HPLC法測定“柴芩”注射液中柴胡皂苷A和黃芩苷的含量

摘要：分別建立了測定“柴芩”注射液中柴胡皂苷A和黃芩苷含量的高效液相色譜方法。

關鍵詞：“柴芩”注射液；柴胡皂苷A；黃芩苷；HPLC

中圖分類號：R284.1；O657.7+2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）19-4776-03

“柴芩”注射液是四川農業大學動物醫學院自主研制的純中藥注射劑，由小柴胡湯中的核心藥對柴胡和黃芩兩味中藥配伍而成。本制劑能“清透半表之邪和清瀉半里之熱”，具有和解表里、疏肝解郁、扶正祛邪之功效，臨床可用于急性熱性病的進行期，以及伴有發熱病的一般性胃病、胃腸障礙等癥[1-3]。為了建立該制劑的質量標準，有效地評價其內在質量，本試驗根據“柴芩”注射液的提取工藝、臨床功效和有效成分[4，5]，采用高效液相色譜（HPLC）法定量檢測了柴胡皂苷A和黃芩苷的含量，為有效控制其質量提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器

黃芩苷對照品（中國生物制品檢定所，批號：110715-20815）；柴胡皂苷A對照品（中國生物制品檢定所，批號：110777-200406）；甲醇、磷酸（色譜純）均購于科密歐化學試劑廠；“柴芩”注射液（20091228-20091230）由四川農業大學動物醫學院藥學實驗室制備。

1.3 對照品溶液的配制

1.4 液相色譜條件

1.5 樣品處理

1.5.1 柴胡皂苷A供試品的制備 分別量取3批“柴芩”注射液（091228-091230）以0.45 μm微孔濾膜過濾，即得柴胡皂苷A供試品；并按處方制備不含柴胡的陰性對照品，按照柴胡皂苷A供試品溶液的制備方法制成不含柴胡皂苷A的陰性樣品。

1.5.2 黃芩苷供試品的制備 分別量取3批“柴芩”注射液（091228-091230）各1 mL于5個100 mL容量瓶中，用流動相稀釋至刻度，混合均勻，0.45 μm濾膜過濾，取續濾液作為黃芩苷供試品溶液；并按處方制備不含黃芩的陰性對照品，按照黃芩苷供試品溶液的制備方法制成不含黃芩苷的陰性樣品。

1.6 標準曲線的繪制

1.6.1 柴胡皂苷A標準曲線的繪制 分別吸取柴胡皂苷A對照品溶液2、4、6、8、10、12 μL進樣，HPLC檢測。每個濃度設3次重復，以柴胡皂苷A對照品含量（x）為橫坐標，以峰面積（y）為縱坐標，繪制標準曲線。

1.6.2 黃芩苷標準曲線的繪制 分別取吸取黃芩苷對照品溶液1、2、4、6、8、10 μL進樣，HPLC檢測。每個濃度設3次重復，以黃芩苷對照品含量（x）為橫坐標，峰面積（y）為縱坐標，繪制標準曲線。

2 結果與分析

2.1 方法的選擇性

分別吸取柴胡皂苷A對照品、“柴芩”注射液和不含柴胡皂苷A陰性樣品溶液各10 μL進行分析。在柴胡皂苷A檢測色譜條件下，柴胡皂苷A的保留時間為8.342 min，供試品保留時間與對照品保留時間一致，陰性樣品中沒有發現干擾測定“柴芩”注射液中柴胡皂苷A的成分，結果見圖1、圖2和圖3。再分別吸取黃芩苷對照品溶液、“柴芩”注射液和不含黃芩苷陰性樣品溶液各10 μL進行測定，在黃芩苷檢測色譜條件下，黃芩苷的保留時間為9.725 min，供試品保留時間與對照品保留時間一致，陰性樣品在對照品色譜峰相應位置上無吸收峰，表明對測定無干擾，結果見圖4、圖5和圖6。

2.2 標準曲線

2.3 精密度試驗

2.4 穩定性試驗

吸取柴胡皂苷A和黃芩苷供試品溶液各10 μL，分別在0、2、4、6、8 h進樣，測得柴胡皂苷A峰面積RSD為1.81%、黃芩苷峰面積RSD為1.82%。結果表明供試樣品在制備后8 h內穩定。

2.5 重復性試驗

2.6 加樣回收率試驗

2.6.1 柴胡皂苷A的加樣回收率 吸取1 mL柴胡皂苷A對照品溶液（0.48 mg/mL），60℃下烘干，殘渣分別加入10 mL已知含量的樣品溶液（091228）中，0.45 μm微孔濾膜過濾后進樣10 μL。HPLC檢測，連續6次，測定柴胡皂苷A的峰面積。結果顯示柴胡皂苷A的平均回收率為102.60%，RSD為0.95%。

2.6.2 黃芩苷的加樣回收率 吸取2.5 mL黃芩苷對照品溶液（0.46 mg/mL），60 ℃烘干，殘渣分別加入5 mL已知含量樣品溶液（091228）中，超聲溶解后再吸取1 mL加入100 mL容量瓶中，加50%甲醇至刻度，0.45 μm微孔濾膜過濾后進樣10 μL。HPLC檢測，連續6次，測定黃芩苷的峰面積。結果顯示黃芩苷平均回收率為100.55%，RSD為1.69%。

2.7 樣品含量測定

取3批注射液（091228-091230）按“1.5”項下方法制備供試品，每批平行制備3次。吸取對照品和供試品溶液各10 μL，按上述兩個色譜條件分別進行測定，并計算各樣品中的柴胡皂苷A、黃芩苷的含量。結果見表1。

3 小結與討論

中藥注射劑是在中藥制劑的基礎上結合現代制劑技術發展起來的新制劑，在醫療實踐中發揮著重要的作用，被認為是中國未來開拓國際醫藥市場的優勢項目[8]。由于中藥注射液成分的復雜性，使得對其質量控制難度較大。為了保證臨床用藥的安全性和有效性，中藥注射劑在確定成分含量的藥味時，要以中醫藥理論為指導，根據藥方功能，選擇多指標、多成分制定測定項目，采用科學的方法建立有效成分的含量測定方法，并制定出合理的限度指標[9]。但就《衛生部藥品標準》中藥成方制劑中收載的注射液含量測定方法存在不完善、可控指標少甚至根本沒有含量的測定的問題[10]。

高效液相色譜法已廣泛地應用于中藥注射劑的質量評價當中，通過指紋圖譜的含量或比例，能有效控制樣品的質量，確保中藥注射劑工藝的科學性和質量相對穩定[11]。“柴芩”注射劑由柴胡和黃芩兩味中藥組成，因此選擇其藥效成分柴胡皂苷A和黃芩苷共同作為其質量控制指標，進行HPLC定量檢測。由于兩種成分吸收波長不同，且在注射劑中含量差異大，柴胡皂苷A則直接以原液進樣，而黃芩苷需在稀釋100倍后進樣，故將二者分別檢測。本試驗結果表明采用HPLC法測定“柴芩”注射液中柴胡皂苷A和黃芩苷的含量，方法可行、靈敏度高、重現性好、結果可靠，可有效用于該制劑的質量控制。

參考文獻：

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