熱休克蛋白27、轉化生長因子-β1在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及臨床意義

陳霞，袁國躍，王東，王瑩，李梅

(江蘇大學附屬醫院內分泌科，江蘇鎮江212001)

甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是最常見的甲狀腺惡性腫瘤，約占所有甲狀腺惡性腫瘤的60% ～70%，病理組織學和某些具有顯著的假乳頭結構的良性乳頭狀增生性疾病不易鑒別，影響臨床診斷和治療。本研究通過對甲狀腺乳頭狀癌細胞中熱休克蛋白27(heat shock protein 27，HSP27)、轉化生長因子β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)蛋白質表達變化進行檢測，以探討這兩種細胞因子在甲狀腺乳頭狀癌發生發展中的作用，現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本來源 取江蘇大學附屬醫院病理科2009年1月至2011年12月外科手術切除的甲狀腺標本及存檔蠟塊共130例，經組織病理明確診斷，其中甲狀腺乳頭狀癌50例，男10例，女40例，年齡17～73歲，中位年齡44歲;甲狀腺腺瘤50例，男10例，女40例，年齡14～73歲，中位年齡44歲;正常甲狀腺組織30例，男6例，女24例，年齡11～73歲，中位年齡47歲。

1.2 免疫組化染色

1.2.1 HSP27、TGF-β1檢測 采集標本，甲醛固定，常規脫水透明、浸蠟、包埋，部分已為蠟塊包埋，連續切片，厚度約為4 μm，APES防脫玻片(北京金麥克公司)黏附，采用免疫組織化學法，分別對HSP27、TGF-β1進行染色(兔抗人 HSP27 多克隆抗體、兔抗人TGF-β1多克隆抗體、免疫組化試劑盒均購自福州邁新生物技術開發有限公司;DAB顯色試劑盒購于北京康為世紀生物有限公司)，采用已知陽性對照片(購自福州邁新生物技術開發有限公司)進行陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照。染色步驟嚴格按照試劑盒產品說明書進行。

1.2.2 結果判斷 取染色效果較好的組織切片，避開腫瘤壞死及邊緣區域，在高倍視野下(×400)隨機選取5個陽性細胞數較多的視野進行計數，采用半定量積分法對每張切片的陽性細胞率及陽性細胞著色強度分別進行分級記分。陰性為0分，陽性細胞數≤10%為1分，11% ～50%為2分，51% ～75%為3分，＞75%為4分。同時根據染色強度評分，不著色為0分;淡黃色為1分;棕黃色為2分;棕褐色為3分。陽性細胞百分比與染色強度之積＞3分即為免疫反應陽性。所得結果可分為4個等級:(－)0～2分，(+)3～4分，(++)6～8分，(+++)9～12分。

1.3 統計學處理

應用SPSS 16.0統計軟件包進行統計分析。兩樣本陽性率的比較采用χ2檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HSP27、TGF-β1在3 種甲狀腺組織中的免疫組化結果

HSP27在正常甲狀腺組織中呈陰性表達或低表達，而在富于癌細胞的增生區高表達，免疫組化染色呈現棕黃或者棕褐色，對應腫瘤周圍組織中僅見散在梭形細胞和血管內皮細胞的胞質著色。TGF-β1在癌細胞的胞質呈陽性表達，富于癌細胞的增生區域尤為突出，免疫組化染色呈棕黃或者棕褐色，正常甲狀腺組織中呈陰性表達或低表達。見圖1。

圖1 HSP27、TGF-β1在3種甲狀腺組織中的免疫組化結果(×400)Fig 1 Immunohistochemistry results of HSP27、TGF-β1in different thyroid tissues

2.2 HSP27、TGF-β1在3 種甲狀腺組織中的陽性表達率比較

甲狀腺乳頭狀癌組織與甲狀腺腺瘤組織相比，HSP27、TGF-β1的陽性表達率差異有統計學意義(χ2=5.002，P ＜ 0.05;χ2=3.933 9，P ＜0.05);甲狀腺乳頭狀癌組織與正常甲狀腺組織相比，HSP27、TGF-β1陽性表達率差異亦有統計學意義(χ2=4.301 1，P ＜ 0.05;χ2=4.983 5，P ＜0.05);甲狀腺腺瘤組織和正常甲狀腺組織間的HSP27、TGF-β1陽性表達率比較，差異無統計學意義(χ2=0.013 6，P ＞0.05;χ2=0.222 6，P ＞0.05)。見表 1。

表1 HSP27、TGF-β1蛋白在3種甲狀腺組織中的表達Tab 1 Expression of HSP27 and TGF-β1in different thyroid tissues

3 討論

正常組織細胞內HSP27的表達水平很低［1］。應激狀態可致胞內HSP27磷酸化并致其寡聚體解聚，HSP27表達上調［2］。HSP27在腫瘤發病中的作用與其對細胞的影響有關，它在細胞凋亡信號通路中可與相關活性蛋白相互作用并抑制凋亡信號的轉導，抑制細胞凋亡［3］。對高度惡性甲狀腺疾病的研究發現，惡性甲狀腺疾病細胞系C-643中HSP27-1高表達，且這種高表達與HSP對HSP27-1表達基因啟動子的活化直接有關［4］。本資料結果顯示HSP27在正常甲狀腺組織及甲狀腺腺瘤組織中陽性表達率較低，而在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率明顯升高，表明HSP27的陽性表達率高同樣與甲狀腺乳頭狀癌發病密切相關。

臨床研究發現，人類激肽釋放酶2、早期前列腺癌抗原、尿激酶型纖溶酶原激活物/尿激酶型纖溶酶原激活物受體、TGF-β1、IL-6/IL-6受體的表達與腫瘤的發生發展密切相關，這些因子均可用于早期腫瘤的預測和腫瘤患者的病情判斷［5］。TGF-β1與其受體(如TGFβ1R1)結合后可抑制多種細胞增殖、分化并促進細胞間質形成［6］。且TGF-β1具有調節細胞增殖、分化、遷移、凋亡、細胞外基質形成、腫瘤血管形成、細胞黏附和遷移以及抑制機體抗腫瘤免疫等作用［7］。在腫瘤細胞中，TGF-β1可以上調基質金屬蛋白酶-9，促進細胞外基質降解，利于腫瘤細胞浸潤和轉移［8］。這均說明TGF-β1與腫瘤的發生、發展有著密切關系。本研究結果中甲狀腺乳頭狀癌組織中TGF-β1的陽性表達率明顯高于甲狀腺腺瘤和正常甲狀腺組織。另有研究發現甲狀腺低分化癌DH-14-3細胞可表達IL-8、TGF-β1、血管內皮細胞生長因子、基質金屬蛋白酶-1和甲狀旁腺相關蛋白［9］，說明TGF-β1陽性表達率與甲狀腺乳頭狀癌發生、發展有關。

綜上所述，HSP27和 TGF-β1在甲狀腺乳頭狀癌中陽性表達率顯著升高，可能是甲狀腺乳頭狀癌發生、進展及預后判斷的重要生物學標志物，可作為甲狀腺良惡性病變鑒別診斷及評估甲狀腺乳頭狀癌預后的參考指標。

［1］ Lelj-Garolla B，Mauk AG.Self-association of a small heat shock protein［J］.J Mol Biol，2005，345(3):631 －642.

［2］ Hayes D，Napoli V，Mazurkie A，et al.Phosphorylation dependence of hsp27 multimeric size and molecular chaperone function［J］.J Biol Chem，2009，284(28):18801－18807.

［3］ Tan CY，Ban H，Kim YH，et al.The heat shock protein 27(Hsp27)operates predominantly by blocking the mitochondrial-independent/extrinsic pathway of cellular apoptosis［J］.Mol Cells，2009，27(5):533 －538.

［4］ Mineva I，Gartner W，Hauser P，et al.Differential expression of alphaB-crystallin and Hsp27-1 in anaplastic thyroid carcinomas because of tumor-specific alphaB-crystallin gene(CRYAB)silencing［J］.Cell Stress Chaperones，2005，10(3):171 －184.

［5］ Vesprini D，Liu S，Nam R.Predicting high risk disease using serum and DNA biomarkers［J］.Curr Opin Urol，2013，23(3):252 －260.

［6］ Tany Y，Katuri V，Srinivasan R，et al.Transforming growth factor-beta suppresses nonmetastatic colon cancer throngh smad4 and adaptor protein ELF at an early stage of tumorigenesis［J］.Cancer Res，2005，65(10):4228 －4237.

［7］ Dabek J，Kulach A，Monastyrska-Cup B，et al.Transforming growth factor beta and cardiovascular diseases:the other facet of the'protective cytokine'［J］.Pharmacol Rep，2006，58(6):799 －805.

［8］ Sinpitaksakul SN，Pimkhaokham A，Sanchavanakit N，et al.TGF-beta1 induced MMP-9 expression in HNSCC cell lines via Smad/MLCK pathway［J］.Biochem Biophys Res Commun，2008，371(4):713 －718.

［9］ Teshima J，Doi H，Fujimori K，et al.A human thyroid cancer cell line，DH-14-3，newly established from poorly differentiated thyroid carcinoma［J］.Tohoku J Exp Med，2013，230(2):75-82.