快速冷凍切片技術在門診活檢組織診斷中的應用價值

羅慶豐 高 玟 詹名花 涂 侃 蔡 勇 黃傳生

本研究對我院923例患者門診活檢組織進行了快速冷凍切片診斷，現分析報告如下。

1 資料方法

1.1 一般資料

本組923例均為本院2006年3月至2008年10月的門診患者，男性496例，女性427例;年齡21～78歲，平均55.8歲。其中鼻咽組織382例，胃黏膜組織275例，食管黏膜組織114例，腸黏膜組織112例，宮頸組織40例。儀器與設備:德國生產microfreeze 550型低溫恒冷冷凍切片機。

1.2 方法

門診活檢的新鮮黏膜組織15 min內送病理科，用OTC包埋劑包埋，冷凍固化后放入低溫恒冷冷凍切片機切片，連續切片4張，厚度為5 μm，AAF液固定，HE染色，樹膠封片，在普通光學顯微鏡下觀察并做出診斷。冷凍切片剩余組織常規石蠟切片，最后將冷凍切片與標本常規石蠟切片診斷結果對照［1］。

2 結果

923例門診活檢組織冷凍切片與常規切片診斷符合率分別為95.03%(363/382)、92.10%(105/114)、90.91%(250/275)、91.07%(102/112)、97.50%(39/40)。鼻咽組織漏診腫瘤例數為13例，其漏診率為3.40%;胃黏膜組織漏診腫瘤例數為13例，其漏診率為4.73%;食管黏膜組織漏診腫瘤例數為9例，其漏診率為7.89%;腸黏膜組織漏診腫瘤例數為10例，其漏診率為8.93%;宮頸組織漏診腫瘤例數為1例，其漏診率為2.5%，見表1。

表1 923例門診活檢組織冷凍切片的冷凍診斷結果

3 討論

門診活檢組織快速冷凍切片診斷時間短，能迅速提供準確的信息，既滿足患者及家屬迫切了解疾病情況的心理要求，又能快速為臨床決定手術方式提供依據。常規門診活檢標本一般都要在72 h才能做出診斷報告，而快速冷凍切片檢查一般在30 min內能做出診斷，這顯著縮短患者等待診斷結果的時間，同時診斷準確率達92.14%，能夠滿足臨床初步診斷的要求。

質量良好的冷凍切片和有經驗的病理診斷醫師是門診活檢組織冷凍切片診斷較高準確率的關鍵［2］。活檢小組織塊用OTC包埋劑支撐其底部(起墊高組織的作用)，包埋時注意將黏膜垂直包埋，以更好顯示病變，待其凝固后修平，然后將微細組織的待切面朝上放入墊高的OTC包埋劑中，再涂上適量OTC包埋劑，放入冷凍切片機內繼續冷凍，使用吸熱錘壓平組織，使組織均勻快速下降溫度。由于各種組織的結構不同，切片最適宜的溫度也不同，不能一概而論。對于活檢小組織一般溫度在-16℃至-18℃之間，冷凍時間相對短一些，肉眼觀察周圍全發白時及時修整，一般為5 min左右，避免冷凍時間過長，組織變脆，影響切片的完整性，切片時速度可相對慢且要勻速切片，過快會出現跳刀現象，制片出現裂痕。制作冷凍切片的另一個關鍵就是防止切片皺折，首先調節好防卷板，要求準確地調整至適當的位置，調節固定好后，再不要輕易扭動。另外，要細心地使用毛筆將切片攤平。同時要注意清潔防卷板，防止污染和切片皺折。切片切好后要及時固定，適合冷凍切片的固定液也有多種(乙醇、甲醇、丙酮及混合固定液等)。我們使用AAF混合固定液(冰乙酸∶甲醛∶95%乙醇為8∶12∶80)，甲醛對組織起固定作用，乙醇收縮組織，冰乙酸起核蛋白沉淀作用，同時使組織膨脹，抵抗乙醇的收縮作用，保持組織的結構穩定。這樣染色后組織結構清晰，細胞收縮小，染色鮮艷，核漿對比鮮明。

病理診斷醫生要充分了解患者基本情況，掌握臨床病史資料，聯合內鏡下的大體情況，例如患者有無潰瘍及腫塊［3］，同時要充分了解冷凍切片下的組織學形態特征。顯微鏡下冷凍切片質量與石蠟切片相比，有著細胞結構模糊變形、核變大，容易變形、排列致密，有水腫，胞漿豐富等特征。如果診斷困難，應立即科內會診，并保持客觀、冷靜，從嚴掌握診斷標準，把握病理性核分裂像、腫瘤組織浸潤等惡性特征，切忌主觀及片面，如有疑問應重新活檢或等待石蠟切片，不可過度診斷［4］。本研究各種活檢組織中出現一定程度的漏診，其漏診率為鼻咽組織3.4%，胃黏膜組織4.7%，食管黏膜組織7.9%，腸黏膜組織8.1%，子宮頸組織為0。因為診斷指標控制嚴格，本研究無腫瘤誤診比例出現，而且漏診率比例較低，同時有常規切片診斷的補救措施，能夠快捷地解決診斷中的問題。該研究結果與Winther C［5］及 Stewart等［6］結果相一致。

門診黏膜活檢組織快速冷凍切片診斷符合率高，可縮短診斷時間，減少患者就診等待時間，在我院的臨床病理工作中取得了良好效果，值得推廣應用。

［1］羅慶豐，謝 梅，高 玟，等.冰凍切片及免疫組織化學技術在胸腹水細胞診斷中的應用〔J〕.實用癌癥雜志，2007，22(4):363.

［2］侯巧燕，何 雯，張美艷.不同組織的快速冷凍切片技術探討〔J〕.廣西醫學，2008，30(10):1159.

［3］金鐵臣，邱建學，曹 軍.內鏡活檢標本冷凍切片在消化道癌快速診斷中的應用〔J〕.安徽醫學，2004，25(4):330.

［4］葉 瓊，胡寶春，謝小云.冷凍切片在門診活組織檢查中的應用及體會〔J〕.實用醫學雜志，2006，22(21):2536.

［5］Winther C，Graem N.accuracy of frozen section diagnosis:a retrospective analysisi of 4785 cases〔J〕.APMIS，2001，119(4):259.

［6］Stewart CJ，Brennan BA，Koay E，et al.value of cytology in the intraoperative asseeement of ovarian tumors:a review of 402 cases and comparison with frozen section diagnosis〔J〕.Cancer Cytopathol，2010，118(3):127.