藏藥前列寧膠囊質量標準的研究

【摘要】目的：研究并提高藏藥前列寧膠囊的質量標準。方法：采用薄層色譜法鑒別紅花、訶子、菥蓂子、藏茜草；采用高效液相色譜法同時測定沒食子酸和羥基紅花黃色素A。結果：薄層色譜顯色清晰，陰性對照無干擾。沒食子酸在33.76~337.6 μg/ml濃度范圍內線性關系良好，r=0.9996，平均加樣回收率為98.35%，RSD為1.36%。羥基紅花黃色素A在2.68~26.80 μg/ml濃度范圍內線性關系良好，r=0.9998，平均加樣回收率為99.03%，RSD為0.72%。結論：該方法簡便、可行、可靠，可用于控制前列寧膠囊的質量。

【關鍵詞】前列寧膠囊；紅花；訶子；菥蓂子；藏茜草；沒食子酸；羥基紅花黃色素A

Study on Quality Standard for Tibetan Medicine of Qianliening Capsule/Ma Hong-wei，SHAO Cheng-lei，WEI Yong-yi，et al.//Medical Innovation of China，2013，10（20）：129-132

【Abstract】Objective：To study and upgrade the quality standard of Tibetan Medicine Qianliening Capsule.Method：TLC method was used to identify Flos Carthami，Terminalia Chebula，Semen Thlaspi and Radix et Rhizoma Rubiae；Hplc was used for the determination of Gallic acid and Hydroxy Safflor yellow A.Result：Flos Carthami，Terminalia Chebula，Semen Thlaspi and Radix et Rhizoma Rubiae could be identified by TLC without the interference of negative control.Gallic acid and Hydroxy Safflor yellow A could be determined at the same time.Gallic acid was linear in the concentration range of 33.76-337.6μg/mL，r=0.9996.The average recovery rate was 98.35%，RSD=1.36%；Hydroxy Safflor yellow A had a good linear in the concentration range of 2.68-26.80 μg/ml，r=0.9998.The average recovery rate was 99.03%，RSD=0.72%.Conclusion：The method is simple，feasible，reliable，and can be effectively used for the quality control of Qianliening Capsule.

【Key words】Qianliening Capsule；Flos Carthami；Terminalia Chebula；Semen Thlaspi；Radix et Rhizoma Rubiae；Gallic acid；Hydroxy Safflor yellow A

First-author’s address：Shandong Arura Pharmaceutical Research Development.CO.，LTD.，Ji’nan 250101，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2013.20.064

藏藥前列寧膠囊為金訶藏藥股份有限公司獨家產品，由菥蓂子、訶子、蒲公英、紅花、菥蓂子等13味藥材組成。主要功能清熱解毒，化瘀通淋，用于熱毒瘀阻所引起的尿頻，尿急，尿痛屬中醫淋證者。現行前列寧膠囊標準只有紫草茸和蒲公英兩味藥材的薄層色譜鑒別和沒食子酸的含量測定[1]，標準有待提高。為更好的控制其內在質量，參考中國藥典[2]及相關文獻，經反復試驗，建立了紅花[3-5]、訶子[6-7]、菥蓂子[8]、藏茜草[9-11]的薄層色譜鑒別方法，并實現了同一色譜條件下，通過變化檢測波長，同時檢測沒食子酸[12-13]和羥基紅花黃色素A[14-15]的含量。所建立的方法簡便、可行、專屬性強，可用于該制劑質量標準的提高。

1儀器與試劑

1.1儀器KQ5200B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），ZF-2型三用紫外儀（上海市安亭電子儀器廠），L-2100型日立高效液相色譜儀（日立公司），島津AUW-220D型電子天平。

1.2對照品與對照藥材訶子對照藥材（批號：121015-201004，供鑒別用）、紅花對照藥材（批號：120907-200911，供鑒別用）、沒食子酸對照品（批號：110831-200803，供含量測定用）、羥基紅花黃色素A對照品（批號：111637-200905，供含量測定用），均購自中國食品藥品檢定研究院。菥蓂子對照藥材與藏茜草對照藥材由金訶藏藥股份有限公司提供。

1.3試劑硅膠G薄層板（青島海洋化工），乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。前列寧膠囊由金訶藏藥股份有限公司提供，批號為：20110216、20110217、20110218。

2薄層色譜鑒別

2.1紅花的鑒別取本品內容物5 g，加丙酮-甲醇（4：1）混合溶液30 ml，密塞，振搖15 min，靜置，取上清液，作為供試品溶液。另取紅花對照藥材1 g，同法制備對照藥材溶液。去除處方中紅花，將處方中其他藥材按比例制成膠囊劑，再按照供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述三種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲酸-水-甲醇（7：2：3：0.4）為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。見圖1。

2.2訶子的鑒別取本品內容物5 g，加無水乙醇25 ml，超聲處理30 min，加硅藻土2 g，混勻，濾過，濾液濃縮至2 ml，作為供試品溶液。另取訶子對照藥材1 g，同法制備對照藥材溶液。去除處方中的訶子，將處方中其他藥材按比例制成膠囊劑，再按照供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述三種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇（6：4：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%的三氯化鐵乙醇溶液，熱風吹至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。見圖2。

2.3菥蓂子的鑒別取紅花鑒別項下的供試品溶液，作為供試品溶液。另取菥蓂子對照藥材1 g，加丙酮-甲醇（4：1）混合溶液30 ml，密塞，振搖15 min，靜置，取上清液作為對照藥材溶液。去除處方中的菥蓂子，將處方中其他藥材按比例制成膠囊劑，再按照供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述三種溶液各5 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水（4：1：5）10℃以下放置的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的熒光斑點。見圖3。

2.4藏茜草的鑒別取本品內容物5 g，加甲醇30 ml，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至1 ml，作為供試品溶液。另取藏茜草對照藥材1 g，同法制備對照藥材溶液。去除處方中的藏茜草，將處方中其他藥材按比例制成膠囊劑，再按照供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B）試驗，吸取上述三種溶液各10 μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60~90℃）-丙酮（4：1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同的熒光斑點。見圖4。

3含量測定

3.1色譜條件色譜柱為Waters C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為乙腈-1%冰醋酸溶液，流動相濃度梯度見表1，流速為1.0 ml/min，沒食子酸檢測波長為275 nm，羥基紅花黃色素A檢測波長為403 nm，檢測波長變化表見表2，柱溫為室溫。

表1流動相濃度梯度表

時間（min）乙腈（%）1%冰醋酸溶液（%）

0~20199

20~251~2499~76

25~502476

50~5524~10076~0

55~60100~10~99

表2 檢測波長變化表

時間（min）0~20202121~60

檢測波長（nm）275403檢測器平衡403

3.2對照品溶液的制備取沒食子酸對照品、羥基紅花黃色素A對照品各適量，分別精密稱定，加50%的乙醇制成每1 ml含沒食子酸0.2 mg，含羥基紅花黃色素A10 μg的混合溶液，即得。

3.3供試品溶液的制備取藏藥前列寧膠囊內容物約3 g，研細，過三號篩，精密稱定，置50 ml量瓶中，加入50%乙醇40 ml，密塞，超聲處理30 min，放冷，用50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

3.4系統適用性試驗分別吸取供試品、對照品及陰性對照溶液各10 μl，注入液相色譜儀，在3.1色譜條件下測定，理論板數按沒食子酸峰計算不低于2000，兩種成分相互間及與其他組分的分離度均>1.5，且陰性對照無干擾，見圖5。

3.5線性關系考察精密量取沒食子酸對照品貯備液（337.6 μg/ml）及羥基紅花黃色素A對照品貯備液（26.8 μg/ml）1 ml、3 ml、5 ml、8 ml、10 ml，分別置10 ml量瓶中，分別用50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，各精密進樣10 μl，以峰面積（Y）為縱坐標，對照品溶液濃度（X）為橫坐標，進行線性回歸，得沒食子酸回歸方程為Y=15682X-16290，r=0.9996，沒食子酸在33.76~337.6 μg/ml范圍內有良好的線性關系，羥基紅花黃色素A回歸方程為Y=11344X-3478.5，r=0.9998，羥基紅花黃色素A在2.68~26.80 μg/ml范圍內有良好的線性關系。

3.6精密度試驗精密吸取沒食子酸、羥基紅花黃色素A混合對照品溶液10 μl，注入液相色譜儀，連續進樣6次，測定色譜面積并計算相對標準偏差（RSD），結果沒食子酸的RSD為0.71%，羥基紅花黃色素A的RSD為0.67%。

3.7重復性試驗取同一批號的樣品，取6份，每份3 g，分別精密稱定重量，按3.3項下方法制備供試品溶液，測定峰面積，計算6次測定的平均含量和RSD，結果沒食子酸的含量平均值為0.92 mg/粒，RSD為0.81%，羥基紅花黃色素A的含量平均值為78.20 μg/粒，RSD為0.72%。

3.8穩定性試驗精密吸取供試品溶液10 μl，按0、2、4、6、8 h分別進樣，計算峰面積的RSD，結果沒食子酸的峰面積RSD為0.84%，羥基紅花黃色素A的RSD為0.97%。

3.9加樣回收率試驗稱取已知含量的供試品6份，每份1.5 g，

置50 ml量瓶中，分別精密加入5 ml沒食子酸對照品貯備液和3 ml羥基紅花黃色素A對照品貯備液，加入50%乙醇32 ml，密塞，超聲處理，放冷，用50%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。本方法沒食子酸和羥基紅花黃色素A加樣回收率分別為：98.38%，99.03%，RSD分別為：1.36%，0.72%，表明該測定方法測定結果準確。見表3、表4。

表3沒食子酸加樣回收率試驗

取樣量

（g）理論值

（mg）加入量

（mg）實測值

（mg）回收率

（%）平均值

（%）RSD

（%）

1.53061.40051.68803.071298.7698.351.36

1.51251.38393.032397.14

1.50671.37863.052498.17

1.51081.38243.0818100.82

1.50281.37513.021797.13

1.50121.37363.024297.28

表4羥基紅花黃色素A加樣回收率試驗

取樣量

（g）理論值

（mg）加入量

（mg）實測值

（mg）回收率

（%）平均值

（%）RSD

（%）

1.53060.06960.08040.149198.7199.030.72

1.51250.06880.148799.27

1.50670.06860.148398.98

1.51080.06870.147697.82

1.50280.06840.148699.71

1.50120.06830.148599.71

3.10樣品含量測定取3個批號的前列寧膠囊，按照3.3項下方法制備并按照3.1項下色譜條件測定，記錄色譜圖，計算每批樣品含量，結果見表5。

表5三批樣品含量測定結果（n=3）

批號沒食子酸

（mg/粒）RSD

（%）羥基紅花黃色素A

（μg/粒）RSD（%）

201102160.9170.9877.631.12

201102170.9261.0375.711.06

201102180.9080.9776.901.03

4討論

紅花的鑒別中，采用藥典中的80%丙酮提取，雜質斑點較多，改用丙酮-甲醇（4：1）混合溶液后，雜質干擾減輕。同時發現，用硅膠G板和硅膠H板對鑒別結果沒有影響，因此選擇更常用的硅膠G板。

菥蓂子的鑒別中，曾參照藥典菥蓂項下的薄層鑒別方法，經試驗驗證，紅花的供試品處理方法可同樣作為菥蓂子的供試品處理方法，故紅花鑒別與菥蓂子鑒別使用同一份供試品，簡化了試驗操作。

沒食子酸和羥基紅花黃色素A的含量測定文獻報道都很多，但未見同時測定二者含量的報道。筆者參照有關文獻[12-15]，經過反復試驗，確定了文章所述的梯度洗脫方法。在供試品溶液制備中，對提取溶劑、提取方法，提取時間等進行了考察，結果以50%乙醇為提取溶劑，超聲提取30 min為佳。試驗結果表明，該方法的專屬性強，檢測靈敏度高，結果準確可靠，可用于該制劑的含量測定。

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（收稿日期：2013-01-17）（本文編輯：連勝利）