復方雙氯芬酸鈉溫敏型水凝膠的制備及質量控制

劉銘佩，朱 恒，王 利（蘭州大學第二醫院藥劑科，蘭州 730030）

腎絞痛是泌尿外科常見急癥之一，一般經肌肉注射強鎮痛劑和抗膽堿類藥物后癥狀能很快緩解。但少部分頑固性腎絞痛病例會很快再次發作，經多次重復對癥處理后仍不能獲穩定緩解，一些甚至持續數天不等，給患者帶來極大的痛苦。而腎輸尿管結石引起腎絞痛除了與結石局部直接刺激導致平滑肌劇烈收縮痙攣有關外，還與腎絞痛發生時腎內前列腺素的合成和釋放增加有關。前列腺素可使腎血管阻力下降，腎血流量增加，并通過拮抗抗利尿激素的作用，使尿流量呈相應增加趨勢，在以上2種因素的作用下，使腎盂輸尿管內壓急劇升高，而引起腎絞痛發作[1]。

鹽酸屈他維林是一種直接作用于平滑肌的較強的解痙劑；雙氯芬酸鈉為非甾體類化合物，屬一種強效抗炎鎮痛藥，其主要作用機制是通過抑制體內前列腺素的合成發揮抗炎止痛作用。目前市場上鹽酸屈他維林只有片劑和注射劑，而雙氯芬酸鈉有片劑、膠囊劑、凝膠劑、栓劑等，但兩者配伍制備的溫敏型水凝膠制劑未見文獻報道。我院嘗試制備2種藥物的復方制劑，希望能同時從2個環節有效防止膽、腎絞痛復發，減輕患者痛苦。

由于溫敏型水凝膠兼備液體與凝膠制劑的優點，室溫下為溶液，以液體形式直腸內給藥后，能迅速在直腸內發生相轉變形成半固體狀凝膠；并且黏膜給藥系統具有可避免腸胃環境對藥效的干擾和肝臟的“首關效應”，能長期維持穩定的給藥速率，降低藥物的毒副作用，使用方便，并可隨時停止給藥，因此被認為是很有發展前景的優良給藥方式[2]。故筆者研制了復方雙氯芬酸鈉溫敏型水凝膠，其以泊洛沙姆P407和P188為基質，雙氯芬酸鈉和鹽酸屈他維林為主藥。在本文中，筆者對該制劑的制備及質量控制方法進行介紹，其中，含量測定采用高效液相色譜（HPLC）法。結果表明，本制劑制備工藝簡單、質量可控。

1 材料

1100型HPLC儀，包括G1312A二元泵、G1315A/B紫外檢測器、G1316A色譜柱溫箱、G2170AA色譜工作站和7725進樣閥（美國Agilent公司）；ME215S電子分析天平（德國Sartorius公司）；pHS-25數字式pH計（上海雷磁儀器廠）。

雙氯芬酸鈉原料藥（山東省茺州制藥廠，批號：20080612，純度：99.56%）；雙氯芬酸鈉對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100334-0001，純度：99.88%）；鹽酸屈他維林原料藥（批號：20080304，純度：99.45%）、鹽酸屈他維林對照品（批號：990801-51890798，純度：99.9%）均系杭州賽諾菲制藥有限公司產品；復方雙氯芬酸鈉溫敏型水凝膠（自制，批號：20100205、20100206、20100207，規格：雙氯芬酸鈉0.5 g∶100 g、鹽酸屈他維林0.1 g∶100 g）；泊洛沙姆P407及P188（德國BASF公司）；乙腈為色譜純。

2 處方與制備

2.1 基質用量篩選

通過調節基質中泊洛沙姆P407和P188的不同比例及海藻酸鈉的含量，可使凝膠具有合適的膠凝溫度（30～36℃）及膠凝強度（10～50 s），結果見表1。

表1 基質用量篩選結果Tab 1 Results of matrix screen

由表1可知，以泊洛沙姆P407與P188比例為15∶20、海藻酸鈉0.6 g所制凝膠具有較合適的膠凝溫度和膠凝強度，經肛門給藥后可在體溫時膠凝，且給藥后不會從肛門滑落。

2.2 處方

雙氯芬酸鈉0.5 g，鹽酸屈他維林0.1 g，泊洛沙姆P407及P188的比例為15∶20（g∶g），海藻酸鈉0.6 g，95%乙醇25 g，純化水加至100 g。

2.3 制備

稱取雙氯芬酸鈉和鹽酸屈他維林溶解于95%乙醇中，加入純化水適量，緩慢加入海藻酸鈉，邊加邊攪拌，將混合物冷卻至4℃；然后緩慢加入泊洛沙姆，邊加邊攪拌，純化水加至100 g；將混合物放置于4℃過夜，得乳白色黏液，即為復方雙氯芬酸鈉溫敏型水凝膠。分裝于密閉避光的容器中，貯存于陰涼處。

3 復方雙氯芬酸鈉溫敏型水凝膠質量檢查[2-6]

3.1 膠凝溫度的測定

稱取放置4℃過夜的樣品50 g，置于100 ml燒杯中，將燒杯放在磁力攪拌器上緩慢加熱，以恒定的速度邊加熱邊攪拌，燒杯上方連接一溫度計，將水銀球浸入水凝膠栓劑基質中，待攪拌子不動為止，迅速從溫度計上讀取此時的溫度即為該水凝膠的膠凝溫度，以30～36℃為宜，結果見表2。

表2 樣品的膠凝溫度及膠凝強度測定結果（±s，n＝3）Tab 2 Results of gelatin temperature and gel strength test（±s，n＝3）

表2 樣品的膠凝溫度及膠凝強度測定結果（±s，n＝3）Tab 2 Results of gelatin temperature and gel strength test（±s，n＝3）

批號201002052010020620100207膠凝溫度，℃33.4±0.534.8±0.735.6±0.6膠凝強度，s 23.8±1.525.8±1.223.2±1.4

3.2 膠凝強度的測定

將放置4℃過夜的樣品置于36.5℃恒溫水浴中加熱30 min，待其膠凝后，取25 ml置于50 ml量筒中，將測定凝膠強度的儀器（儀器質量為8.9 g）中的圓盤水平放置在樣品表面，圓盤向下移動10 cm時所需要的時間可作為凝膠強度的指標，以10～50 s為宜，結果見表2。

3.3 裝量的測定

照最低裝量檢查法[3]檢查。采用容量法，取樣品5份，將內容物轉移至預經標化的干燥量入式量筒中，讀出每個容器內容物的裝量，并求出其平均裝量，結果均符合平均裝量且不少于標示裝量的95%。

3.4 無菌和微生物限度的檢查

照無菌檢查法和微生物限度檢查法[3]檢查，結果均符合規定。

3.5 pH值的測定

取樣品適量測定其pH值，結果為6.02～6.76，符合規定。

3.6 粒度的測定

取適量樣品，置于載玻片下，覆以蓋玻片（注意防止氣泡混入），輕壓使分布均勻，共涂3片，照粒度和粒度分布測定法[3]檢查，結果均未檢出大于180 μm的粒子，符合規定。

4 樣品含量測定[7-10]

4.1 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：ZORBAX-SB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：磷酸鹽緩沖液（pH 3.0）-乙腈（55∶45），流速：1.0 ml/min；柱溫：室溫；進樣量：20 μl；檢測波長：254 nm。取“4.2”項下對照品、空白和樣品溶液進樣，色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

由圖1可見，樣品中雙氯芬酸鈉與和鹽酸屈他維林的保留時間分別約為2.78、6.19 min，與對照品中2個主峰的保留時間接近，而空白溶液在2個主峰位置處無色譜峰出現，表明其他成分對主藥測定無影響。

4.2 溶液的制備

4.2.1 對照品溶液。精密稱取105℃干燥至恒重的雙氯芬酸鈉對照品75.2581 mg和鹽酸屈他維林對照品50.7319 mg，置于100 ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度搖勻，即得。

4.2.2 樣品溶液。稱取樣品0.5 g，置于50 ml量瓶中，用流動相溶解并定容，搖勻，過濾，即得。

4.2.3 空白溶液。稱取不含主藥的基質0.5 g，置于50 ml量瓶中，用流動相溶解并定容，搖勻，過濾，即得。

4.3 線性關系考察

精密吸取對照品溶液1.0、3.0、5.0、7.0、10.0 ml，置于25 ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，過濾后進樣，測定峰面積。以峰面積（y）為縱坐標，濃度（c）為橫坐標，作線性回歸，結果表明，雙氯芬酸鈉檢測質量濃度線性范圍為30.10～301.03 mg/L，回歸方程為：y＝32.7261c－8.0418（r＝0.9996）。

同法得鹽酸屈他維林檢測濃度線性范圍為10.15～91.32 mg/L，回歸方程為：y＝42.2182c－13.5674（r＝0.9999）。

4.4 精密度考察試驗

取同一濃度對照品溶液連續進樣5次，測定雙氯芬酸鈉與鹽酸屈他維林峰面積，結果RSD分別為0.85%、1.47%（n＝5）。

4.5 重復性試驗

取樣品（批號：20100205）6份，各約0.5 g，準確稱定，制備樣品溶液，進樣測定含量。結果，雙氯芬酸鈉平均含量為50.3366 mg/L（RSD＝0.82%），鹽酸屈他維林平均含量為10.8154 mg/L（RSD＝1.38%），表明本法重復性好。

4.6 穩定性試驗

取樣品（批號：20100205）0.5 g，制備樣品溶液，分別于0、2、4、6、8 h進樣分析，測定其峰面積。結果雙氯芬酸鈉和鹽酸屈他維林的RSD分別為0.55%、0.63%（n＝5），表明溶液在8 h內穩定。

4.7 回收率試驗

精密稱取已知雙氯芬酸鈉含量（50.6770 mg/L）和鹽酸屈他維林含量（10.3281 mg/L）的樣品（批號：20100205）6份，每份約0.5 g，準確稱定，分別準確加入雙氯芬酸鈉與鹽酸屈他維林的混合對照品溶液（高、中、低3種不同水平）研勻，制備樣品溶液，并測定每份溶液的含量，計算回收率。結果，2種主藥的平均回收率分別為99.77%（RSD＝1.19%）、100.88%（RSD＝1.23%），詳見表3。

表3 回收率試驗結果（n＝3）Tab 3 Results of recovery tests（n＝3）

4.8 樣品含量測定

精密稱取樣品3批各0.5 g，置于50 ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻過濾，進樣測定，結果見表4。

表4 3批樣品含量測定結果（%%，n＝3）Tab 4 Results of content determination of 3 batches of samples（%%，n＝3）

5 討論

鹽酸屈他維林和雙氯芬酸鈉制備成溫敏型水凝膠后不良反應小、使用方便、易于及時停撤藥品。同時由于鹽酸屈他維林不影響植物性神經系統，無抗膽堿酯酶類解痙藥的不良反應，因此本制劑可用于禁用抗膽堿能類解痙藥的患者，如前列腺增生癥和青光眼患者。

雙氯芬酸鈉和鹽酸屈他維林在流動相溶液中的最大吸收波長分別為281、254 nm，由于前者吸收系數遠大于后者，且鑒于后者在處方中含量較低，故選擇254 nm為檢測波長，以減少誤差。

筆者曾選擇了0.1%三乙胺緩沖液（用濃硫酸調pH 3.0）-甲醇（60∶40）、乙腈-磷酸溶液等為流動相，結果色譜峰有拖尾、分叉現象且分離度不好。最后確定以磷酸鹽緩沖液（pH 3.0）-乙腈（55∶45）為流動相，結果兩主峰分離度好，符合要求。

通過調整泊洛沙姆P407和P188的不同比列，可使水凝膠具有合適的膠凝溫度，且加入海藻酸鈉后能更好地調節膠凝溫度。

本制劑劑量的設計系參考市售雙氯芬酸鈉栓劑的劑量，每枚含雙氯芬酸鈉50 mg，同時兼顧黏膜吸收較口服吸收血藥濃度高的特點制定了劑量配比。制劑的成品包裝于長頸塑料瓶（開塞露瓶）中，每支20 ml，是成人的一次用量，幼兒則減半，使用方法同開塞露。

溫敏型凝膠是利用外界條件和用藥部位的溫度差異，使聚合物發生相轉變的系統，在室溫或者較低的溫度條件下為液態，當環境溫度升高至相轉變溫度時形成具有一定機械強度的凝膠。一般常用于制備溫敏型凝膠的材料的相轉變溫度接近體溫，以溶液狀態給藥，在用藥部位形成凝膠，達到緩釋藥物的目的。本制劑即是采用此原理以泊洛沙姆為載體制成的溫敏性水凝膠，可用于腎絞痛、膽絞痛及某些高熱要求迅速止痛退熱的疾病。

[1]潘文海，黃文勝，李剛，等.雙氯芬酸鈉和鹽酸屈他維林維持性用藥治療頑固性腎絞痛的療效[J].廣東醫學，2009，30（6）：984.

[2]李欣宇，朱照靜，程安媛.地塞米松磷酸鈉溫度敏感原位凝膠的特性研究[J].藥學學報，2008，43（2）：208.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫藥科技出版社，2010：附錄ⅠU、ⅨE、ⅩF、ⅪH、ⅪJ.

[4]鞠鳳閣，朱照靜，馬俐麗.透明質酸鈉對眼用溫度敏感原位凝膠體外釋放和粘附力的影響[J].中國新藥雜志，2009，18（13）：1237.

[5]陳莉，崔京浩，江成.硝酸益康唑溫度敏感型凝膠的制備及體外評價 [J].中國新藥雜志，2008，17（18）：1607.

[6]李桂玲，李眉.噴昔洛韋眼用溫度敏感原位凝膠的制備及評價[J].中國藥學：英文版，2007，42（16）：90.

[7]王維劍，凌霄，譚會潔，等.HPLC法測定中藥中摻入雙氯芬酸鈉含量的不確定度評定[J].藥物分析雜志，2009，29（1）：130.

[9]郭紅霞，宋飛，張華妮，等.HPLC法測定復方雙氯芬酸鈉注射液中雙氯芬酸鈉和對乙酰氨基酚的含量[J].西北藥學雜志，2008，23（4）：200.

[10]顧微，郭愛民，宋曉虹，等.高效液相層析法測定血漿中曲他維林[J].首都醫科大學學報，2007，23（3）：208.