金正日花葉片組培的初步研究

摘要：金正日花以觀花為主，嬌嫩艷麗、姿態優美，枝葉翠綠，株型豐滿，被譽為“世界上最美麗的花”。通過對外植體的建立、愈傷組織誘導培養、叢生芽的繼代增殖培養、試管苗生根培養、馴化移栽、小苗的后期管理等幾個有效的措施便得到大批量優質的植株。

關鍵詞：金正日花；葉片組培

中圖分類號：S6 文獻標識碼： A 文章編號： 1674-0432（2013）-20-14-1

金正日花為多年生球根秋海棠的一種，是日本園藝學家Kamo Mototeru經多年雜交選育而成。該花因培育者十分祟敬朝鮮領導人金正日而得名。金正日花以觀花為主，嬌嫩艷麗、姿態優美，枝葉翠綠，株型豐滿，花大如茶花，該花株高約40厘米，莖稈直立粗壯，葉片肥厚、心形，地下塊莖為不規則扁球形，花朵高度重瓣，花徑可達10厘米以上，花期長達120天。由于金正日花的種子非常細小，并需人工授粉才能獲得，且其莖葉多汁，扦插容易腐爛，常規繁殖難度很大，而采用生物技術手段恰好能夠克服這些缺點，生產出優質組培苗。

1 外植體的建立

“金正日”花的組織培養以植株上的嫩葉作為外植體效果最好。在去外植體前10天左右，把植株放置溫室內，防止往葉片上噴水。接種前選取剛長出的直徑約2厘米的健壯無病的嫩葉。先用細毛刷輕輕刷去表面塵土，并于流水下沖洗干凈，再放入三角瓶內加少量多菌靈，放入搖床震蕩清洗15分鐘后，用自來水沖洗30分鐘備用。在無菌實驗室超凈工作臺下，用無菌水沖洗一次，接著用0.1%升汞溶液消毒4～8分鐘，再用無菌水沖洗4次。然后將葉片分割成1平方厘米左右的小塊，接種于培養基中，每瓶培養基接種一塊葉片。

2 愈傷組織誘導培養

外植體培養5～7天后，將無菌的外植體轉接到以下4種培養基：

MS+（6BA 0.5 mg/L +NAA'0.1 mg/L）+糖30g/L+瓊脂9g/L

MS+（6BA 0.5 mg/L +2，4-D1mg/L）+糖30g/L+瓊脂9g/L

MS+（6BA 1 mg/L +NAA'0.5 mg/L）+糖30g/L+瓊脂9g/L

MS+（6BA 1 mg/L +2，4-D1mg/L）+糖30g/L+瓊脂9g/L

光照保持在1200LX（勒克斯）每天光照8～12小時，溫度控制在20℃～25℃。經過21～28天培養后，外置體首先形成愈傷組織。其中MS+（6BA 1 mg/L +NAA'0.5 mg/L）+糖30g/L+瓊脂9g/L的培養基，有利于提高愈傷組織的分化率。

3 叢生芽的繼代增殖培養

外植體形成愈傷組織，隨后分化出叢生芽和小葉。將叢生芽分割后，分成數叢轉移到MS+6BA0.4 mg/L+ NAA'0.1 mg/L+糖30g/L +瓊脂9g/L、MS+6BA0.6 mg/L+ NAA'0.1 mg/L+糖30g/L +瓊脂9g/L、MS+6BA0.8 mg/L+ NAA'0.1 mg/L+糖30g/L +瓊脂9g/L、MS+6BA1.0 mg/L+ NAA'0.1 mg/L+糖30g/L +瓊脂9g/L的培養基上進行繼代培養，繼代培養的光照、溫度同誘導階段相同，如果光照過強，不利于叢芽的伸長。以MS+6BA0.8 mg/L+ NAA'0.1 mg/L+糖30g/L+瓊脂9g/L的培養基，增殖最多，繁殖系數達7.6倍以上。

4 試管苗的生根培養

繼代培養30天左右，能誘導生根苗占60%左右，這時候可將叢生芽接入：1/2MS+IAA0.3mg/L+糖20g/L+瓊脂9g/L 、1/2MS+IAA0.5mg/L+糖20g/L+瓊脂9g/L、1/2MS+IAA0.7mg/L+糖20g/L+瓊脂9g/L、1/2MS+IAA0.9mg/L+糖20g/L+瓊脂9g/L的生根培養基中，其中，1/2MS+IAA0.5mg/L+糖20g/L+瓊脂9g/L的培養基生根最好，生根率達90%以上。采取誘導生根和繼代培養同時進行的方法。在生根過程中，光照需要加強，強度為1500LX（勒克斯）左右，每天10～12小時。

5 試管苗的生根馴化移栽

生根移栽問題一直是植物繁殖中的難點，我們的試管苗高度達2～3厘米，并且長出3～4條1厘米左右的新根時，將生根試管苗放在室外光線明亮的地方，閉瓶煉苗2～3天，再逐漸開始瓶煉苗2～3天。讓植株經受試管外環境的鍛煉后取出試管苗，洗凈基部粘附的培養基，移植于配置好的營養土中，遮陰保濕，空氣溫度保持在60%～70%，當植株萌發新根后讓其逐漸見光，并降低溫度，直至暴露在外界。

6 小苗的后期管理

小苗移栽后，要保持一定的溫度和濕度，這點是小苗能不能成活的關鍵?！敖鹫铡被ㄉL適宜的溫度為18℃～25℃，超過30℃莖葉萎縮，35℃以上，植株枯死，若低于15℃就處于休眠狀態?？諝鉂穸瓤刂圃?0%～60%，濕度太低容易引起卷葉，不宜成活。濕度太高，容易腐爛?！敖鹫铡被ǖ厣喜糠指缓海瑢λ忠蟛桓?，澆水時用噴壺噴灑，枝能保持濕潤，營養土中又不積水。澆水時間，春季、夏季一般以早晚為好，冬季以中午為佳。

參考文獻

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