急性淋巴細胞白血病病兒血清sCTLA-4測定及意義

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(1 青島大學醫學院附屬青島市婦女兒童醫院血液腎臟科，山東 青島 266034； 2 青島大學醫學院兒科學教研室)

白血病是一種起源于造血系統的惡性腫瘤，主要表現為白血病細胞在骨髓及其他造血組織不受控制地克隆性增生，腫瘤細胞逃避人體免疫監視可能是其過度增殖重要原因之一。細胞毒性T淋巴細胞抗原-4(CTLA-4)是T細胞活化過程中一種重要的負性調節蛋白，可降低T細胞活化從而抑制人體抗腫瘤免疫反應。sCTLA-4是CTLA-4的可溶性形式，它是CTLA-4基因轉錄生成的產物，其完整保留有結合B7分子的氨基酸殘基，體外實驗證實其可與B7分子結合，發揮免疫調節作用[1]。本文通過檢測急性淋巴細胞性白血病(ALL)病兒治療前后血清sCTLA-4水平的變化，探討ALL發病的可能免疫學機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2012年3—9月，選取青島大學醫學院附屬醫院血液兒科及青島市婦女兒童醫院血液腎臟科收治的、新發急性B淋巴細胞白血病病兒30例(ALL組),男18例，女12例；年齡1～14歲，平均(5.60±3.02)歲。所有病兒均進行骨髓細胞學、免疫學、分子生物學及細胞遺傳學檢查，診斷及完全緩解判斷符合2006年兒童血液學組第3次修訂草案的標準[2]。行MIC分型及臨床危險度分型，不具備任何危險因素病兒(低危組)21例，余9例為高危組。排除其他惡性腫瘤性疾病、免疫性甲狀腺疾病等自身免疫性疾病，近半年無重大感染性疾病，無糖皮質激素等免疫抑制劑用藥史。以同期健康體檢兒童32例作為對照組，男17例，女15例；年齡1.5～14.0歲，平均(6.30±2.76)歲。全部研究對象均無血緣關系。

1.2 血清sCTLA-4檢測方法

分別采集對照組、ALL組(治療前及完全緩解6個月后)空腹靜脈血2 mL，5 000 r/min離心收集血清，-70 ℃保存。應用雙抗體夾心酶聯免疫吸附法(ELISA法)測定血清中sCTLA-4水平，按試劑盒說明書進行操作。

1.3 統計學處理

2 結 果

2.1 兩組sCTLA-4水平比較

ALL治療前、獲得完全緩解后血清sCTLA-4分別為(34.27±18.39)、(189.59±111.04)ng/L，對照組為(193.73±105.37)ng/L。ALL病兒治療前sCTLA-4水平較對照組明顯降低，差異有顯著意義(t=5.236，P<0.01)；完全緩解后sCTLA-4水平升高，與治療前比較差異有顯著意義(t=6.604,P<0.01)，與對照組比較，差異無顯著性(P>0.05)。

2.2 不同性別及臨床危險度ALL病兒sCTLA-4水平比較

男性ALL病兒血清sCTLA-4水平為(30.37±19.13)ng/L，女性為(40.11±16.26)ng/L，兩組比較差異無顯著性(t=1.447,P>0.05)。低危組血清sCTLA-4水平為(31.22±16.99)ng/L，高危組為(39.82±21.34)ng/L，兩組比較差異無顯著性(t=1.087,P>0.05)。

3 討 論

目前研究認為，白血病的發展與轉歸與人體免疫功能的改變有密切關系。已有研究表明，白血病病人常伴有T淋巴細胞亞群的改變(包括數量、比例)及功能的損害[3]。王艷榮等[4]研究顯示，白血病病人外周血CD3細胞、CD4細胞、CD8細胞計數及CD4/CD8比值顯著降低，而在緩解后恢復正常。T淋巴細胞發揮正常的免疫監視功能除細胞數量正常外，還要求其正常活化。T細胞活化需要雙信號，一是T細胞抗原識別受體(TCR)與抗原肽MHC分子的結合即抗原識別過程；二是共刺激信號，由抗原提呈細胞(APC)和T細胞表面的協同刺激分子提供。共刺激信號決定著受到抗原刺激的T細胞是分化、增殖為效應細胞，還是進入無反應狀態[5]。缺乏第二信號的輔助，T細胞處于克隆無能或無應答狀態。位于T細胞上的CD28/CTLA-4與APC上的B7(B7-1、B7-2)是起主要作用的協同刺激分子。CTLA-4和CD28競爭與B7結合，發揮抑制T細胞活化的作用。已有研究顯示，白血病細胞CD28表達降低[6]；而關于CTLA-4研究方面，動物實驗證實阻斷CTLA-4與腫瘤疫苗聯用可以治愈荷瘤小鼠[7]。CTLA-4已經被視為人體內抑制抗腫瘤免疫的重要調節因子。

sCTLA-4于1999年由MAGISTRELLI等[8]首次報道，與一些黏附分子的可溶性形式產生的方式[9]有所不同,它是由CTLA-4 mRNA發生選擇性剪接，造成框移，CTLA-4穿膜部分缺失而產生的天然可溶性蛋白。成熟的CTLA-4分子由膜外功能區、跨膜區和胞漿區組成，sCTLA-4缺少跨膜區，與CD40L的可溶性形式[10]相似,其與配體結合的氨基酸殘基仍然完整，保留了與B7結合的功能。OAKS等[1]認為，sCTLA-4可能有雙重作用，其與B7的結合一方面影響傳遞活化信號的CD28/B7協同刺激信號，另一方面影響CTLA-4/B7的相互作用，阻斷T細胞活化的負性調節信號。但因CTLA-4與B7結合的能力較CD28強很多倍，故推測sCTLA-4主要通過干擾膜表面CTLA-4與B7的結合而發揮功能。有研究顯示，sCTLA-4水平與免疫性甲狀腺疾病、系統性紅斑狼瘡、1型糖尿病等自身免疫性疾病相關[11]，但其與腫瘤性疾病關系鮮有報道。本文研究結果顯示，ALL病兒治療前血清sCTLA-4水平較對照組明顯下降，提示sCTLA-4對膜表面的CTLA-4競爭性抑制作用減弱，從而相應地加強了CTLA-4的功能，抑制T細胞的正常活化，削弱了人體抗腫瘤免疫。這說明ALL病兒體內免疫力呈抑制性優勢，ALL病兒存在免疫功能的紊亂，這與白血病的發病互為因果，且在一定程度上影響著疾病的發展與轉歸。

目前，兒童白血病的治療方法主要是化療，隨著化療藥物的應用，大部分腫瘤細胞得以清除，然而化療藥物的毒性限制使其無法完全殺滅白血病細胞，即存在著微小殘留病(MRD)，MRD的最終清除依賴于自身免疫系統的重建。本文的研究結果顯示，ALL病兒獲得完全緩解后sCTLA-4水平與正常對照組差異無顯著性,說明隨著疾病的緩解,人體免疫功能得以重建,升高的sCTLA-4競爭性抑制膜表面CTLA-4的功能，減弱了活化抑制信號，T細胞得以正常活化，從而發揮正常的免疫監視功能，殺滅殘存腫瘤細胞。因此，sCTLA-4的水平可以作為反映人體免疫狀態的一個輔助指標，對判斷化療效果、預測預后等有重要意義。該研究結果同時提示我們，在臨床白血病治療過程中，應該更為重視免疫治療及免疫指標的檢測，從而達到減少復發、提高白血病病兒治愈率的目的。

[1] OAKS M K, HALLETT K M,

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