通關藤中總酚酸的提取工藝

摘要：采用正交試驗設計法，以綠原酸為對照，分析物液比、提取溫度、提取時間、乙醇體積分數4個因子對通關藤（Marsdenia tenacissima）中總酚酸提取率的影響。結果表明，影響提取率的主次因素為乙醇體積分數、提取時間、料液比、提取溫度，最佳提取條件為乙醇體積分數70%，提取時間1.0 h，料液比1∶16（m/V，g∶mL），提取溫度50 ℃。

關鍵詞：通關藤（Marsdenia tenacissima）；總酚酸；提取工藝

中圖分類號：R284.2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）20-5021-02

Technology of Extracting Total Phenolic Acid from Marsdenia tenacissima

MENG Heng-ling1，YANG Sheng-chao2，SU Yi-lan1，WEN Guo-song2

（1.The key laboratory of high quality crops cultivation and safety control，Honghe university， Honghe，661100，Yunnan，China；

2.Yunnan Agricultural University / Yunnan Provincial Good Agricultural Practice Center of Chinese Medical Materials，Kunming 650201，China）

Abstract： The orthogonal design was used to analysis optimize extraction process of total phenolic acid from Marsdenia tenacissima. Four factors including the material ratio， extracting time， extraction temperature and mass fraction of ethanol were sudied using chlorogenic acid as control. The results showed that the order of the four factors affecting extraction efficiency was as follows： mass fraction of ethanol > extraction time > material liquid ratio >extraction temperature. The optimal extraction process of chlorogenic acid was mass fraction of ethanol 70%， extracting time 1 h， material liquid ratio 1∶16， extraction temperature 50 ℃.

Key words： Marsdenia tenacissima； total phenolic acid； extraction process

通關藤（Marsdenia tenacissima）為蘿摩科牛奶菜屬植物，別名烏骨藤、大苦藤、扁藤、下奶藤等。主要分布于我國云南、廣西、貴州、四川等地及越南、老撾、緬甸等東南亞國家，具有清熱解毒、祛痰平喘、散結止痛的作用，用于氣管炎、支氣管哮喘等病的治療[1]。曾收載于《云南省藥品標準》和《中國藥典》，具有免疫調節、保肝利尿、敗毒抗癌等作用，對胃癌、肝癌等多種腫瘤具有確切的抗腫瘤療效[2，3]。通關藤是一種重要的中藥材，以通關藤為單味藥制成注射液、糖漿、口服液、片劑、膠囊等多種劑型，含有甾體酯苷、生物堿、有機酸、多糖、樹脂及色素等多種化學成分[4]。通關藤中綠原酸含量較高，為有效成分之一[5]， 綠原酸有抗誘變、抗菌、抗病毒等作用，而多酚類物質具有殺死癌細胞，使人肝癌細胞、胃癌細胞和肺癌細胞向正常細胞逆轉的作用[6]。對綠原酸的提取方法進行研究，可為制藥企業提供參考依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 儀器 粉碎機（美的）、HH-4型數字恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）、鼓風干燥箱（DHG-9070A型，上海一恒科學儀器有限公司）、電子分析天平（BSA224S型，賽多利斯科學儀器有限公司）、紫外分光光度計（722S，上海箐華科技儀器有限公司）。

1.1.2 試劑 無水乙醇（天津市大茂化學試劑廠），綠原酸標準品（中國藥品生物制品檢定所，批號110863-200905）；野生通關藤（紅河州金平縣）。

1.2 試驗方法

1.2.1 標準溶液的制備 精確稱取10 mg綠原酸標準品放入棕色錐形瓶內，量取100 mL 70%乙醇倒入錐形瓶內，搖勻，制成0.1 mg/mL的綠原酸標準溶液，備用。

1.2.2 標準曲線的繪制 取潔凈的10 mL容量瓶6個，分別精確量取綠原酸標準溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL于6個容量瓶中，并用70%乙醇定容至刻度；以70%乙醇做空白對照，在327 nm最適吸收波長下測定吸光度，以標準溶液濃度為橫坐標，以吸光度為縱坐標，繪制標準曲線，得到回歸方程■=39.537 x-0.016 4，相關系數r=0.995 5，相關性較好。

1.2.3 供試溶液的制備 分別稱取通關藤粉末5 g，放入具塞的錐形瓶內，按1∶15、1∶16、1∶17（m/V，g∶mL，下同）料液比的配制條件加入相應質量分數的乙醇配制成供試液，并在相應條件下進行提取，提取液過濾后用相應乙醇質量分數的乙醇定容至100 mL，保存備用。

2 結果與分析

2.1 正交試驗結果

將乙醇體積分數、提取時間、料液比、提取溫度4個影響通關藤中總酚酸提取效率的因素按四因素三水平進行正交試驗（表1，表2），結果表明，各因素對通關藤中總酚酸提取效率影響的大小依次是乙醇體積分數、提取時間、料液比、提取溫度；最佳提取條件為A2B2C1D2，即料液比1∶16，提取溫度50 ℃、提取時間1.0 h，乙醇體積分數70%。

2.2 精密度試驗結果

取同一份標準樣品溶液，重復檢測3次，分別測綠原酸的吸光度，結果表明，CV為0.19%，該方法精密度較好。

2.3 穩定性試驗結果

取同一樣品，制備供試品溶液，分別放置2、4、6、18、30、32、34、36、38、40 h后，取1 mL供試液用70%的乙醇定容到50 mL然后測定其吸光度，每個樣品測定3次重復。結果表明，總酚酸提取液在34 h時穩定性良好，CV為0.42%；36 h和38 h時，CV分別為6.6%和10.5%。

2.4 重復性試驗結果

分別吸取1 mL提取液，置于6個50 mL容量瓶中，用70%乙醇定容，測定其吸光度，每個樣品3次重復。結果表明，CV為1.85%，該試驗的重復性良好。

2.5 加樣回收率試驗結果

分別吸取1 mL最適條件下的總酚酸提取液于5個50 mL的容量瓶中，分別加入標準溶液1、2、3、4、5 mL，再加入70%乙醇定容，搖勻，計算其平均回收率。結果表明，平均回收率為100.72%（n=5），CV為2.49%。

3 結論與討論

總酚酸提取液在34 h內穩定性最好，影響通關藤中總酚酸提取率因素主次順序為：乙醇體積分數、提取時間、料液比、提取溫度，即料液比為1∶16、提取溫度為50 ℃、提取時間為1.0 h、乙醇體積分數為70%。

綠原酸是由咖啡酸與奎尼酸形成的酯，其分子結構中有酯鍵、不飽和雙鍵及多元酚3個不穩定部分。在從植物提取過程中，往往通過水解和分子內酯基遷移而發生異構化，由于綠原酸本身的不穩定性，提取時不能高溫、強光及長時間加熱。綠原酸的供試液應避光、低溫保存時最為穩定。本研究結果與向昌國等[7]對甘薯葉、莖中綠原酸提取研究所得到的最佳提取條件為50%乙醇或甲醇、浸提時間1.0～1.5 h、溫度40 ℃的結果基本一致。

綠原酸是有效的酚型抗氧化劑，其抗氧化活性強于咖啡酸、對羥基苯甲酸、阿魏酸、香豆酸等酚類物質，具有降壓及抗腫瘤作用[8]。本研究在最適條件下提取的總酚酸含量為16.15 mg/g，提取率為1.62%，與徐佳佳等[9]對通關藤的研究結果一致，高于從福菊（2.93 mg/g）、杭菊（3.15 mg/g）[10]和北五加皮（0.63%）中提取的綠原酸的含量[11]。

參考文獻：

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[7] 向昌國，李文芳，聶 琴，等.甘薯莖葉中綠原酸提取方法的研究及含量測定[J].食品科學，2007，28（1）：126-130.

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[10] 肖文平，毛 威.紫外-可見分光光度法測定福菊和杭菊中總黃酮及綠原酸含量[J].湖北農業科學，2011，50（6）：1278-1280.

[11] 關穎麗，楊榮艷，謝文新，等.UV法測定北五加皮的不同時間水提物中綠原酸的含量[J].北方園藝，2011（14）：177-178.