苗藥八爪金龍中生物活性成分的研究（Ⅰ）

摘要：采用水蒸氣蒸餾法、索氏提取法分別提取苗藥八爪金龍（Ardisia crispa（Thunb.）DC.）中的揮發油和巖白菜素。利用GC/MS法及HPLC/MS法對揮發油及巖白菜素含量進行測定。結果表明，巖白菜素在30.300～912.000 ng/mL范圍內與峰面積具有良好的線性關系（r=0.999 1）， 平均回收率為97.66%（RSD=2.31%）；八爪金龍揮發油主要成分有己醛、（Z）-2-庚烯醛、3-羥基-1-辛烯、石竹烯、龍腦、9，12，15-十八三烯、3-苯基-2-丙烯醛、芳姜黃酮、n-癸酸、十二烷酸、正丁烯基苯酞、棕櫚酸等，含量分別為7.72%、1.82%、1.92%、1.85%、2.48%、2.98%、3.06%、5.17%、4.08%、7.36%、3.11%、29.11%。GC/MS法測定出揮發油中的27個成分，占揮發油總量的87.17%。建立的HPLC/MS方法簡單、準確、重復性好， 可作為八爪金龍根藥材質量檢測的方法。

關鍵詞：八爪金龍（Ardisia crispa（Thunb.）DC.）；巖白菜素；揮發油；HPLC/MS；GC/MS

中圖分類號：R284.1 文獻標識碼： A 文章編號：0439-8114（2013）19-4723-03

八爪金龍（Ardisia crispa（Thunb.）DC.）為金牛科紫金牛屬植物，以根及葉入藥，夏、秋采集，別名朱砂根、百兩金、八爪龍、八爪根、鐵雨傘、高八爪、開喉箭[1-3]。根木質，細長柱狀，有分枝，淡紫棕色，斷面淡紅色，有褐色小點，具有清咽利喉、散瘀消腫等功效[2-3]。主要用于治療咽喉腫痛、跌打損傷、風濕骨痛[4-5]。初步研究表明，八爪金龍中含有三萜皂苷、香豆素類、揮發油、酚類、醌類、強心苷、氨基酸、糖類等多種化合物[5-8]。以上有效成分除能夠止咳平喘、抗炎抗菌外，還具有抗腫瘤活性、抗生育、抑制血小板凝聚、降低血壓、收縮子宮、抑制cAMP磷酸二酯酶等多方面作用，因此八爪金龍具有多種生理活性，對于治療多種疾病具有良好的開發利用價值[9，10]。但目前主要集中于異香豆素中巖白菜素的研究，且不同產地的測定方法也不盡相同。

本研究采用水蒸氣蒸餾法提取苗藥八爪金龍的揮發油成分，索氏提取法提取巖白菜素，利用GC/MS法對揮發油成分進行分離鑒定，HPLC/MS法對巖白菜素進行含量測定，以期為八爪金龍的質量控制及二次開發利用提供理論依據。

1 材料與方法

采用水蒸氣蒸餾法，取100 g八爪金龍根粉末，浸泡1 h，用揮發油提取器進行提取，提取完畢后收集揮發油并稱重。揮發油為淡黃色，具有特殊香味，平均收率為0.20 mL/100 g。

1.4 巖白菜素溶液的制備及測定

準確稱取八爪金龍根粗粉0.5 g，加入無水乙醇-氨水（V/V，3∶2）1 mL，放置0.5 h后加入25 mL氯仿，用索氏提取器提取，約70 ℃回流提取2 h，冷卻，濾過，揮干溶劑，殘渣用甲醇適量溶解，用0.45 μm微孔濾膜過濾至10 mL 量瓶，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。提取液定容至50 mL，經0.45 μm微孔濾膜過濾，在“1.2.3”的條件下分析巖白菜素含量。

準確稱取巖白菜素對照品20 mg（標準品巖白菜素），用甲醇稀釋至25 mL，取此溶液1 mL稀釋定容至50 mL，終濃度為0.016 mg/mL，搖勻備用。

1.5 標準曲線的繪制

準確吸取適量儲備液于l、2、3、4、5號50 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，分別進樣，采用高效液相色譜法測定。以峰面積（Y）為縱坐標，巖白菜素的進樣量（X）為橫坐標繪制標準工作曲線。

2 結果與分析

2.1 試驗方法驗證

準確吸取5號容量瓶中八爪金龍根供試溶液10 μL，分別進樣6次，測得巖白菜素含量平均為0.582%，RSD=0.18%，表明該試驗方法精密度良好。

取1號容量瓶中樣品2～5 mL共 6 份，制備成供試溶液，分別進樣。測得各色譜峰的相對保留時間和相對峰面積，RSD<5%。表明其重復性較好。

取1號容量瓶中樣品2～5 mL制備成供試溶液，分別在12 h內不同時間段進樣，檢測指紋圖譜，測得各色譜峰的相對保留時間和相對峰面積，RSD均小于3%。表明供試溶液在12 h內穩定。

準確稱取已測定含量的八爪金龍根粉末樣品5份，每份0.5 g，分別準確加入適量巖白菜素對照品溶液，按“1.4”制備供試溶液，在“1.2.3”條件下進行分析，計算回收率。巖白菜素的平均回收率為97.66%，RSD=2.31%（n=5），表明回收率較好。

2.2 液相色譜線性關系

采用高效液相色譜法測定八爪金龍中巖白菜素的含量（圖1）。以峰面積（Y）為縱坐標，巖白菜素的進樣量（X）為橫坐標繪制標準工作曲線。所到標準曲線為一過原點的直線。回歸方程為Y=-511 494

+41 181.1X，巖白菜素含量在30.300～912.000 ng/mL范圍內與峰面積具有良好的線性關系（r=0.999 1）。

2.3 八爪金龍化學成分分析

采用GC-MS聯用技術，對八爪金龍中的揮發油進行分離，分離得到33個峰，氣相色譜圖見圖2。大部分分離度較高的色譜峰可通過質譜工作站檢索質譜庫進行結構確定。與標準圖譜比較確定八爪金龍的化學成分，鑒定出八爪金龍中的27個化學成分（表1）。采用液相色譜法對八爪金龍中巖白菜素的含量進行測定，根據線性回歸方程計算出巖白菜素平均含量為1.27%。

3 小結

參考文獻：

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