王新斌,趙粉琴,謝智慧,安蓉芳
( 甘肅中醫學院,甘肅 蘭州730000)
目前現代醫學對圍絕經期綜合征的治療常用的是激素替代療法,雖然其改善圍絕經期綜合征療效肯定,但因其可致陰道不規則出血、乳房脹痛、中遠期使用可致子宮內膜癌、乳腺癌等副作用而不被廣大婦女普遍接受,使而且應用有一定局限性。中醫藥對本病的研究已經逐步深入并且取得了一定的進度,治療上辨病與辨證相結合,著眼于整體調治,具有綜合性強,副作用少,遠期療效較穩定的特點,因此從中醫藥角度尋找較為理想的療法,成為研究的重點。本文通過對圍絕經期大鼠血清雌二醇(E2)及下丘腦β-內啡呔(β-EP)的測定,探討益腎更寧合劑防治圍絕經期綜合征的作用機制。
SPF 級SD 健康雌性大鼠60 只,鼠齡15~18 月,體質量(300±20)g;4~6 月齡SD 雌性大鼠10 只,體質量(250 ±20)g。動物合格證:SCXK(甘)2004-0006,均由甘肅中醫學院中心實驗室提供。
益腎更寧合劑由熟地黃12 g、山茱萸10 g、淫羊藿18 g、珍珠母30 g、白芍12 g、麥冬10 g、黃連6 g、紫草12 g 等組成,由甘肅中醫學院制劑室提供;尼爾雌醇,1 mg/片,北京四環制藥有限公司產品,國藥準字號[H11020123]。血清雌二醇(E2)、放射免疫盒,北京科美東雅生物技術有限公司提供,批號20070605;β-內啡呔(β-EP )放射免疫盒,北京華英生物技術研究所提供,批號20070730。80-1 型電動離心機,金壇市恒豐儀器廠產品;GC-911 型γ-放射免疫計數器,中國科技大學實業總公司產品,蘭空醫院放免科提供。
選取60 只15~18 月齡SPF 雌性SD 大鼠,連續5 d 進行陰道脫落細胞涂片及光學顯微鏡下觀察,無規律性動情周期變化,確定為圍絕經期大鼠[1]。
據此選取15~18 月齡SD 雌性大鼠40 只,采用隨機數字法分為模型對照組(圍絕經期組)、尼爾雌醇組和益腎更寧合劑高劑量組、中劑量組、低劑量組,每組8 只。另選青年大鼠(鼠齡4~6 月)8 只作為青年對照組。參照文獻方法[2],按人和大鼠間體表面積折算的等效劑量比率1∶0.018 計算給藥劑量。模型對照組、青年對照組以蒸餾水0.01 mL/g體質量灌胃,1 d 1 次。尼爾雌醇組,用蒸餾水配成混懸液,劑量為0.24 μg /g,相當于成人用量的8 倍,以0.01 mL/g 體質量灌胃,每2 周灌胃1 次。益腎更寧合劑高、中、低劑量組依次按生藥量26.56,13.28,6.64 g/kg,以0.01 mL/g 體質量灌胃,1 d 1 次。各組根據體質量變化,調整給藥劑量,連續給藥4 周。
大鼠于末次給藥并且禁食、禁水24 h 后,于腹主動脈采集血,離心分離血清,-20 ℃保存備用。大鼠血清E2、β-EP 檢測按試劑盒說明書操作。
采用SPSS 13.0 統計分析軟件處理。數據以均數()±標準差(s)表示,采用單因素方差分析。以P<0.05 為差別有統計學意義。
益腎更年合劑可提高圍絕經期大鼠E2、β-EP含量,且存在著一定的量效關系。與模型組對照對比,各劑量用藥組E2、β-EP 含量均有所升高,其中益腎更年合劑高、中、低劑量組E2和高劑量組β-EP較之,差別均有統計學意義(P<0.05)。結果見表1。
表1 各組大鼠血清E2、β-EP 含量對比 ng·L-1,±s

表1 各組大鼠血清E2、β-EP 含量對比 ng·L-1,±s
注:與模型對照組對比,* P <0.05,**P <0.01;與青年對照組對比,# P <0.05 ,## P <0.01。
組 別 動物數 E2 β-EP模型對照組 7 7.547 1 ±0.806 7## 115.374 3 ±30.196 8##青年對照組 8 14.340 0 ±0.627 5 194.008 0 ±45.076 9**尼爾雌醇組 8 11.137 1 ±0.932 6**## 171.906 5 ±32.639 7*復方益腎更寧合劑高劑量組 8 10.213 1 ±0.782 1**# 166.407 1 ±30.309 1*復方益腎更寧合劑中劑量組 8 9.283 8 ±0.539 5**## 145.838 4 ±26.107 0#復方益腎更寧合劑低劑量組 8 8.953 3 ±0.821 7* ## 140.841 3 ±21.804 7#
女性進入圍絕經期,由于卵巢功能減退,雌激素分泌減少,對下丘腦-垂體-卵巢軸的負反饋作用減弱,使FSH、LH 分泌增加。雌激素的缺乏是發病的始動環節。本實驗中,復方益腎更寧合劑低、中、高劑量組血清E2含量較模型對照組升高,差別有統計學意義(P<0.05),且低劑量、中劑量、高劑量組血清E2含量按順序呈遞增趨勢,可見益腎更寧合劑能升高圍絕經期大鼠血清E2水平。近幾年,在中醫微觀辨證方面,有學者發現:雌激素水平低下者,大多與腎陰、癸水不足有關[3]。這也與本病的病因病機相符合。復方益腎更寧合劑中,主要有熟地黃、山茱萸、白芍、麥冬等藥物,著重滋補腎陰,以升高雌激素水平,調整紊亂的生殖內分泌系統。此外,現代藥理研究發現:淫羊藿能增強下丘腦-垂體-性腺軸及腎上腺皮質軸、胸腺軸等內分泌系統的分泌功能;紫草具有抗促性腺激素和絨毛膜促性激素的作用,具有雌激素樣活性[4]。據此推測,益腎更寧合劑提高E2水平的機制,亦與其含有“植物樣雌激素”成分,具有類似雌激素作用有關,但此尚需進一步證實。
β-EP 是神經肽類物質,參與調節呼吸、心血管運動、行為反應等,并有鎮痛,抑制腎上腺素、多巴胺、P 物質等釋放作用,且與內分泌系統相互影響,對促性腺激素釋放激素(GnRH)、FSH、LH 有抑制作用。中樞性β-EP 參與神經內分泌的調節,下丘腦弓狀核β-內啡肽神經元內有雌激素受體存在,成為雌激素在下丘腦的靶細胞之一。呂肖鋒等[5]研究發現:絕經婦女血中β-EP 及其抗體水平明顯低于正常育齡婦女,β-內啡肽的下降與雌激素的下降同步。β-EP 抗體的下降可能表示免疫系統對神經內分泌的調節紊亂,從而出現圍絕經期婦女神經精神癥狀。此外,有學者[6]提出,精神抑郁與神經介質的變化有關,而內啡肽可與多種神經介質(包括兒茶酚胺)發生交叉反應,干擾生物胺(5-羥色胺、γ-氨基酸、組織胺等)的代謝,從而影響情緒和行為,與圍絕經期抑郁的發生有關。本實驗中測定了圍絕經期大鼠下丘腦的β-EP 含量,發現益腎更年合劑高劑量組β-EP 與模型對照組對比,差別有統計學意義(P<0.05),說明益腎更寧合劑高劑量組可使下丘腦的β-EP 水平回升。提示益腎更寧合劑是治療β-EP 水平降低致圍絕經期情緒和行為異常等癥的有效藥物
本研究結果為益腎更寧合劑治療圍絕經期綜合征提供了實驗依據,即益腎更寧合劑能夠改善圍絕經大鼠體液內分泌功能,這可能是其治療圍絕經期綜合征作用機制之一。
[1]程化奇,熊舜華,殷新尤,等.大鼠更年期實驗模型研究[J].實驗動物與比較醫學,1993,13(4):1921.
[2]黃繼汗,黃曉暉,陳志揚,等.藥理實驗動物間和動物與人體間的等效劑量換算[J].中國臨床藥理學與治療,2004,9(9):1069-1071.
[3]夏桂成.中醫婦科理論與實踐[M].北京:人民衛生出版社,2003:166.
[4]高學敏.中藥學[M].北京:中國中醫藥出版社,2002:516-518.
[5]呂肖鋒,葉雪清.絕經后婦女血β-內啡肽及其抗體改變[J].中國實驗臨床免疫學雜志,1993,5(4):37-38.
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