雌、雄皺紋盤鮑內臟脂肪酸及磷脂組成的比較分析

劉艷青，李兆杰*，李國云，劉小芳，薛長湖

(中國海洋大學食品科學與工程學院，山東 青島 266003)

鮑魚為海珍品之一，是非常名貴的藥食兩用海產品。鮑魚殼，即石決明，具有平肝潛陽、清熱益陰、明目解毒的功效，能治療頭暈目眩、胃酸過多和失眠等癥狀[1]。鮑魚多糖具有增強免疫、抗腫瘤的功效[2-3]，從鮑魚臟器中提取的鮑魚內臟多糖具有抗氧化，抗癌等活性[4-6]。鮑魚腹足與內臟脂質中多不飽和脂肪酸含量豐富[7]，且富含磷脂[8]。多不飽和脂肪酸能夠降低血中膽固醇及甘油三酯的水平，降低血液黏稠度，改善血液循環。磷脂對活化細胞、維持新陳代謝、增強人體免疫力和再生力方面發揮重要的作用。鮑魚內臟為加工副產物，現多作為蛋白來源添加到飼料中，本實驗對雌、雄鮑魚內臟脂質進行比較分析，主要研究其脂肪酸及磷脂組成，以期對鮑魚內臟脂質研究提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

皺紋盤鮑 青島市鮑魚養殖場。

脂肪酸甲酯標準品、磷脂酰膽堿(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰絲氨酸(PS)標準品、甲醇、氯仿、甲酸(均為色譜純) 美國Sigma公司；甲醇、三氯甲烷、正己烷(均為分析純) 天津市科密歐化學試劑公司；總膽固醇(TC)試劑盒、甘油三酯(TG)試劑盒 北京中生北控生物科技股份有限公司。

6980N型氣相色譜儀、高效液相色譜儀、蒸發光散射檢測器、ZORAX RX-SIL色譜柱 美國Agilent公司；Laborota 4000 efficient旋轉蒸發器 德國海道爾夫公司；AB135-S型精密電子分析天平 瑞士梅特勒-托利多公司；Milli-Q Synthesis超純水系統 美國Millipore公司；氯仿活化氨丙基硅膠固相萃取小柱 天津艾杰爾科技公司。

1.2 方法

1.2.1 總脂的提取

將皺紋盤鮑(61.6g±3.1g)去殼，分離出肌肉和內臟，冷凍干燥后粉碎。取內臟樣品10g，用Folch法提取樣品總脂。

1.2.2 游離脂肪酸含量的測定

將所提總脂用氯仿溶解并定容至100mL，取一定的氯仿溶液，減壓干燥后，用4mL正庚烷溶解，并加入1mL脂肪酸顯色劑(5%醋酸銅溶液，用吡啶調節pH6.1)，充分振蕩后，離心取上層有機相于710nm波長處測定吸光度，并與標準曲線對照，計算總脂中的游離脂肪酸含量。

1.2.3 磷脂含量的測定

總脂用硝酸-高氯酸混合液(4：1，V/V)進行消化，使總脂中的有機磷轉變成無機磷，在VC條件下與鉬酸銨反應生成鉬藍，于650nm波長處測定吸光度，并與標準曲線對照，計算總脂中的磷脂含量。

1.2.4 甘油三酯含量的測定

將所提總脂用氯仿溶解并定容至100mL，取一定的氯仿溶液，減壓干燥后，按照試劑盒的使用說明測定總脂中膽固醇和甘油三酯的含量。

1.2.5 脂肪酸的氣相色譜分析分別取脂肪酸標準品混合樣及雌雄總脂樣品，向具塞試管中加入1mL 10%硫酸-甲醇，60℃水浴15min。加入200μL正己烷漩渦振蕩，取正己烷層待氣相色譜分析。氣相色譜條件：H P-I N N O W a x 石英毛細管柱(30m×0.32mm，0.25μm)；進樣口溫度230℃；檢測器溫度250℃；柱溫以3℃/s由170℃升到210℃，在210℃條件下保持10mim。整個分析過程為43.3min。

1.2.6 磷脂的高效液相色譜-蒸發光散射(high performance liquid chromatography-evaportive light scattering detector，HPLC-ELSD)組成分析

根據García等[9]的方法，分別稱取20.0mg雌雄鮑魚內臟總脂，用1.0mL氯仿溶解。先用1mL氯仿活化氨丙基硅膠固相萃取小柱，取0.5mL脂質氯仿溶液移入固相萃取小柱中；并依次用8mL氯仿溶液(2：1，V/V)和3mL 2%乙酸-乙醚溶液洗脫小柱，棄去洗脫液；最后用3.0mL甲醇溶液洗出磷脂并收集；減壓干燥后用甲醇溶解。

PE、PC、PS標準品及雌雄磷脂樣品通過HPLC-ELSD進行組分分離及分析。色譜條件[10]：色譜柱：ZORAX RXSIL正相色譜柱(250m×4.0mm，5μm)；柱溫40℃；流動相A：氯仿-甲醇-水(1mol/L甲酸-三乙胺，pH3)(87.5：12：0.5，V/V)，流動相B：氯仿-甲醇-水(1mol/L甲酸-三乙胺，pH3)(28：60：12，V/V)；洗脫梯度：時間0～20min內，流動相B由0%增至100%，100%B洗脫保持5min后，在5min內恢復到初始100%A洗脫；蒸發光散射檢測器：溫度70℃，氮氣霧化，氣體流速2L/min。

2 結果與分析

2.1 脂質基本組成含量分析

表 1 雌、雄性鮑魚內臟中脂質基本組成含量Table 1 Lipid composition of viscera of female and male Haliotis discus hannai Ino%

由表1可以看出，雌性鮑魚內臟中甘油三酯與磷脂含量明顯高于雄性內臟，而雄性內臟中游離脂肪酸含量要遠高于雌性內臟。

2.2 雌、雄鮑魚內臟脂質脂肪酸的組成

表 2 雌、雄鮑魚內臟脂質脂肪酸組成Table 2 Visceral fatty acid composition of female and male Haliotis discus hannai Ino

不同組分比較采用SPSS 18.0軟件進行數據分析。由表2可知，雌、雄鮑魚內臟脂質脂肪酸組成具有顯著性差異。雄性鮑魚內臟的總飽和脂肪酸及單不飽和脂肪酸總量高于雌性鮑魚內臟脂質，且存在顯著性差異(P＜0.01)；而雌性鮑魚內臟的多不飽和脂肪酸及二甲基縮醛含量要高于雄性。

2.3 雌、雄鮑魚內臟脂質磷脂的組成

圖 1 雌性鮑魚內臟磷脂HPLC-ELSD圖譜Fig.1 HPLC-ELSD profile of phospholipids in female Haliotis discus hannai Ino viscera

圖 2 雄性鮑魚內臟磷脂HPLC-ELSD圖譜Fig.2 HPLC-ELSD profile of phospholipids in male Haliotis discus hannai Ino viscera

雌、雄鮑魚內臟脂質中磷脂組成主要有磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰絲氨酸(PS)、磷脂酰膽堿(PC)、鞘磷脂(SM)、溶血卵磷脂(LPC)以及3種未知組分X1，X2，X3組成。雌、雄鮑魚內臟脂質不同磷脂組分含量差異較大(圖1、2)，雄性鮑魚內臟中幾乎沒有PG，雄性鮑魚內臟中PE、PC、PS這3種常見磷脂含量較高。

3 討 論

鮑魚內臟脂質中含有大量的不飽和脂肪酸，可以用于預防和治療高血脂癥以及與高血脂癥密切相關的心腦血管疾病，是理想的油脂替代品[11]。皺紋盤鮑內臟脂質中磷脂含量豐富，磷脂作為功能性脂質在生命代謝活動中有極其重要的作用，可以調節脂質代謝，降低血脂中甘油三酯和膽固醇水平。皺紋盤鮑內臟磷脂主要由PE、PC、PS組成，PS具有提高認知力，改善老年人的阿耳茨海默(氏)癥的功效[12-15]。雌性鮑魚內臟中不飽和脂肪酸及二甲基縮醛的含量要高于雄性，雄性鮑魚內臟在磷脂組成方面較雌性簡單，PG、未知磷脂組分X1基本未檢測到。

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