復(fù)方清火口服液中黃芩苷的含量測定

【摘要】 目的 探討研究高效液相色譜法測定復(fù)方清火口服液中黃芩苷的含量。方法 色譜柱：AgilentTC-C18柱（4.6×150mm，5μm，Agilent），流動相：甲醇-0.5%磷酸水溶液（30﹕70），流速為1.0mL·min-1，檢測波長為274nm，進樣量為10ul。結(jié)果 黃芩苷線性關(guān)系良好；精密度和準(zhǔn)確度均為良好；回收率在96.71%-99.83%；供試品溶液室溫放置6h穩(wěn)定。結(jié)論 本研究所得方法操作簡單、快速，重現(xiàn)性好，可準(zhǔn)確測定復(fù)方清火口服液中黃芩苷的含量，用于復(fù)方清火口服液的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 復(fù)方清火口服液；黃芩苷；HPLC法；含量測定

文章編號：1004-7484（2013）-12-7629-02

復(fù)方清火口服液是臨床常用的解毒瀉火、清熱燥濕、止血化瘀的復(fù)方中藥，由黃芩、黃連、大黃、金銀花等中藥組成^[1]，臨床主要廣泛應(yīng)用于熱毒所致身熱煩躁、咽喉腫痛、口舌生瘡、便秘等，療效顯著。黃芩主要是具有抗炎作用，其中活性最強的是黃芩苷^[2]。2010版藥典中以黃芩苷作為黃芩的含量控制指標(biāo)^[3]。為了更快速、有效的控制復(fù)方復(fù)方清火口服液的質(zhì)量，筆者建立了一套高效液相色譜方法測定黃芩苷，該方法操作簡單、快速，重現(xiàn)性好，可用于復(fù)方清火口服液的質(zhì)量控制。

1 實驗材料

1.1 儀器與設(shè)備 Agilent1290型高效液相色譜儀（配有脫氣機、自動進樣器、恒溫箱、液相色譜泵、柱溫箱及紫外檢測器），由Chemstation化學(xué)工作站系統(tǒng)控制（Agilent，德國）；METTLER TOLEDO AB135-S型十萬分之一天平（METTLER）；XW-80A渦旋混合器（上海滬西）；TGL16M型冷凍離心機（長沙英泰）；AHL-2001-P痕量型分析型超純水機（艾科浦，重慶頤洋）；DL-360A型超聲波清洗儀（上海之信）。

1.2 試藥與材料 黃芩苷對照品：由（中國藥品生物制品檢定研究院提供，批號：200815）；復(fù)方復(fù)方清火口服液為院內(nèi)自制，3個批次的樣品批號分別為：130702，130703，130704；甲醇：美國Tedia公司，色譜純，批號：1202257；磷酸：天津科密歐化學(xué)試劑有限公司，分析純，批號：110215；純水：自制去離子超純水。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent TC-C18柱（4.6×150mm，5μm，Agilent）；保護柱：Gemini C18（4×3.0mm，10μm，Phenomenex，美國）；進樣量：10ul。流動相：甲醇-0.5%磷酸水溶液（30﹕70）；流速為1.0mL·min-1；檢測波長為274nm；柱溫：30℃。

2.2 溶液的配制

2.2.1 對照品溶液的配制 精密稱取黃芩苷對照品50mg，置于50ml容量瓶中，加適量流動相溶解后，再用流動相稀釋至刻度線，搖勻，即得濃度為1mg·ml-1的黃芩苷對照品儲備溶液，置于4℃冰箱保存，備用。

2.2.2 供試品溶液的配制 取復(fù)方清火口服液1ml，置于10ml容量瓶中，加水稀釋至刻度線，充分搖勻，精密量取5ml至50ml容量瓶中，加流動相定容至刻度，搖勻，取上清液經(jīng)0.22um的微孔濾膜過濾后即得供試品溶液。

2.2.3 陰性對照液 按復(fù)方清火口服液的處方組成及制劑方法，制備不含黃芩的空白口服液，作為陰性對照制劑，陰性樣品溶液制備方法同供試品溶液的配制。

2.3 系統(tǒng)適用性與專屬性考察 上述色譜條件下，取對照品溶液、陰性對照液、供試品溶液適量，分別進樣10ul。觀察三份溶液的色譜圖。黃芩苷的理論塔板數(shù)不低于3000，分離度大于1.5，主峰周圍無干擾峰，對照液與供試液中黃芩苷的保留時間一致，專屬性好。

2.4 線性關(guān)系考察 精密移取濃度為1mg·ml-1的黃芩苷對照品儲備溶液適量，用流動相稀釋成系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為40、20、10、5、2.5、1.25ng·uL-1，進樣10ul。記錄各濃度的峰面積。結(jié)果得出，黃芩苷在1.25ng·uL-1-40ng·uL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，得線性回歸方程為Y=631.3X+13.22，相關(guān)系數(shù)為0.9997（n=5）。

2.5 精密度考察 取濃度為5ng·uL-1的對照品工作溶液，每個濃度平行配制5份，分別進樣10ul，記錄峰面積。結(jié)果得RSD值為0.69%，表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性考察 取批號為“130702”批次的供試品6份，按上述供試品溶液制備方法處理，進樣10ul，記錄峰面積。結(jié)果得出黃芩苷峰面積的RSD值為0.78%，表明重現(xiàn)性良好。

2.7 加樣回收率考察 精密移取同一已知濃度的供試品溶液1ml，平行5份，分別加入中濃度的對照品工作溶液1ml，混勻，進樣，記錄峰面積。本實驗所得黃芩苷的加樣回收率為96.71%-99.83%，RSD為0.81%。

2.8 穩(wěn)定性考察 取同一份供試品溶液，分別在室溫下放置0、4、6h后測定，記錄色譜峰。結(jié)果所得供試品溶液在室溫下放置6h后測定所得黃芩苷的RSD值分別為0.74%，可說明室溫放置6h穩(wěn)定。

2.9 樣品含量測定 取3個待檢批次的樣品，按上述處理方法制成供試品溶液，進樣10ul，記錄峰面積。具體結(jié)果見表1。

3 小 結(jié)

本研究所得方法操作簡單、快速，重現(xiàn)性好，可用于復(fù)方清火口服液的質(zhì)量控制。

參考文獻

[1] 孫曉菊，饒春愷.復(fù)方清火口服液中黃芩苷的含量測定及穩(wěn)定性研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2004，15（6）：329-330.

[2] 蘇英英，楊東花，黃壯壯，等.高效液相色譜法測定咳露口服液中黃芩苷含量[J].中國藥業(yè)，2012，21（17）：26-27.

[3] 唐亮，劉皈陽，馬建麗，等.高效液相色譜法測定清咽飲口服液中黃芩苷的含量[J].兒科藥學(xué)雜志，2013，19（5）：44-45.