復方益腎更寧合劑對圍絕經期大鼠E2、β-EP 的影響*

王新斌，趙粉琴，謝智慧，安蓉芳

( 甘肅中醫學院，甘肅 蘭州730000)

目前現代醫學對圍絕經期綜合征的治療常用的是激素替代療法，雖然其改善圍絕經期綜合征療效肯定，但因其可致陰道不規則出血、乳房脹痛、中遠期使用可致子宮內膜癌、乳腺癌等副作用而不被廣大婦女普遍接受，使而且應用有一定局限性。中醫藥對本病的研究已經逐步深入并且取得了一定的進度，治療上辨病與辨證相結合，著眼于整體調治，具有綜合性強，副作用少，遠期療效較穩定的特點，因此從中醫藥角度尋找較為理想的療法，成為研究的重點。本文通過對圍絕經期大鼠血清雌二醇(E2)及下丘腦β－內啡呔(β-EP)的測定，探討益腎更寧合劑防治圍絕經期綜合征的作用機制。

1 材料與方法

1．1 動 物

SPF 級SD 健康雌性大鼠60 只，鼠齡15～18 月，體質量(300±20)g;4～6 月齡SD 雌性大鼠10 只，體質量(250 ±20)g。動物合格證:SCXK(甘)2004－0006，均由甘肅中醫學院中心實驗室提供。

1．2 藥品、試劑與儀器

益腎更寧合劑由熟地黃12 g、山茱萸10 g、淫羊藿18 g、珍珠母30 g、白芍12 g、麥冬10 g、黃連6 g、紫草12 g 等組成，由甘肅中醫學院制劑室提供;尼爾雌醇，1 mg/片，北京四環制藥有限公司產品，國藥準字號［H11020123］。血清雌二醇(E2)、放射免疫盒，北京科美東雅生物技術有限公司提供，批號20070605;β－內啡呔(β-EP )放射免疫盒，北京華英生物技術研究所提供，批號20070730。80－1 型電動離心機，金壇市恒豐儀器廠產品;GC－911 型γ－放射免疫計數器，中國科技大學實業總公司產品，蘭空醫院放免科提供。

1．3 模型的建立

選取60 只15～18 月齡SPF 雌性SD 大鼠，連續5 d 進行陰道脫落細胞涂片及光學顯微鏡下觀察，無規律性動情周期變化，確定為圍絕經期大鼠［1］。

1．4 動物分組與給藥

據此選取15～18 月齡SD 雌性大鼠40 只，采用隨機數字法分為模型對照組(圍絕經期組)、尼爾雌醇組和益腎更寧合劑高劑量組、中劑量組、低劑量組，每組8 只。另選青年大鼠(鼠齡4～6 月)8 只作為青年對照組。參照文獻方法［2］，按人和大鼠間體表面積折算的等效劑量比率1∶0．018 計算給藥劑量。模型對照組、青年對照組以蒸餾水0．01 mL/g體質量灌胃，1 d 1 次。尼爾雌醇組，用蒸餾水配成混懸液，劑量為0．24 μg /g，相當于成人用量的8 倍，以0．01 mL/g 體質量灌胃，每2 周灌胃1 次。益腎更寧合劑高、中、低劑量組依次按生藥量26．56，13．28，6．64 g/kg，以0．01 mL/g 體質量灌胃，1 d 1 次。各組根據體質量變化，調整給藥劑量，連續給藥4 周。

1．5 檢測指標

大鼠于末次給藥并且禁食、禁水24 h 后，于腹主動脈采集血，離心分離血清，－20 ℃保存備用。大鼠血清E2、β-EP 檢測按試劑盒說明書操作。

1．6 統計學方法

采用SPSS 13．0 統計分析軟件處理。數據以均數()±標準差(s)表示，采用單因素方差分析。以P＜0．05 為差別有統計學意義。

2 結 果

益腎更年合劑可提高圍絕經期大鼠E2、β-EP含量，且存在著一定的量效關系。與模型組對照對比，各劑量用藥組E2、β-EP 含量均有所升高，其中益腎更年合劑高、中、低劑量組E2和高劑量組β-EP較之，差別均有統計學意義(P＜0．05)。結果見表1。

表1 各組大鼠血清E2、β-EP 含量對比 ng·L-1，±s

表1 各組大鼠血清E2、β-EP 含量對比 ng·L-1，±s

注:與模型對照組對比，* P ＜0．05，＊＊P ＜0．01;與青年對照組對比，# P ＜0．05 ，## P ＜0．01。

組 別 動物數 E2 β-EP模型對照組 7 7．547 1 ±0．806 7## 115．374 3 ±30．196 8##青年對照組 8 14．340 0 ±0．627 5 194．008 0 ±45．076 9＊＊尼爾雌醇組 8 11．137 1 ±0．932 6＊＊## 171．906 5 ±32．639 7*復方益腎更寧合劑高劑量組 8 10．213 1 ±0．782 1＊＊# 166．407 1 ±30．309 1*復方益腎更寧合劑中劑量組 8 9．283 8 ±0．539 5＊＊## 145．838 4 ±26．107 0#復方益腎更寧合劑低劑量組 8 8．953 3 ±0．821 7* ## 140．841 3 ±21．804 7#

3 討 論

女性進入圍絕經期，由于卵巢功能減退，雌激素分泌減少，對下丘腦－垂體－卵巢軸的負反饋作用減弱，使FSH、LH 分泌增加。雌激素的缺乏是發病的始動環節。本實驗中，復方益腎更寧合劑低、中、高劑量組血清E2含量較模型對照組升高，差別有統計學意義(P＜0．05)，且低劑量、中劑量、高劑量組血清E2含量按順序呈遞增趨勢，可見益腎更寧合劑能升高圍絕經期大鼠血清E2水平。近幾年，在中醫微觀辨證方面，有學者發現:雌激素水平低下者，大多與腎陰、癸水不足有關［3］。這也與本病的病因病機相符合。復方益腎更寧合劑中，主要有熟地黃、山茱萸、白芍、麥冬等藥物，著重滋補腎陰，以升高雌激素水平，調整紊亂的生殖內分泌系統。此外，現代藥理研究發現:淫羊藿能增強下丘腦－垂體－性腺軸及腎上腺皮質軸、胸腺軸等內分泌系統的分泌功能;紫草具有抗促性腺激素和絨毛膜促性激素的作用，具有雌激素樣活性［4］。據此推測，益腎更寧合劑提高E2水平的機制，亦與其含有“植物樣雌激素”成分，具有類似雌激素作用有關，但此尚需進一步證實。

β-EP 是神經肽類物質，參與調節呼吸、心血管運動、行為反應等，并有鎮痛，抑制腎上腺素、多巴胺、P 物質等釋放作用，且與內分泌系統相互影響，對促性腺激素釋放激素(GnRH)、FSH、LH 有抑制作用。中樞性β-EP 參與神經內分泌的調節，下丘腦弓狀核β－內啡肽神經元內有雌激素受體存在，成為雌激素在下丘腦的靶細胞之一。呂肖鋒等［5］研究發現:絕經婦女血中β-EP 及其抗體水平明顯低于正常育齡婦女，β－內啡肽的下降與雌激素的下降同步。β-EP 抗體的下降可能表示免疫系統對神經內分泌的調節紊亂，從而出現圍絕經期婦女神經精神癥狀。此外，有學者［6］提出，精神抑郁與神經介質的變化有關，而內啡肽可與多種神經介質(包括兒茶酚胺)發生交叉反應，干擾生物胺(5－羥色胺、γ－氨基酸、組織胺等)的代謝，從而影響情緒和行為，與圍絕經期抑郁的發生有關。本實驗中測定了圍絕經期大鼠下丘腦的β-EP 含量，發現益腎更年合劑高劑量組β-EP 與模型對照組對比，差別有統計學意義(P＜0．05)，說明益腎更寧合劑高劑量組可使下丘腦的β-EP 水平回升。提示益腎更寧合劑是治療β-EP 水平降低致圍絕經期情緒和行為異常等癥的有效藥物

本研究結果為益腎更寧合劑治療圍絕經期綜合征提供了實驗依據，即益腎更寧合劑能夠改善圍絕經大鼠體液內分泌功能，這可能是其治療圍絕經期綜合征作用機制之一。

［1］程化奇，熊舜華，殷新尤，等．大鼠更年期實驗模型研究［J］．實驗動物與比較醫學，1993，13(4):1921．

［2］黃繼汗，黃曉暉，陳志揚，等．藥理實驗動物間和動物與人體間的等效劑量換算［J］．中國臨床藥理學與治療，2004，9(9):1069－1071．

［3］夏桂成．中醫婦科理論與實踐［M］．北京:人民衛生出版社，2003:166．

［4］高學敏．中藥學［M］．北京:中國中醫藥出版社，2002:516－518．

［5］呂肖鋒，葉雪清．絕經后婦女血β－內啡肽及其抗體改變［J］．中國實驗臨床免疫學雜志，1993，5(4):37－38．

［6］Hanker JP，Schncider HP．Path0genesis and diognosis of disorders in the climacteric［J］．Gynakoioge，1986，19(4):210．