721型分光光度計使用方法及注意事項

武開業

（榆林市環境監測總站，陜西 榆林 719000）

1 721分光光度計的使用方法

1）在接通電源之前，電表的指針必須位于“0”刻度線，否則應旋轉電表上的校正螺絲調節到位。

2）打開比色皿室的箱蓋和電源開關，使光電管在無光照射的情況下預熱15min以上。

3）旋轉波長調節器，選擇測定所需的單色光波長。選擇適當的靈敏度，一般先將靈敏度旋鈕調至中間位置，用零點調節器調節電表指針至T值為10%處。若不能調到，應適當增加靈敏度。

4）放入空白溶液和待測溶液，使空白溶液置于光路中，蓋上比色皿室箱蓋，使光電管受光，調節光量調節旋鈕使電表在T值為100%處。

5）打開比色皿室箱蓋（關閉光門），調節零點調節器使指針在T值為0%處，然后蓋上箱蓋（打開光門），調節光量調節旋鈕使指針在T值為100%處。如此反復調節，直到關閉光門時和打開光門時指針分別在T值為0%和100%處為止。

6）將待測溶液置于光路中，蓋上箱蓋，由此時指針的位置讀得待測溶液的T值或A值。

7）測量完畢后，關閉開關，取下電源插頭，取出比色皿洗凈擦干、放好。蓋好比色皿暗箱，蓋好儀器。

2 721分光光度計的使用注意事項

1）使用比色皿，只能拿毛玻璃的兩面，并且必須用擦鏡紙擦干透光面，以保護透光面不受損壞或產生斑痕。在用比色皿裝液前必須用所裝溶液沖洗3次，以免改變溶液的濃度。比色皿在放入比色架時，應盡量使它們的前后位置一致，以減少測量誤差。

2）需要大幅度改變波長時，在調整T值為0%和100%之后，應稍等片刻（因鎢絲燈在急劇改變亮度后，需要一段熱平衡時間），待指針穩定后再調整T值為0%和100%。

3）當被測溶液濃度太大時，可在空白溶液處加一塊中性濾光片（所謂中性是指它們在很寬的波長范圍內的透光率基本相同），其A值有0.5、1和1.5三種。所謂A值為1是標稱值，實際在1左右，須經使用的儀器在實際使用的波長下測定其實際數值，例如∶測得吸光片的實際數值為0.95，在空白溶液處加此吸光片后，被測溶液在電表上的讀數為0.74，則該溶液的實際值為∶0.74+0.95=1.69

4）根據溶液的含量大小選擇不同光程長度的比色皿，使電表讀數A值在0.1～1之間，這樣可以得到較高的準確度。

5）為確保儀器工作穩定，在電源電壓波動較大的地方，應加一個穩定電源。同時儀器應保持接地良好。

6）在儀器的底部有兩只干燥劑筒，應經常檢查。發現干燥劑失效時，應立即更換或烘干后再用。比色皿暗箱內的硅膠也應定期取出烘干后再放回原處。

7）為了避免儀器積灰和沾污，在停止工作時，應用罩子罩住儀器。儀器在工作幾個月或經搬動后，要檢查波長的準確性，以確保儀器的正常使用和測定結果的可靠性。

3 721分光光度計的校正方法

波長讀數校正的方法很多，例如：（1）可用波長精度很高的干涉濾光片；（2）已知吸收峰（λ最大）波長的有色物質的溶液等做標準來校正。前一種方法需要特殊的設備，其精確度較高；后一種方法簡易可行，精確度較差，但對721型分光光度計來說，這種方法已能夠滿足要求。

配制一已知λ最大的物質的適當濃度的溶液，用待校正的儀器在該物質的λ最大±20nm范圍內，用不同的波長測定其A值。可從小于該有色溶液的λ最大約20nm處開始，每隔2nm測定一次，至波長大于該溶液λ最大的約20nm為止。例如用高錳酸鉀溶液來校正，其λ最大為525nm。故在505至545nm之間，每隔2nm測定一次吸光度。將測定結果作吸收曲線，所得曲線有一吸收峰（若未所得曲線未呈現吸收峰，則表示此儀器波長讀數偏差大于20nm，應擴大測定的波長范圍），設此吸收峰的波長為λ′最大，將它與已知的λ最大比較，其差即為波長校正值，以λ校表示：

若波長校正值λ校很大，則需要重新調整勵光燈泡，或檢修單色器的光學系統。若波長校正值小于10nm，則可在使用該儀器時，用校正值來校正波長。當λ校為正值時，表示該儀器的波長讀數較真實的波長偏高。因此在使用該儀器時，若測定某一溶液時所需選定的波長為λ測，那么應調至的波長讀數（λ讀）則為∶

例如用高錳酸鉀溶液（其λ最大為525nm）校正一儀器，測得其吸收峰λ′最大為530nm，則：

用該儀器測定鄰菲羅啉鐵時，應選用的波長為510nm，其波長讀數標尺應旋至λ讀：λ 讀＝λ 測-λ 校＝510nm-（-5nm）＝515nm

即波長讀數應調至515nm，而此時真實的波長為510nm，即鄰菲羅啉鐵的λ最大。

4 小結

721分光光度計使用方便，能耗低，穩定性好，便于調校，準確度比較高，使用范圍比較寬，所以仍將在分析化驗領域內發揮重要的作用。