應用價值。

材料和方法

一、對象

選取高密市人民醫院2009年1月至2012年12月門診及住院的慢性肝炎患者50例、肝硬化患者50例、肝癌患者60例。另選擇健康體檢者50名作為正常對照組，年齡35～65歲。慢性肝炎、肝硬化、肝癌患者分別按照全國肝炎和肝癌防治協作組制定的標準診斷。

二、方法

1.MMP-13測定 采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗(ELISA)，試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供。按試劑盒說明書操作。

2.TGF-β1測定 采用雙抗體夾心 ELISA法，試劑盒由深圳晶美生物科技公司提供。按試劑盒說明書操作。

三、統計學方法

結 果

肝癌組與肝硬化組之間MMP-13水平差異無統計學意義(P＞0.05)，但明顯高于慢性肝炎組和正常對照組(P＜0.01)。肝癌組TGF-β1水平明顯高于肝硬化組、慢性肝炎組及正常對照組(P＜0.01)，而慢性肝炎組、肝硬化組和正常對照組之間差異無統計學意義(P＞0.05)。見表1。

表1 慢性肝病各組及正常對照組血清MMP-13、TGF-β1水平比較(±s)

表1 慢性肝病各組及正常對照組血清MMP-13、TGF-β1水平比較(±s)

注:與正常對照組比較，*P＜0.01;與慢性肝炎組比較，#P＜0.01;與肝硬化組比較，ΔP＜0.01

肝癌組 60 329.02±70.04*# 0.96±0.12正常對照組 50 279.03±32.80 2.22±1.08*Δ

討 論

在肝纖維化形成、原發性肝癌侵襲與轉移過程中，MMP-13起著重要的作用。血清MMP-13水平與慢性肝炎、肝硬化分級呈正相關，與肝癌組織分化程度、分期密切相關［2］。慢性肝損傷時，以膠原為主的細胞外基質(ECM)合成增多，降解相對減少，沉積在肝內引起肝纖維化，導致肝小葉改建、假小葉和結節形成，產生肝硬化。絕大多數肝癌的發生均伴有肝硬化的病理基礎，其中ECM過度沉積和異常分布，與其合成代謝及降解代謝失衡有關。MMP-13基因的表達與合成受諸多因素調控。MMP-13在肝纖維化及肝硬化的作用是特異性分解肝臟Ⅰ、Ⅲ型膠原，對肝癌的生長、浸潤、轉移起到作用。任雪霞等［3］應用免疫組化和原位雜交方法研究了MMP-13蛋白及MMP-13 mRNA在人肝細胞肝癌及癌旁組織中的表達，結果顯示MMP-13蛋白及MMP-13 mRNA水平在肝癌組織中的表達明顯高于癌旁組織，提示 MMP-13在腫瘤的和生長過程中發揮一定作用，可能與肝癌的侵襲和轉移有關。

TGF-β1主要參與正常細胞及轉化細胞的生長與分化，調控細胞增殖。TGF-β1在肝臟中產生，在肝癌組織中處于過度表達狀態，使正常肝細胞發生凋亡，引起肝癌細胞惡性增殖，同時還引起機體免疫功能下降，促進肝癌的發展與播散。血清TGF-β1水平增高的機制是肝癌發生發展過程中肝癌細胞過度表達 TGF-β1 m RNA。Li等［4］研究表明腫瘤組織的微環境是通過TGF-β/Smad通路影響肝細胞癌的進展和侵襲。本研究結果也表明，肝癌組MMP-13水平明顯高于慢性肝炎組及正常對照組，但與肝硬化組無明顯差異，提示MMP-13與肝癌細胞的生長、浸潤和轉移有關。肝癌患者通常伴有肝硬化，因此肝癌患者MMP-13水平的變化能反映肝纖維化逐漸發展為肝癌的過程。本研究結果顯示肝癌患者TGF-β1水平明顯高于肝硬化及慢性肝炎患者，提示TGF-β1升高與肝癌有一定關系。因此，動態及聯合檢測慢性肝病患者血清中MMP-13及TGF-β1水平，有一定的臨床應用價值，可能有助于肝癌的診斷及病情監測。

［1］邱歷偉，姚登福，黃 峰，等.慢性肝病患者轉化生長因子-β1、腫瘤壞死因子-α和基質金屬蛋白酶-13表達與臨床價值［J］.南通大學學報(醫學版)，2005，25(4):244-246.

［2］朱建云，張建忠，黃書明，等.MMP-13和TIMP-1在良惡性肝病患者血清、肝組織中的表達及臨床意義［J］.臨床檢驗雜志，2012，30(6):433-435.

［3］任雪霞，徐正府，黃介飛，等.MMP-13及 MMP-13 mRNA在人肝細胞肝癌及癌旁組織中的表達［J］.江蘇醫藥，2009，35(1):44-46.

［4］Li G，Qin L，Ye Q，etal.Organ microenvironment affects growth and metastasis of hepatocellular carcinoma via the TGF-β /Smad pathway in mice［J］.Exp Ther Med，2013，5(1):133-137.