馬海治癱膠囊提取工藝及質量標準的研究

蒙麥俠 陳瑞明 張 紅 高錦成 石敏娟 陜西省中醫藥研究院（西安710013）

馬海治癱膠囊系陜西省中醫醫院腦內科數名老中醫集多年臨床經驗，針對“腦中風”的康復治療而研制。處方由大黃、黃芪、水蛭、當歸等中藥組成，具有益氣通絡、活血化瘀、醒腦開竅、健肢回語，用于中風恢復期、后遺癥期。為了有效控制提取工藝，以干膏率為考察指標，采用正交實驗設計法，對其科學性進行研究；為控制其質量，保證臨床用藥安全有效，建立了組方藥味的薄層鑒別。

1 儀器與試藥 電子分析天平（型號：BS210S Max210g，d＝0.1mg，北京賽多利斯天平有限公司）；UV－8 三用紫外儀（無錫科達儀器廠）；大黃對照藥材（中國藥品生物制品檢定所，批號：120902－200609）；黃芪甲苷（中國藥品生物制品檢定所，批號：0781－200311）；馬海治癱膠囊（實驗室自制，批號：120412、120418、120426）。

2 方法與結果 2.1 提取工藝研究 2.1.1 提取工藝參數：提取工藝研究中，以中藥飲片粗顆粒為原料，浸泡時間確定為1.0h（無干芯），采用L9（34）正交表，以干膏率的提取量為指標，以加水量、煎煮次數、煎煮時間為因素，每個因素取三水平進行考察，通過正交試驗確定最佳工藝條件。正交試驗因素水平見1。

表1 正交實驗因素水平表

2.1.2 干膏率測定 實驗煎煮液，過濾，靜置過夜，上清液濃縮，定容于100mL 容量瓶中，搖勻，精密吸取25mL，水浴蒸干，參照中國藥典之浸出物測定法恒重的方式，測定，計算。

2.1.3 正交試驗安排 從試驗因素和水平情況看，選用L9（34）正交表即可。具體試驗操作見“正交試驗安排和數據分析表”。如：1＃實驗… 取實驗處方量藥材飲片粗顆粒，加水8倍，浸泡1h，煎煮2.0h，煎煮3次，煎煮液過濾，下按“干膏率測定”方法進行，其余如此進行。

表2 正交試驗安排和數據分析表

依據“正交試驗安排和數據分析表”中的數據，從極差角度看，各因素對干膏率的影響依次為：D＞B＞A，即煎煮次數＞煎煮時間＞加水量，最優工藝為：煎煮次數3次，加水量8倍，煎煮時間2.0h。

2.1.4 方差分析 依據“正交試驗安排和數據分析表”中的數據，進行方差分析，結果見下表，其中顯示：D 和B 因素的影響有顯著性意義，但表中B 因素的F 值與F0.05（2，2）臨界值非常接近，A 因素的影響沒有顯著性。但據文獻報道水蛭的生物活性與提取溫度、溶媒等有關，所以綜合考慮，確定最佳提取工藝為A3B3D1。

表3 方差分析表

2.1.5 驗證實驗 取實驗處方量藥材飲片粗顆粒，三份，加水浸泡1h，煎煮3次，每次加水6倍量，煎煮1.0h，煎煮液過濾，濾液靜置過夜，上清液定容至100mL，下按“干膏率測定”方法進行，計算干膏率，得驗證1＃、驗證2＃、驗證3＃干膏率分別為30.67%、29.68%、30.12%，平均干膏率為30.16%，說明優選工藝穩定，重復性好。

2.2 質量標準研究 2.2.1 大黃鑒別［1］取本品內容物0.5g，加甲醇20mL，浸泡1h，濾過，取濾液5mL，蒸干，殘渣加水10mL使溶解，再加鹽酸1mL，加熱回流30min，立即冷卻，用乙醚分2次振搖提取，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷1mL使溶解，作為供試品溶液。另取大黃對照藥材0.1g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取供試品溶液和對照藥材溶液各10μL，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 薄層板上，以石油醚（30～60℃）－乙酸乙酯－甲酸（15∶5∶1）的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的五個橙黃色熒光主斑點；置氨蒸汽中熏后，斑點變為紅色。

2.2.2黃芪鑒別［2］取本品內容物7.5g，用甲醇回流3次，用量依次為：50mL、40mL、40mL，每次回流1h，濾過、濾液水浴蒸干，殘渣加水30mL 使溶解，用水飽和的正丁醇振搖萃取四次，每次分別為30mL，合并正丁醇萃取液，用PH＝10～11的氨水洗兩次，每次分別為20mL、15mL，棄去氨水液，正丁醇液水浴蒸干，殘渣加水10～20mL使溶解，加于D101大孔吸附樹脂柱上，以水50mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇35～40mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇80mL 洗脫，收集洗脫液，水浴蒸干，用甲醇定容于2mL，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成1mL 含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液依次3μL、2μL 分別點樣于同一硅膠G 薄層板上，以三氯甲烷－甲醇－水（13∶7∶2）的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在于對照品色譜相應的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點。

3 討 論 試驗結果表明，所選因素對提取工藝有不同的影響，其中提取次數影響較為顯著，次之為提取時間，加水量對提取無顯著影響；考慮到處方中水蛭的生物活性并兼顧節時節能的原則，故選擇用6倍量水、回流提取3次，每次1h。處方中大黃及黃芪的薄層鑒別斑點清晰，重現性好，可用于其質量控制。

［1］ 國家藥典委員會.中國藥典［S］.北京：化學工業出版社，2005：123.

［2］ 莊 瑞.黃芪中黃芪甲苷提取條件的考察［J］.中國醫藥指南，2008，6（13）：115－116.