癌復靈對荷瘤小鼠免疫功能和術后體力恢復的影響

萬軍梅，李紅霞 （.武漢職業技術學院生物工程學院，湖北 武漢430074；.湖北省腫瘤醫院，湖北 武漢430079）

癌癥患者在經過手術、放療、化療后，在未完全恢復正常生活前，要經歷相當漫長的過渡時期，這個時期通常稱為康復期，也稱“繼續治療期”。康復期必須堅持繼續治療以防復發、轉移和擴散。中醫藥治療癌癥不僅表現在殺滅癌細胞、抑制腫瘤的臨床治療意義上，更體現在防止復發、轉移和提高患者生命質量的康復治療過程中［1］。中醫藥在癌癥康復階段可起到“既病防變”和“治未病”的獨特作用［2］。癌復靈是湖北省腫瘤醫院研制的中藥復方制劑，具有健脾益氣、補血養陰、培元固本的功效，臨床上用于癌癥放療、化療及手術后康復期患者，能增強體質調節免疫，促進手術后機體的恢復，有利于減少腫瘤復發和轉移。通過對癌復靈的免疫功能調節和促進體力恢復作用的研究可以為其臨床應用提供一定的藥效學依據。

1 材料

1.1 藥品與試劑 癌復靈，灰棕色浸膏（湖北省腫瘤醫院藥劑科提供，批號20090316），1g浸膏相當于生藥材6g，臨用前用純化水稀釋至所需濃度；環磷酰胺（CTX，200 mg／瓶，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司，批號09061721）；羊抗小鼠IgG 10mg（華美生物工程公司，批號GM6030302E）；綿羊紅細胞（SRBC）、豚鼠血清由湖北省實驗動物研究中心提供；2－巰基乙醇（2－ME）（100mL／瓶，市售）。

1.2 動物 昆明種小鼠，SPF 級，體質量18～20 g，雌雄兼用，由湖北省實驗動物研究中心提供，動物合格證號：SCXK（鄂）2008－0005。

1.3 瘤株 小鼠肉瘤180（S180），由華中科技大學同濟醫學院藥物研究所提供。

2 方法與結果

2.1 對荷瘤小鼠化療后血清溶血素含量和脾細胞分泌抗體功能的影響 小鼠60只，隨機分為6組，每組10只。分組情況如下（括號內為給藥方式）：A.正常對照組：純化水（ig）；B.荷瘤對照組：純化水（ig）；C.荷瘤＋CTX：CTX 腹腔注射（ip）；D.荷瘤＋CTX＋癌復靈大劑量：CTX（ip），癌復靈4g·kg－1（ig）；E.荷瘤＋CTX＋癌復靈中劑量：CTX（ip），癌復靈2g·kg－1（ig）；F.荷瘤＋CTX＋癌復靈小劑量：CTX（ip），癌復靈1g·kg－1（ig）。實驗安排如下：（1）實驗周期20d，灌胃給藥每天一次，連續20 d；（2）荷瘤：實驗第8天，按常規方法［3］給B～F 組小鼠右腋皮下接種S180瘤液0.2mL／只；（3）化療：瘤株接種后第1、5、10天分別給C～F 組小鼠ip CTX 50mg·kg－1，共3次；（4）免疫：分別于實驗第7 天及第14天ip 20%SRBC 0.2mL／只免疫全部小鼠；（5）實驗：末次灌胃給藥后24h，小鼠摘眼球放血，取血清按文獻方法［4］測IgG 及IgM，溶血素含量（hemolysin concentration，HC）分別以HCIgG、HCIgM及HCIg（HCIgG＋HCIgM）表示。同時，取胸腺、脾臟稱重，計算臟器指數，并將每組脾臟混合制備脾細胞懸液，按文獻法［4］測定抗體分泌細胞的功能。結果見表1、表2。

表1結果顯示，小鼠荷瘤后，與正常對照組比較IgG 含量無變化，IgM 含量有所提高，但無明顯差異；荷瘤后用CTX 化療，IgG 及IgM 含量明顯下降，與荷瘤對照組比較P＜0.01，而癌復靈4g·kg－1能明顯對抗化療所致的IgM 含量下降，改善化療小鼠的體液免疫功能，對化療所致的IgG 含量降低無明顯影響。

表1 癌復靈對荷瘤小鼠化療后血清溶血素含量的影響（±s，n＝10）Tab 1 Effect of Aifuling on the content of serum hemolysin in tumor－bearing mice（±s，n＝10）

表1 癌復靈對荷瘤小鼠化療后血清溶血素含量的影響（±s，n＝10）Tab 1 Effect of Aifuling on the content of serum hemolysin in tumor－bearing mice（±s，n＝10）

注：與荷瘤對照組比較，aP＜0.01；與CTX 組比較，b P＜0.01

表2 癌復靈對荷瘤小鼠化療后脾細胞分泌抗體功能的影響（±s，n＝10）Tab 2 Effect of Aifuling on spleen antibody－secreting cell function in mice（±s，n＝10）

表2 癌復靈對荷瘤小鼠化療后脾細胞分泌抗體功能的影響（±s，n＝10）Tab 2 Effect of Aifuling on spleen antibody－secreting cell function in mice（±s，n＝10）

注：與荷瘤對照組比較，aP＜0.05，b P＜0.01；與CTX 組比較，c P＜0.01

表2結果表明，荷瘤小鼠經CTX 化療后，脾細胞分泌抗體功能明顯減弱，而癌復靈4g·kg－1可明顯對抗CTX 的作用，顯著增強脾細胞分泌抗體的功能。各劑量組對CTX 所致的免疫器官質量減輕無明顯影響。

2.2 對SRBC所致的荷瘤小鼠遲發型足墊腫脹的影響 小鼠60 只，隨機分為6 組，分組方式同前。小鼠連續ig 14d，第7天同前給B～F 組小鼠接種S180瘤株，荷瘤后第1 天及第5 天給C～F 組小鼠CTX 50mg·kg－1（ip），共2次。給藥第10天，所有小鼠ip SRBC 2.0×108個致敏。第14 天末次ig給藥后，每鼠右后足墊皮下注射SRBC 2.0×108個攻擊，左后足墊皮下注射等量生理鹽水作對照。24h后采用盲法用游標卡尺由兩個觀察者對實驗小鼠后足墊厚度進行測量，以左右足墊的厚度差作為足墊腫脹度指標［5］，結果見表3。

表3 癌復靈對SRBC 致荷瘤小鼠遲發型足墊腫脹的影響（±s，n＝10）Tab 3 Effect of Aifuling on the delayed footpad reaction caused by SRBC（±s，n＝10）

表3 癌復靈對SRBC 致荷瘤小鼠遲發型足墊腫脹的影響（±s，n＝10）Tab 3 Effect of Aifuling on the delayed footpad reaction caused by SRBC（±s，n＝10）

注：與荷瘤對照組比較，aP＜0.01；與CTX 組比較，b P＜0.05

表3結果表明，CTX 能明顯抑制足墊腫脹度，而癌復靈4g·kg－1能明顯對抗CTX 所致的足墊腫脹度降低，改善化療小鼠的細胞免疫功能。

2.3 對荷瘤小鼠化療后手術恢復期體力的影響——小鼠游泳試驗 小鼠50只，按常規方法接種S180瘤株后隨機分為5組，分組方式見表4。各組于荷瘤后第4 天、第7 天分 別予CTX 80 mg·kg－1（ip），共2次，第8天在無菌條件下摘除腋下腫瘤，同時開始灌胃給藥，CTX 組給純化水，連續8d。末次給藥后30 min，按文獻［3］法將小鼠放入水槽進行游泳試驗，水深25cm，水溫（20±0.5）℃，記錄自落水開始至鼻孔沉下水面所需時間，結果見表4。

表4 癌復靈對荷瘤小鼠化療后游泳時間的影響（±s，n＝10）Tab 4 Effect of Aifuling on the swimming time in tumorbearing mice（±s，n＝10）

表4 癌復靈對荷瘤小鼠化療后游泳時間的影響（±s，n＝10）Tab 4 Effect of Aifuling on the swimming time in tumorbearing mice（±s，n＝10）

注：與CTX 組比較，aP＜0.05

表4結果顯示，西洋參和癌復靈4g·kg－1均能明顯延長小鼠游泳時間，有效改善化療后手術恢復期體力。

3 討論

腫瘤患者由于腫瘤的長期侵襲，機體素質明顯下降，如再經手術切除、化療、放療的持續打擊，大多數患者會處于氣血兩虛，免疫功能低下的狀況。康復期的中醫藥治療以扶正固本為最基本治則，而改善或促進免疫系統功能是扶正固本治則最重要的藥理學基礎［6］。

癌復靈由黃芪、黨參、白術、茯苓、女貞子、丹參、蛇舌草、夜交藤等15味中藥經水煎醇沉濃縮干燥而成，方中黃芪黨參補氣，白術茯苓健脾，女貞子補益肝腎，丹參夜交藤養血安神，整方兼顧氣血陰陽達到扶正固本的功效，臨床上用于癌癥康復期患者，具有增強免疫，促進體力恢復，預防腫瘤復發轉移的作用。現代研究表明，黃芪、茯苓、女貞子及丹參均能增強機體的免疫功能。研究結果顯示，中藥復方癌復靈能明顯對抗CTX 化療所致的IgM 含量降低；顯著增強化療小鼠脾細胞分泌抗體的功能；能明顯對抗CTX 對SRBC所致足墊腫脹的抑制作用；能明顯延長化療后手術恢復期小鼠的游泳時間。說明癌復靈對荷瘤小鼠化療后的細胞免疫及體液免疫功能均有增強作用，并能有效改善化療后手術恢復期體力。藥理實驗結果為該藥的臨床應用提供了一定的理論依據，關于其免疫調節作用的機制和抗腫瘤轉移作用有待進一步研究。

［1］ 施志明.中醫中藥抗腫瘤轉移研究進展［J］.ITAC 國際中醫藥腫瘤學術大會，2007：38－42.

［2］ 張建中.中醫藥在癌癥康復領域大有作為［J］.家庭中醫藥，2007，4：20.

［3］ 李儀奎.中藥藥理實驗方法學［M］.2版.上海：上海科學技術出版社，2006：513－515.149.

［4］ 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學［M］.3版.北京：人民衛生出版社，2002：1230－1231.

［5］ H.G.沃格爾，W.H.沃格爾.藥理學實驗指南—新藥發現和藥理學評價［M］.北京：科學出版社，2001：583.

［6］ 薛文翰，巨玉蓮.中醫扶正固本在治療惡性腫瘤中的應用及機理探討［J］.甘肅醫藥，2011，30（10）：664－666.