毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定甲磺酸伊馬替尼原料藥中有機(jī)溶劑殘留量

于 生，單鳴秋，邵 霞，郭 戎，丁安偉（南京中醫(yī)藥大學(xué)，南京 210046）

甲磺酸伊馬替尼（Imatinib mesylate）是一種高效特異的酪氨酸激酶抑制劑，分子式為C29H31N7O·CH4O3S。臨床上用于治療慢性粒細(xì)胞白血病（CML）急變期、加速期或α-干擾素治療失敗后的慢性期患者，不能手術(shù)切除或發(fā)生轉(zhuǎn)移的惡性胃腸道間質(zhì)腫瘤（GIST）患者[1]。

甲磺酸伊馬替尼在合成過(guò)程中使用了丙酮、甲醇、異丙醇、甲苯與吡啶等有機(jī)溶劑。本研究按照2010年版《中國(guó)藥典》二部附錄ⅧP[2]的要求及人用藥品注冊(cè)技術(shù)要求國(guó)際協(xié)調(diào)會(huì)（ICH）的有機(jī)溶劑殘留量指導(dǎo)原則[3]，采用毛細(xì)管氣相色譜法對(duì)樣品中的殘留溶劑進(jìn)行了檢查并進(jìn)行了方法學(xué)研究。結(jié)果表明，建立的方法簡(jiǎn)便、靈敏，結(jié)果準(zhǔn)確、可靠[4-5]。

1 材料

GC-4890D型氣相色譜儀、氫離子火焰檢測(cè)器（FID）、Cerity色譜工作站（美國(guó)Agilent公司）。

甲磺酸伊馬替尼原料藥（自制，批號(hào)：201001、201002、201003，純度：均大于99.0%）；丙酮、異丙醇、三氯甲烷、甲苯、吡啶與二甲基亞砜（DMSO）均為分析純，甲醇為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：HP-INNOWAX毛細(xì)管柱（30 m×0.53 mm，2.65 μm）；進(jìn)樣口溫度：150℃；FID溫度：180℃；色譜柱升溫程序：40℃，保持7 min，30℃/min升溫至60℃，保持12 min，再30℃/min升溫至180℃，保持5 min；載氣：氮?dú)猓瑝毫Γ? Psi；燃?xì)猓簹錃猓瑝毫Γ?00 kPa；助燃?xì)猓嚎諝猓瑝毫Γ?90 kPa；進(jìn)樣量：1 μl。

在上述色譜條件下，取“2.2～2.3”項(xiàng)下對(duì)照品溶液和供試品溶液進(jìn)樣分析，結(jié)果各溶劑之間分離良好，色譜見(jiàn)圖1。

圖1 氣相色譜圖A.對(duì)照品；B.供試品；1.丙酮；2.甲醇；3.異丙醇；4.三氯甲烷；5.甲苯；6.吡啶Fig 1 GC chromatogramA.substance control；B.test samples；1.acetone；2.methanol；3.isopropanol；4.trichloromethane；5.toluene；6.pyridine

2.2 溶液的制備

內(nèi)標(biāo)溶液：取三氯甲烷適量，加DMSO溶解并制成每1 ml約含60 mg的內(nèi)標(biāo)溶液。

對(duì)照品貯備液：分別精密稱取丙酮508.6 mg、甲醇298.5 mg、異丙醇512.9 mg、甲苯89.2 mg、吡啶40.9 mg，置于同一50 ml量瓶中，加DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品貯備液。

供試品溶液：精密稱取甲磺酸伊馬替尼原料藥1 g，置于10 ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 ml，再加DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3 線性關(guān)系考察

精密量取對(duì)照品貯備液0.1、0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 ml，各置于100 ml量瓶中，分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液10 ml，再加DMSO稀釋至刻度，搖勻，即得系列濃度對(duì)照品溶液。分別精密量取1 μl，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以各待測(cè)溶劑與內(nèi)標(biāo)峰面積比值（y）對(duì)各待測(cè)溶劑質(zhì)量濃度（x，μg/ml）進(jìn)行線性回歸，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 各溶劑線性關(guān)系Tab 1 Linear relation of organic solvents

2.4 定量限與檢測(cè)限試驗(yàn)

將各對(duì)照品貯備液逐步稀釋，分別以信噪比約為10和2～3為定量限和檢測(cè)限，測(cè)得丙酮、甲醇、異丙醇、甲苯與吡啶的定量限分別為15、20、24、16、15 ng，檢測(cè)限分別為5、5、8、4、3 ng。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密量取對(duì)照品貯備液5.0 ml，置于100 ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液10 ml，再加DMSO稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取1 μl，連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。計(jì)算得丙酮、甲醇、異丙醇、甲苯、吡啶與內(nèi)標(biāo)峰面積比值的RSD分別為2.16%、2.20%、2.16%、2.17%、2.14%（n＝6）。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別精密量取“2.5”項(xiàng)下溶液1 μl，于0、1、2、4、6、8 h進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。計(jì)算得丙酮、甲醇、異丙醇、甲苯、吡啶與內(nèi)標(biāo)峰面積比值的RSD分別為2.13%、3.09%、1.11%、2.97%、2.91%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取甲磺酸伊馬替尼原料藥（批號(hào)：201001）6份，按照“2.2”項(xiàng)下方法，制備成供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，以峰面積比值按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算各有機(jī)溶劑殘留量。結(jié)果，丙酮、甲醇和甲苯在該批樣品中未檢出，異丙醇平均含量為0.1237%（RSD＝1.16%），吡啶平均含量為0.0073%（RSD＝1.45%）。

2.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知各溶劑含量的甲磺酸伊馬替尼原料藥（批號(hào)：201001）9份，每份1 g，置于10 ml量瓶中，第1～3份分別加入對(duì)照品貯備液0.4 ml，第4～6份分別加入對(duì)照品貯備液0.5 ml，第7～9份分別加入對(duì)照品貯備液0.6 ml，再分別精密加入內(nèi)標(biāo)溶液1 ml，加DMSO溶解并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取1 μl，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。以峰面積比值按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算得丙酮、甲醇、異丙醇、甲苯與吡啶的回收率。結(jié)果平均回收率為97.71%～102.13%，詳見(jiàn)表2。

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 2Results of recovery test（n＝9）

2.9 樣品中有機(jī)溶劑殘留量測(cè)定

按照“2.2”項(xiàng)下方法，取3批原料藥樣品制備成3批供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，以峰面積比值按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算各有機(jī)溶劑殘留量。結(jié)果，3批原料藥中均未檢出丙酮、甲醇和甲苯，異丙醇和吡啶殘留量均低于《中國(guó)藥典》和ICH的有關(guān)限度規(guī)定，詳見(jiàn)表3（表中“-”表示未檢出）。

3 討論

表3 樣品測(cè)定結(jié)果（%%，n＝3）Tab 3Results of content determination of samples（%%，n＝3）

殘留溶劑多為揮發(fā)性溶劑，在原料藥中含量較低，而且由于氣相色譜法進(jìn)樣量小，因此相比外標(biāo)法而言，內(nèi)標(biāo)法可以減少儀器或操作帶來(lái)的誤差。筆者經(jīng)過(guò)前期試驗(yàn)篩選，選擇三氯甲烷為本試驗(yàn)的內(nèi)標(biāo)物，其與各待測(cè)溶劑均能達(dá)到良好分離。

甲磺酸伊馬替尼易溶于水，但是水直接進(jìn)樣對(duì)毛細(xì)管柱損害較大，因此考慮選用有機(jī)溶劑。本試驗(yàn)中5種待測(cè)溶劑的沸點(diǎn)差異較大，最低的丙酮為56℃，最高的吡啶為115.3℃，而且極性差異也較大。考慮到原料藥的溶解性和溶劑之間的分離度，選擇沸點(diǎn)更高的DMSO（153℃）為溶劑。

本研究建立的氣相色譜法可同時(shí)測(cè)定5種有機(jī)溶劑殘留量，且方法操作簡(jiǎn)便、重復(fù)性好，各方法學(xué)考察試驗(yàn)中的RSD均小于5%，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

[1]王晨.甲磺酸伊馬替尼抗腫瘤作用的研究[J].天津藥學(xué)，2005，17（4）：63.

[2]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：二部[S].2010年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：686、附錄61-65.

[3]陳立亞，于寶珠，趙慧芳.ICH指導(dǎo)原則與各國(guó)現(xiàn)行藥典藥品的殘留溶劑分析方法概述[J].中國(guó)藥事，2005，19（9）：542.

[4]李春燕，屠婕紅，傅應(yīng)華.毛細(xì)管氣相色譜法同時(shí)檢測(cè)丙酸氯倍他索原料藥中4種有機(jī)溶劑殘留量[J].中國(guó)藥房，2011，22（29）：2756.

[5]吳春麗，雷偉，李幸，等.GC法檢測(cè)氟康唑原料藥中的有機(jī)溶劑殘留量[J].中國(guó)藥房，2011，22（25）：2390.