惡性淋巴瘤組織和血清中nm23的表達及其意義

尹相叢，閆麗萍，楊頡，侯方，邵長峰

（青島大學醫學院，山東 青島 266003 1 附屬醫院血液病研究室； 2 附屬醫院婦科； 3 血液病學教研室）

淋巴瘤是由淋巴器官或組織中的淋巴細胞發生惡性克隆性增生所形成的腫瘤，是兒童和年輕人中最常見的惡性腫瘤之一，分為霍奇金淋巴瘤（HL）和非霍奇金淋巴瘤（NHL）兩大類。多種實驗證實，n m23基因是一種腫瘤轉移抑制基因，該基因能抑制腫瘤細胞的遠處轉移，與多種腫瘤的預后呈負相關［1］。但對造血系統腫瘤研究顯示，n m23蛋白能抑制造血細胞的分化成熟，可能與造血系統腫瘤的發生和預后有關［2］。本文分別采用免疫組織化學方法和雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗（ELISA法）檢測淋巴瘤組織和血清中n m23表達，旨在探討其對惡性淋巴瘤預后判斷價值。現將結果報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

2011年2月—2012年8月，收集我院住院的淋巴瘤病人60例，病人年齡7～75歲，中位年齡40歲。病理分類和惡性程度分級參照1994年REAL標準［3］，其中 HL者9例，NHL者51例，NHL中B細胞型35例，T細胞型16例；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級淋巴瘤分別為26、17、10、7例。選取我院體檢健康者20例作為血清中n m23檢測的對照組，男12例，女8例，年齡為22～51歲；另選20例正常淋巴結組織作為n m23免疫組化檢測的對照，其中男11例，女9例；年齡為17～53歲。

1.2 試劑

人n m23的ELISA試劑盒購自上海迪奧試劑公司。抗n m23單抗、SP試劑盒、DAB顯色劑均購自福州邁新公司。

1.3 實驗方法和結果判斷

分別采集病人治療前和對照組不抗凝靜脈血2 mL，置于室溫下自然凝固，離心后將血清凍存于－80℃低溫冰箱備用。通過全自動生化分析儀，應用ELISA法測定血清中n m23濃度。在標準坐標紙上手工繪制標準曲線，以標準品濃度作為橫坐標，吸光度（A）值作為縱坐標，以平滑線連接各標準品的坐標點，通過測定的D值在標準曲線上查出對應的n m23濃度。按照S－P免疫組化試劑盒說明分別檢測淋巴瘤病人和對照組淋巴結組織中n m23的表達。每次實驗用已知陽性切片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。淋巴瘤組織中n m23陽性表達定位于細胞漿，高表達者其陽性顆粒不僅表達在胞漿中，在胞膜和胞核也能見到表達。計數500～1000個細胞，計算n m23陽性細胞百分率。陽性率0～5%、6%～25%、26%～50%、＞50%分別定為（－）、（＋）、（?）、（?）。參照Fromowitz方法，將（－）、（＋）定為低水平表達，（?）、（?）定為高水平表達。

2 結 果

2.1 nm23表達的比較

淋巴瘤組織中n m23低水平、高水平表達分別為39、21例，對照組組織中分別為20、0例，兩組比較差異有顯著性（χ2＝9.49，P＜0.01）。淋巴瘤病人血清中n m23的水平為（363.42±145.26）μg／L，對照組為（122.88±92.13）μg／L，兩組比較差異有顯著性（t＝7.21，P＜0.01）。

2.2 淋巴瘤病人n m23的表達與臨床病理特征的關系

n m23的表達水平與病人性別無關（P＞0.05），而與病人年齡、淋巴瘤惡性程度、臨床分期、骨髓浸潤、B癥狀及LDH水平有關（χ2＝8.86～15.25，t＝3.03～9.48，P＜0.01）。見表1。

表1 淋巴瘤組織中n m23的表達與臨床病理特征的關系

3 討 論

腫瘤轉移抑制基因n m23基因是1988年由美國國立癌癥研究所的STEEG等［4］應用消減雜交法，從7株具有不同轉移潛能的鼠黑色素瘤細胞系c DNA文庫中克隆出來的。到目前為止，在人類已發現6個n m23異構體，其中n m23－H1在腫瘤轉移中起更大的作用，該基因編碼蛋白主要位于細胞漿和細胞核，具有多種生物學功能，參與細胞信號轉導、增殖與分化和腫瘤轉移過程，與癌細胞的轉移潛能密切相關。在黑色素瘤、乳癌和胃癌等多種實體瘤中，n m23蛋白的表達可抑制腫瘤細胞的遠處轉移和植入，與病人的預后呈負相關［5］。然而在造血系統的研究中顯示，n m23蛋白在正常淋巴細胞發育早期表達明顯增多，能抑制造血細胞分化［6］，由此推測n m23蛋白的過度表達與造血細胞腫瘤的發生、發展和預后有關。NIISTU等［7］應用免疫組化方法檢測淋巴瘤病人n m23蛋白的表達，結果顯示隨著淋巴瘤惡性程度的增高，該蛋白水平也顯著增高，而且還與病人的年齡、淋巴瘤臨床分期、淋巴結外病變部位數及是否伴有發熱、消瘦、盜汗以及血清LDH水平等有明顯相關性。n m23高表達組緩解率、無進展生存期和總生存期均低于低表達組。另外，LEE等［8］對150例 NHL病人研究亦顯示，n m23的表達水平隨腫瘤惡性程度的升高相應升高。國內藍建平等［9］對107例淋巴瘤病人研究證實，n m23蛋白在惡性淋巴瘤組織中表達明顯高于對照組，而且表達強度隨著淋巴瘤惡性程度的增高而增高。本研究采用免疫組化方法和ELISA法分別檢測60例淋巴瘤組織和血清中n m23蛋白的表達水平，研究結果與上述文獻報道相似。

總而言之，聯合檢測淋巴瘤組織和病人血清中n m23的表達，能更精確地判定淋巴瘤的惡性程度，有利于臨床評價預后。

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