CCL18、MVD在乳腺癌組織中的表達及其與患者預后的關(guān)系研究

[摘要] 目的 研究趨化因子配體18（CCL18）與腫瘤微血管密度（MVD）在乳腺癌組織中表達水平及與患者預后的關(guān)系。 方法 收集2011年7月～2012年12月我院乳腺外科病理確診為乳腺癌患者癌組織標本90例，癌旁組織標本30例及乳腺良性病變組織30例。應用免疫組化法檢測CCL18和MVD在3類組織中表達水平。結(jié)果 CCL18 在乳腺癌組織組的表達明顯高于癌旁組織組和良性組織組（P=0.000），并且乳腺癌的分期越晚CCL18在乳腺癌組織組表達水平越高（P=0.000），乳腺癌組織組MVD的表達明顯高于其余兩組（P=0.000），且表達水平在Ⅲ期乳腺癌組織中明顯高于I期和Ⅱ期（P=0.000）。 結(jié)論 CCL18和MVD均可作為乳腺癌標志物之一，兩者表達水平對于治療和預后均有重要的意義。

[關(guān)鍵詞] 乳腺癌；趨化因子18；腫瘤微血管密度；預后

[中圖分類號] R737.9 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2013）36-0020-03

The expression of CCL18 and MVD in breast cancer and the relationship between their expression levels and patients’ prognosis

HU Zujian1 XU Haibin1 REN Xingchang2 HE Junling1 SU Kunlun1 YANG Ouou1 LUO Hua1 LIU Dianlei3

1. Department of Breast Oncology， Hospital of Traditional Chinese Medicine of Hangzhou City in Zhejiang Province，Hangzhou 310007，China；2.Department of Pathology， Hospital of Traditional Chinese Medicine of Hangzhou City in Zhejiang Province，Hangzhou 310007，China；3.Department of General Surgery， Hospital of Traditional Chinese Medicine of Hangzhou City in Zhejiang Province，Hangzhou 310007，China

[Abstract] Objective To investigate the expression of CCL18 （chemokine CC-motif ligand 18） and MVD （microvessel density） in breast cancer and the relationship between their expression levels and patients’ prognosis. Methods Ninety cancer tissue samples and 30 pericarcinoma tissue samples from patients with breast cancer， and 30 tissue samples from benign breast diseases diagnosed in the department of pathology in our hospital were collected from July 2011 to December 2012. Immunochemistry was used to detect the expression levels of CCL18 and MVD in the tissue samples. Results The expression of CCL18 was significantly higher in cancer tissue samples than those in pericarcinoma tissue samples and samples from benign breast diseases（P=0.000）， and the expression level of CCL18 was much higher in advanced breast cancer （P=0.000）. The expression of MVD was significantly higher in cancer tissue samples than those in pericarcinoma tissue samples and samples from benign breast diseases （P=0.000）， and the expression level of MVD was much higher in phase Ⅲ breast cancer than those in phase I and Ⅱ（P=0.000）. Conclusion CCL18 and MVD were both markers for breast cancer. Their expression levels both played important roles in the treatment and prognosis of breast cancer.

[Key words] Breast cancer； CCL18 （chemokine CC-motif ligand 18）； MVD （microvessel density）； Prognosis

乳腺癌是女性最常見腫瘤，其發(fā)生、發(fā)展是一個復雜的、有機的過程。在腫瘤發(fā)生過程中，受到細胞因子和基因突變的影響，腫瘤細胞自身結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，從而影響趨化因子的表達[1]。其中趨化因子配體18（chemokine CC-motif ligand 18，CCL18）是一種巨噬細胞和樹突狀細胞分泌的CC族趨化因子，最近研究發(fā)現(xiàn)其生物學作用與腫瘤生長的微環(huán)境密切相關(guān)[2]，因此其具有作為腫瘤標志物及判斷預后指標的潛能。Pettersen等[3]的研究證實CCL18的過度表達能夠增強癌細胞的侵襲能力。但是關(guān)于乳腺癌患者CCL18的表達水平及其與預后關(guān)系報道不多。同時作為血管依賴性和激素依賴性的腫瘤，腫瘤血管生長情況與癌組織的生長及轉(zhuǎn)移能力密切相關(guān)。腫瘤微血管密度（microvessel density ，MVD）是目前檢測腫瘤微血管水平的金標準，其不但可以確定腫瘤位置及血管生長水平，而且可以用來評估腫瘤血管靶向治療的療效[4]。本研究希望通過比較CCL18和MVD在乳腺癌組織、癌周組織和良性組織之間表達差異，明確其在乳腺癌組織中表達的意義及與乳腺癌患者預后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集2011年7月～2012年12月于我院乳腺外科行乳腺手術(shù)并經(jīng)病理診斷后的組織標本，按照病理診斷組織類型分組。其中乳腺癌組織組90例，乳腺癌旁組織組30例，良性病變組織組30例（乳腺增生組織10例，纖維腺瘤組織20例）。其中，男1例，女性149例，年齡23～88歲，平均年齡（46.5±9.7）歲。所有乳腺癌組織組患者術(shù)前未進行放化療及內(nèi)分泌等綜合治療。按照WHO乳腺腫瘤組織學類型修訂方案將乳腺癌組織組分類：浸入性導管癌80例，髓樣癌6例，浸潤性小葉癌4例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例，無淋巴轉(zhuǎn)移58例；臨床分期：I期22例，Ⅱ期52例 ， Ⅲ期16例。

1.2方法

1.2.1 檢測方法 應用免疫組化Envision檢測法，以CD34 染色標記微血管。操作流程嚴格按照DAKO公司免疫組化試劑盒EnVisionTM Detection kit 說明書進行。

1.2.2結(jié)果判定 CCL18結(jié)果判定：顯微鏡下胞質(zhì)呈棕黃色為陽性細胞[5]。MDV計數(shù)[6]：CD34陽性為血管內(nèi)皮棕黃色細胞，以CD34陽性的單個細胞或細胞族為一個血管計數(shù)。先在低倍光鏡下選取新生血管最多區(qū)域，然后在40倍光鏡下計數(shù)三個視野，取其平均數(shù)。排除血管壁有明顯纖維硬化或肌層以及直徑大于8個紅細胞、壞死、炎癥反應的血管。

1.3統(tǒng)計學分析

使用SPSS18.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)處理，計數(shù)資料采用卡方檢驗，兩個計量資料采用兩獨立樣本t檢驗，多個計量資料比較采用方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 CCL18和MVD在各組中的表達水平比較

CCL18在癌周組織組和良性組織組中均無表達，在乳腺癌組織組中陽性67例，陽性率74.4%。乳腺癌組織與癌周組織組和良性組織組比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=80.723， P=0.000），見表1。MVD計數(shù)在癌周組織組為（6.47±1.76），良性組織組為（5.98±2.85），乳腺癌組織組為（30.95±12.92）。癌周組織組與良性組織組比較差異無統(tǒng)計學意義（t=1.050， P=0.299），乳腺癌組織組與癌周組織組、良性組織組分別比較，差異均有統(tǒng)計學意義（t=19.648， P=0.000； t=19.104，P=0.000）。見表1。

表1 CCL18和MVD在各組中的表達水平比較

2.2 乳腺癌組織組CCL18水平與乳腺癌分期之間關(guān)系

乳腺癌組織組中CCL18 陽性的67例患者中，CCL18表達水平隨乳腺癌臨床分期的增加而升高，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=32.029， P=0.000）。CCL18在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的表達水平明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=8.711， P=0.013）。見表2。

表2 乳腺癌組織組CCL18與乳腺癌分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間關(guān)系

2.3 乳腺癌組織組MVD水平與乳腺癌分期之間關(guān)系

乳腺癌臨床分期中MVD表達水平在I期與Ⅱ期之間差異無統(tǒng)計學意義（t=1.387，P=0.171），Ⅱ期與Ⅲ期之間比較差異有統(tǒng)計學意義（t=4.552，P=0.000）。存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者MVD水平高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異有統(tǒng)計學意義（t=4.906，P=0.000）。見表3。

表3 乳腺癌組織組MDV水平與乳腺癌分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間關(guān)系

3 討論

與眾多癌癥一樣，乳腺癌也依賴于早期的發(fā)現(xiàn)和及時的治療。但是目前血管內(nèi)皮生長因子等用于乳腺癌早期診斷的生物學標志物特異性和靈敏度尚不能滿足臨床需要[7]。隨著分子生物學技術(shù)的發(fā)展，人們發(fā)現(xiàn)趨化因子配體18和MVD是一個有潛力的癌癥相關(guān)診斷及預后評估的生物學指標[8]。眾多研究證實[9-12]，在腫瘤組織中檢測到了CCL18的高水平表達。但是目前關(guān)于CCL18與腫瘤的關(guān)系的研究結(jié)論上不一致。張瑋等針對CCL18過度表達對卵巢上皮性癌細胞生物學行為的研究中也發(fā)現(xiàn)，CCL18不但能夠促進卵巢癌細胞的DNA復制，還能夠降低癌細胞的粘附性，從而增加其遷移和侵襲能力[13]。但是也有研究發(fā)現(xiàn)CCL18可能起局部抗腫瘤的免疫調(diào)節(jié)因子的作用，影響腫瘤的轉(zhuǎn)移和患者的預后[14]。近年來已經(jīng)有多項研究顯示CCL18在多種腫瘤中可作為診斷與預后相關(guān)的標志物，但CCL18作為癌癥早期診斷和預后評估的指標是否能夠應用于乳腺癌國內(nèi)還鮮有報道，因此我們對比乳腺癌組織、癌周組織和良性乳房組織發(fā)現(xiàn)，CCL18在乳腺癌組織中的表達水平明顯高于其他兩組（P<0.05）。并且結(jié)合CCL18陽性表達病例與其臨床分期研究還發(fā)現(xiàn)其呈正相關(guān)（P<0.05），這與高進等[15]的研究結(jié)論一致，且CCL18在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中的表達水平明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者（P<0.05），也就是說患者的預后越差，CCL18表達水平越高，

許多研究表明，MVD與腫瘤生長、轉(zhuǎn)移及預后關(guān)系密切，可作為反映腫瘤生物學行為的重要指標。光鏡下觀察MVD可見其陽性細胞表現(xiàn)出明顯的異質(zhì)性，“熱點”多位于腫瘤間質(zhì)和邊緣浸潤區(qū)，中心部位往往微血管數(shù)量較少，表現(xiàn)為缺血性壞死。這些現(xiàn)象說明腫瘤細胞在生長過程中以旁分泌的方式釋放促進血管生成的細胞因子。近年來對包括乳腺癌在內(nèi)的多種腫瘤研究證實，MVD可提供重要的腫瘤預后及分期信息，作為一個獨立的預后因素，高MVD往往提示腫瘤容易轉(zhuǎn)移，預后較差[16]。本研究中發(fā)現(xiàn)癌組織中MVD計數(shù)明顯高于癌周組織和良性組織（P<0.05）。并且乳腺癌患者臨床分期與MVD計數(shù)水平分析顯示，分期越晚，MVD的計數(shù)越大，這與MVD計數(shù)在其他這類型腫瘤中結(jié)果一致，考慮可能是腫瘤晚期血管增生活躍有關(guān)。此外是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與MVD計數(shù)分析顯示，有淋巴轉(zhuǎn)移者MVD計數(shù)明顯高于無淋巴轉(zhuǎn)移者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），說明腫瘤向淋巴結(jié)的擴散可能與血管的生成有關(guān)[17，18]。

綜上所述，我們可以了解CCL18和MVD與乳腺癌發(fā)生、轉(zhuǎn)移及預后密切相關(guān)，均可以作為乳腺癌的早期診斷和判斷預后的指標，至于兩者在腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮的生物學作用尚需進一步研究。

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（收稿日期：2013-09-30）