杉木雙花鞘花寄生提取物自由基清除能力研究

摘要：以95%乙醇、丙酮和乙酸乙酯為溶劑分別對杉木雙花鞘花[Macrosolen bibracteolatus （Hance） Danser]寄生進行冷浸提取，用DPPH和ABTS體系評價杉木雙花鞘花寄生提取物清除自由基的能力。結果表明，杉木雙花鞘花寄生各提取物對DPPH自由基和ABTS自由基均具有清除能力，其中95%乙醇和丙酮提取物對自由基的清除能力較強，可作為抗氧化劑的天然來源之一。

關鍵詞：雙花鞘花[Macrosolen bibracteolatus （Hance） Danser]；杉木寄生；抗氧化；DPPH自由基；ABTS自由基

中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）15-3625-03

生物體內存在的過量氧自由基與蛋白質、脂類化合物、多糖、核酸等大分子發生氧化反應，造成細胞損傷和引起組織結構的非正常變化，進而引發心血管疾病[1]、衰老[2]甚至癌變[3]等問題。抗氧化性物質可淬滅自由基，阻止因過量自由基和生物大分子作用而引起的一系列鏈式氧化過程。盡管通過化學手段合成的物質如叔丁基羥基茴香醚（BHA）、2，6-二叔丁基對甲酚（BHT）、沒食子酸丙酯（PG）、叔丁基對苯二酚（TBHQ）等具有優良的抗氧化性質，且在食品及其他領域已經得到了廣泛應用，但近年研究發現，這類物質對人體呼吸酶活性產生一定的不利影響，甚至還有致畸作用，一旦進入人體就會產生潛在危害[4]。因此尋找安全、可靠的抗氧化物質成為近年世界各國精細化工領域研究的重點內容之一。

雙花鞘花[Macrosolen bibracteolatus （Hance） Danser]別名二苞鞘華、八角寄生等，為桑寄生科鞘花屬植物，常寄生于杉木屬、樟屬、五月茶屬、灰木屬或殼斗科植物，民間主要用于治風濕痹癥、關節疼痛、筋骨拘攣、腰膝酸軟[5]。植物的抗氧化活性多與酚類及黃酮類物質有關[6]，雙花鞘花的同屬植物鞘花寄生（Macrosolen cochinchinensis）可分離出酚及黃酮類物質[7，8]。目前，寄主為杉木（Cunninghamia Lanceolata）的雙花鞘花（以下均稱為杉木雙花鞘花寄生）的抗氧化活性鮮有報道。因此，通過分析杉木雙花鞘花寄生乙酸乙酯提取物、丙酮提取物和乙醇提取物對DPPH（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼）、ABTS[2，2′-聯氨-雙（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸]自由基的清除能力，研究杉木雙花鞘花寄生不同溶劑提取物的抗氧化活性，旨在為天然抗氧化物質的開發利用提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

材料：雙花鞘花，經廣西中醫藥大學壯醫藥學院韋松基教授鑒定為桑寄生科鞘花屬植物雙花鞘花，其寄主鑒定為杉科杉木屬植物杉木，將其莖枝自然晾干，粉碎。

儀器：8453型紫外可見分光光度計（美國安捷倫公司）、BS224S電子天平（德國賽多利斯公司）、恒溫水浴鍋（黃驊市新興儀器廠）、RE-52A型旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）。

試劑：DPPH、ABTS購于美國SIGMA公司，其他試劑均為國產分析純。

1.2 方法

1.2.1 杉木雙花鞘花寄生的部位提取 將杉木雙花鞘花寄生全株陰干，粉碎后各稱取100 g，用800 mL 95%乙醇冷浸3 d，過濾。濾渣加等量溶劑同法再提取1次，過濾，合并2次濾液。濾液置旋轉蒸發儀中減壓蒸餾，回收溶劑，殘留物低溫真空干燥至干，得杉木雙花鞘花寄生乙醇提取物浸膏（EE） 5.181 g，得率為5.18%。同法制備丙酮提取物浸膏（AE） 3.203 g，得率為3.20%；乙酸乙酯提取物浸膏（EAE） 1.400 g，得率為1.40%。

1.2.2 清除DPPH自由基能力測定[9] 取0.15 mL不同濃度（0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、1.8、2.0 mg/mL）杉木雙花鞘花寄生提取物，分別加入8 mL 0.004%（m/V）DPPH溶液，室溫放置10 min，以不加提取液的DPPH為空白對照，在最大波長517 nm處測定吸光度，直到平衡為止。根據下列公式計算各種提取液對DPPH自由基的清除率：SC=（1-A1/A0）×100%，式中，SC為清除率，A1為加提取物后DPPH溶液的吸光度；A0為未加提取物時DPPH溶液的吸光度。

1.2.3 清除ABTS自由基能力測定[10] 用去離子水將ABTS配制成7 mmol/L準備液，然后往準備液中加入過硫酸鉀固體，使此準備液的過硫酸鉀濃度變為2.45 mmol/L。室溫避光放置2 d備用。將ABTS溶液用磷酸鹽緩沖液（PBS）稀釋，在732 nm下測得吸光度為（0.70±0.05），將30 μL不同濃度（同“1.2.2”）的杉木雙花鞘花寄生提取物分別與3 mL ABTS溶液混合，在室溫下放置10 min后測其吸光度，PBS溶液作為參比，取穩定時的A732 nm值。清除率計算公式如下：SC=[1-Atest/Acontrol）]×100%。其中，Atest為加入提取物后的ABTS的穩定吸光度；Acontrol為不加提取物的ABTS的吸光度。

2 結果與分析

2.1 杉木雙花鞘花寄生對DPPH自由基的清除能力

DPPH是一種早期合成的有機自由基，其結構中含有3個苯環，1個氮原子上有 1個孤對電子，常用來評估抗氧化物的供氫能力，它在有機溶劑中非常穩定，呈紫色，在517 nm處有強吸收，當遇到自由基清除劑時，DPPH的孤對電子被配對而使其退色，也就是在最大吸收波長處的吸光值變小。因此，可通過測定吸光值的變化來評價樣品對DPPH自由基的清除效果。通過測定不同濃度杉木雙花鞘花寄生不同極性溶劑提取物對DPPH自由基的清除能力，結果（圖1）表明，杉木雙花鞘花寄生不同極性溶劑提取物DPPH自由基清除率與提取物濃度呈正相關，EE、AE具有較強的清除能力，且清除率較為相近。在提取物溶液濃度為2.0 mg/mL時，EE、AE對DPPH自由基的清除率分別為76.75%和74.75%，而EAE清除能力則相對較弱，僅為64.59%。

2.2 杉木雙花鞘花寄生對ABTS自由基的清除能力

ABTS在適當的氧化劑作用下氧化成綠色的ABTS自由基，在抗氧化物存在時ABTS自由基的產生會被抑制，在732 nm測定其吸光度即可測定并計算出樣品的ABTS自由基清除能力。圖2是不同濃度杉木雙花鞘花寄生不同極性溶劑提取物對ABTS自由基清除能力的測定結果。由圖2可知，EE和AE均具有很好地清除ABTS自由基的能力，對ABTS自由基的清除率與提取物溶液濃度呈正相關。在濃度為0.5～1.2 mg/mL時，AE 對ABTS自由基清除能力稍強于EE，但在濃度為1.5～2.0 mg/mL時，EE對ABTS的清除率高于AE。EAE活性最弱，其對ABTS的清除能力隨提取物濃度的升高變化幅度很小。

3 結論

杉木雙花鞘花寄生各極性提取物對DPPH及ABTS自由基均具有清除能力，清除率與各提取物溶液濃度呈正相關；95%乙醇和丙酮提取物對自由基的清除能力均很強，乙酸乙酯提取物對自由基的清除能力較弱，表明杉木雙花鞘花寄生提取物特別是95%乙醇和丙酮提取物具有較好的開發天然抗氧化性物質的潛力，這為進一步開發利用杉木雙花鞘花寄生資源、深入挖掘杉木雙花鞘花寄生在食品和醫學領域的應用提供了一定的參考依據。

參考文獻：

[1] 馬建林，張銀環. 氧自由基與心力衰竭[J].臨床心血管病雜志，1993，9（4）：250-252.

[2] 趙保路.氧自由基和衰老[J].自然雜志，1990（8）：511-514.

[3] 孔德升.組織因子途徑抑制物-2及其結構域1的基因克隆、表達和功能研究[D].上海：復旦大學，2006.

[4] 邱秀芹.自由基與抗氧化劑對人體健康的再評價[J]. 實用醫技雜志，2007，14（32）：4498-4500.

[5] 國家中醫藥管理局中華本草編委會.中華本草[M].上海：上海科學技術出版社，2005.

[6] 王 輝，梅文莉，趙夏博，等. 降香檀的化學成分與藥理活性研究進展[J].中國民族民間醫藥，2011，20（10）：20-23.

[7] 覃勇榮，李秋明，黃振球，等.桂西北巖溶地區鞘花寄生不同器官總黃酮含量比較[J]. 河池學院學報，2012，32（5）：1-7.

[8] 汪 強，李良瓊，李美蓉，等.鞘花寄生化學成分的研究[J].中草藥，1996（9）：518-521.

[9] TABART J， KEVERS C， PINCEMAIL J， et al. Antioxidant capacity of black currant varies with organ， season， and cultivar[J]. J Agric Food Chem，2006，54（17）：6271-6276.

[10] RE R， PELLEGRINI N， PROTEGGENTE A. Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation decolorization assay[J]. Free Radical Biology and Medicine，1999，26（9-10）：1231-1237.