小容量注射劑臭氧滅菌效果及周期驗證研究

摘要：滅菌效果及滅菌周期的驗證對于小容量注射劑的滅菌生產具有十分重要的意義，它是小容量之際生產安全的重要保障。本文首先對小容量注射劑臭氧滅菌的基本概念，以及滅菌的目的進行了明確，在此基礎上對臭氧滅菌的具體實施進行了討論。文章最后提出，盡管整個滅菌方法及目的非常明確，但是很多細節的工作必須進行嚴格把握，才能保證滅菌對于整個小容量之際生產的意義。

關鍵詞：小容量注射劑，臭氧滅菌，滅菌效果，滅菌周期

中圖分類號：R953 文獻標識碼：A 文章編號：1005-0515（2013）8-028-01

1 引言

滅菌是小容量注射劑生產過程中的重要環節，對于保證小容量注射劑的生產質量具有十分重要的意義。小容量注射劑滅菌方法有很多種，當前最為常用的是臭氧滅菌方法。在實際生產過程中，要保證臭氧滅菌的質量，需要對滅菌效果以及滅菌周期進行嚴格驗證，從而保證將注射劑中的微生物含量控制在一定的范圍內。當前很多企業在小容量注射劑臭氧滅菌環節中存在一些問題，這些問題對于小容量注射劑的生產質量產生一定的影響，因此，本文將針對這一生產環節進行詳細分析，為實際的小容量注射劑生產提供一定的參考。

2 小容量注射劑臭氧滅菌方法及滅菌驗證目的

從滅菌方式上劃分，臭氧滅菌屬于化學滅菌方法。它是利用臭氧的基本的物理化學性質，破壞微生物的基本組織結構，從而達到滅菌的效果。具體而言，臭氧具有較強的氧化能力，這一點在其它行業中已經被廣泛的認識，同時，在常溫以及常壓下臭氧的基本結構并不穩定，可以分解為氧（O2）和單個氧原子（O），而后者具有很強的活性，對于細菌等微生物具有極強的氧化作用。在實際的滅菌生產中，主要利用O的這種特性，將細菌內部氧化葡萄糖所必須的酶，從而破壞細菌的細胞膜，將其殺死。多余的氧原子則會自行重新結合成為氧分子（O2），不存在任何有毒殘留物，為無污染消毒劑，因此，不會對小容量注射劑生產產生任何的污染。

在工業生產中，臭氧滅菌的驗證目的非常明確，主要包含兩個方面的內容。第一，測試滅菌室內臭氧的濃度，在此基礎上驗證規定的時間內小容量注射劑車間潔凈區各潔凈間內臭氧濃度是否達到標準規定；第二，通過微生物挑戰性試驗，確定在一定時間內臭氧對小容量注射劑車間潔凈室的滅菌效果，并按規定周期（每日）進行沉降菌和表面污染試驗測定，確定消毒周期。通過這兩個方面內容的驗證，確定了室內濃度要求以及滅菌周期，而這兩個方面恰恰是滅菌工業生產過程中最為直接、重要的生產要素。

3 小容量注射劑臭氧滅菌效果及周期的驗證內容

在實際的工業生產過程中，滅菌效果及滅菌周期的驗證過程較為復雜，它需要首先規劃驗證項目，并且按照要求設立標準，在此基礎上進行一系列的滅菌實驗。

3.1 驗證項目及標準設立

小容量注射劑的種類有很多，但是，其滅菌驗證項目以及其標準的設立基本相同。一般而言，滅菌效果以及周期的驗證項目主要包括臭氧濃度、微生物挑戰、沉降菌數量以及表面污染性等四個項目，具體內容如表1所示。

從表中的接受標準可以看出，不同潔凈區域對于沉降菌的數量及濃度要求不同，因此，在實際工業生產中，應當首先劃分好潔凈區域，在此基礎上進行一定的項目驗證。

3.2 具體內容的驗證

在確定了具體的驗證項目以及可接受標準之后，就可以按照實際的驗證方法開展工作。由于沉降菌以及表面污染試驗具有明確的操作規程，因此，不在贅述，下文主要對臭氧濃度的驗證以及微生物挑戰試驗兩個方面進行討論。

（1）臭氧濃度的驗證

臭氧濃度的驗證是整個驗證過程的前提和基礎，也是其他項目驗證可靠性的保障。其整個驗證過程可以分為三個步驟。首先，對生產車間內各個潔凈區按照規定滅菌之后，在遠離送風口處測定臭氧濃度；其次，在錐形瓶中依次加入100ml純化水、20ml20%KI溶液、250ml純化水。利用采樣器采取2L左右的臭氧化氣，并且與混合容易進行充分均勻；最后，在混合液中加入5ml密度為1.000mol/L的H2SO4溶液，混勻后放置10min后加0.5%淀粉指示液1ml，混勻。待反應至淺黃色時，用硫代硫酸鈉滴定液（0.0010mol/L）滴定至無色。

那么利用臭氧滅菌的基本原理，整個滅菌區的臭氧濃度可以計算為：

H=（M×V×48×1000×1000）/（2×2×1000×1.963）

其中，M表示Na2S2O3克分子濃度；V為Na2S2O3消耗的體積，ML。

（2）微生物挑戰試驗

微生物挑戰性試驗，是確定滅菌周期的重要依據，在實際的工業生產中，整個驗證過程主要分為四個步驟。第一，在平皿蓋上用油性筆記錄滅菌日期及位置，按潔凈室環境微生物監測確定的位置和數量要求，在指定位置放置要求數量的生物指示劑。按本車間滅菌工藝要求同時滅菌；第二，在滅菌結束后回收生物指示劑，并在2小時內將載體投入胰酪胨大豆肉湯培養基中，進行無菌培養試驗；第三，裝有生物指示劑的培養管在35±2℃的溫度下培養3天，逐日觀察細菌是否被殺滅，若沒有細菌生長，即培養液澄清、顏色不變為陰性，則為滅菌合格；若培養液變渾濁，則判為陽性，滅菌不合格；第四，微生物挑戰性試驗的同時作陽性對照和陰性對照，監測結果只有在陽性對照的生物指示劑有菌生長、陰性對照無菌生長的情況下才有效。

4 結語

通過文章的分析可以看出，小容量注射劑臭氧滅菌方法是一種操作方便，并且目標明確的滅菌方式。但是，在整個操作過程中，很多細節問題必須注意，例如所添加的溶液濃度及體積，細菌培養時間等，對于整體驗證的可靠性影響較大，因此，在實際的生產過程中必須特別注意。

參考文獻：

[1] 沈如前. 臭氧消毒滅菌在制藥工業企業中的應用[J]. 中國藥業，2004，7

[2] 代淑艷， 張可畏， 王慧明， 等. 臭氧氣體與臭氧水滅菌效果分析[J]. 中國生物制品學雜志，2004，5

[3] 淳于興華，溫立坤，李珂，等. 臭氧滅菌技術在藥廠10萬級潔凈區的應用研究[J]. 中國藥事，2009，9