TDZ對微型月季不定芽生長的影響

摘要：以微型月季（Rosa chinensis minima）單芽莖段為外植體，考察不同濃度噻重氮苯基脲（TDZ）對不定芽生長的影響。結果表明，低濃度的TDZ可以促進月季不定芽的生長，但TDZ濃度過高會導致月季不定芽呈現矮化現象，節間縮短，培養基中添加0.6 mg/L TDZ時月季不定芽的高度最大。

關鍵詞：微型月季（Rosa chinensis minima）；噻重氮苯基脲（TDZ）；不定芽

中圖分類號：S685.12；S339.4+1 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）13-3178-02

微型月季（Rosa chinensis minima）系薔薇科薔薇屬常綠灌木。其植株小巧玲瓏，花期不斷，是一種流行的微型花卉種質資源[1]。隨著其市場需求的不斷擴大，對其組織培養技術進行研究和改進已成為熱點[2]。噻重氮苯基脲（Thidiazuron，TDZ）是苯基脲衍生物的一種，作為一種有效的生長調節劑被應用于多種植物的細胞和組織培養中[3，4]。許多研究表明TDZ可以誘導腋芽萌發[5]及愈傷組織形成[6]、直接誘導葉片不定芽的形成[7]、延遲葉片黃化[8]及鮮花凋亡[9]、延緩馬鈴薯早疫病[10]、提高遺傳轉化效率[11]。本研究采用含不同濃度TDZ的培養基誘導微型月季不定芽，探究在微型月季不定芽生長過程中TDZ濃度對其不定芽高度和節間長度的影響，為微型月季組織培養技術的優化提供參考。

1 材料與方法

1.1 植物材料

吉林師范大學植物分子生物學實驗室培育的微型月季盆栽，株高約35 cm，花色粉紅。

1.2 外植體消毒

剪取微型月季當年生健壯枝條，以軟毛刷清除其表面灰塵，置于盛有清水的燒杯中，加少量洗潔精浸泡10 min，期間不斷搖動燒杯，流水沖洗1 h，Cl2滅菌（1 mL濃HCl與25 mL NaClO反應生成）20 min。超凈工作臺中無菌蒸餾水浸泡清洗3次，無菌濾紙吸干。

1.3 不定芽的誘導

剪取長1.5 cm左右的單芽莖段，形態學下端接種于誘導培養基中，誘導培養基以MS為基本培養基，含蔗糖30 g/L、瓊脂7 g/L，pH 5.83～5.85，121 ℃高壓滅菌20 min。添加不同濃度的TDZ、6-BA和NAA，培養基中具體激素濃度組合見表1。每處理均設3次重復，接種后培養條件為25 ℃、光照度2 000 lx、光照時間16 h/d，30 d后觀察不定芽的誘導情況，測量不定芽高度及節間長度，利用SAS 8.0軟件進行統計分析。

1.4 生根培養

將生長狀況良好的不定芽轉入生根培養基（MS+0.3 g/L活性炭）中，30 d后觀察并統計生根率。

2 結果與分析

2.1 激素濃度組合對微型月季不定芽誘導的影響

微型月季單芽莖段接種于誘導培養基30 d后，7種培養基中均誘導出不定芽，但不定芽高度及節間長度均存在明顯差異（表1，圖1）。由表1和圖1可以看出，培養基中TDZ濃度由0.2 mg/L升高到0.6 mg/L，不定芽高度和節間長度均有所增加，而TDZ濃度由0.6 mg/L升高到2.0 mg/L，不定芽高度和節間長度又逐漸下降，出現矮化現象。各處理中培養基2（0.6 mg/L TDZ）的不定芽高度最大（圖1B），1.0 mg/L TDZ與0.1 mg/L NAA配合施用（培養基6）可以有效緩解TDZ濃度過高引起的矮化現象（圖1E），而2.0 mg/L 6-BA單獨施用時（圖1F）不定芽高度和節間長度與培養基2（0.6 mg/L TDZ）及培養基6（1.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA）沒有顯著差異（P>0.05）。

2.2 生根培養

微型月季不定芽轉入生根培養基30 d后試管苗生根率為90.48%。

3 小結與討論

在微型月季莖段離體再生體系中，較低濃度的TDZ可促進不定芽長高，但TDZ濃度過高會導致不定芽節間明顯縮短，出現矮化現象，這與Debnath對越橘的研究結果類似[12]。在1.0 mg/L TDZ的基礎上添加0.1 mg/L NAA也能起到促進節間伸長的效果，說明TDZ與NAA在微型月季不定芽生長的過程中可能起拮抗作用。不定芽在含2.0 mg/L 6-BA的培養基中生長狀況也較好，不定芽高度和節間長度與含0.6 mg/L TDZ的培養基中相似，但不定芽長勢較差，可見TDZ對不定芽生長的促進效果優于6-BA。這與之前的研究結果一致[13-16]，可見TDZ具有更強的細胞分裂活性。

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