血液分析儀試劑作用原理及對檢測結果的影響

【摘要】 總結血液分析儀各種試劑的組成及對檢測結果的影響。

【關鍵詞】 血液分析儀；試劑；對檢測結果的影響

文章編號：1004-7484（2013）-12-7747-01

1 血紅蛋白素

顧名思義，血紅蛋白素在五分類血液分析儀中的作用只是測量血紅蛋白，檢測原理同三分類分析儀血紅蛋白檢測原理一樣，唯一不同的是，三分類血液分析儀溶血素同時檢測白細胞總數和分類。由于五分類血液分析儀所用血紅蛋白溶血素是在單獨的通道進行檢測，因此當血紅蛋白溶血素出現問題時，只會影響血紅蛋白的結果，對白細胞總數和分類沒有任何影響。

2 白細胞分類試劑（溶血素、染液）

2.1 白細胞分類試劑作用原理 五分類血液分析儀由于各廠家白細胞分類原理不同，所用的試劑也不一樣。主流五分類血液分析儀白細胞分類原理主要包括高頻電導激光散射聯合檢測法、光散射和細胞染色聯合檢測法、多角度激光偏振光散射檢測法等，但其方法不外乎光學法加熒光染色技術。所用試劑主要包括溶血素、染液。溶血素主要是嗜酸溶血素和嗜堿溶血素，染色則根據染色原理及染色目的不同，可分為化學染色、核酸染色、過氧化物酶染色等。現在主要從試劑方面對白細胞分類作用原理以及對檢測結果的影響做以下闡述。

光學法+核酸染色。白細胞4分類通道：利用激光和流式細胞原理，當血細胞通過檢測通道時，在流式通道內，稀釋后的血液從樣本口低速進入快速運動的鞘液流中，因為稀釋后的血樣和鞘液的流速不同，所以不會混合，形成一個直徑30微米的液流使血液樣本呈一條細線穿過檢測通道，在激光的照射下激發出熒光，根據熒光強度的不同以及不同角度的散射光繪制成二維散點圖，對包細胞進行分類。散點圖縱坐標（Y軸）表示側向熒光強度，反映核酸染料對DNA/RNA的染色強度，橫坐標（X軸）表示側向散射光強度，反映細胞的內容物。

2.2 白細胞計數和嗜堿性粒細胞通道 在嗜堿溶血素的作用下，紅細胞和血小板破碎，除嗜堿性粒細胞外的其他白細胞變成裸核。這樣裸核數量加上嗜堿性粒細胞數量即為白細胞總數，再根據激光照射后散射光的不同，區分出嗜堿細胞。Y軸表示前向散射光，反映細胞體積，X軸表示側向散射光，反映細胞內容物。結合上文4分類通道對白細胞進行4分類，即可完成對WBC總數計數及對白細胞的五分類。

2.2.1 光學法+過氧化物酶染色 用過氧化物內染色劑對WBC進行初步區分，再結合嗜堿/核通道的差異裂解原理，最終將五種白細胞準確區分開來。過氧化物酶染色技術主要是利用白細胞胞漿內各成分對過氧化物酶活性的差異來區分，其中嗜酸性粒細胞對過氧化物酶活性為“+++”，中性粒細胞對過氧化物酶活性為“+++”，單核細胞對過氧化物酶活性為“++”，而淋巴細胞和嗜堿性粒細胞與過氧化物酶不反應，這樣通過染色的方法可將嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、單核細胞區分開；同時結合嗜堿/核通道的差異裂解原理可將嗜堿細胞和白細胞總數檢測出來，這樣白細胞總數減去嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞、中性粒細胞、單核細胞即可得出淋巴細胞數量，最終將五種白細胞準確區分開來。

2.2.2 光學法+化學染色 化學染色劑對細胞脂質和蛋白組分進行染色，在35度下進行孵育，對單核細胞的初級顆粒、嗜酸性粒細胞和中性粒細胞的特異顆粒進行不同程度的染色，同時對細胞的膜也進行不同程度的著色，由于淋巴細胞、單核細胞、中性粒細胞和嗜酸性粒細胞對染色劑的著色程度不同，在激光和氖燈的照射下，激發出的光強度也不同，每種細胞特定的細胞核形態和顆粒的結構造成光散射的強度不同，因此可以在散點圖中同時得到嗜酸性粒細胞、中性粒細胞、單核細胞、淋巴細胞的結果。同時在BASO/WBC檢測池中，全血樣品與嗜堿溶血素混合，在35度恒溫下，溶解紅細胞，并使除嗜堿性粒細胞外的其他白細胞變成裸核。細胞通過鞘流微孔，每個細胞產生與細胞體積成正比的電子脈沖，繪制出BASO/WBC直方圖，依據閾值設定，區分出白細胞裸核和嗜堿性粒細胞，結合化學染色對白細胞進行4分類，即可完成對白細胞的5分類。

3 網織紅細胞試劑（網織紅細胞稀釋液、染液）。

3.1 網織紅細胞試劑作用原理 存在于網織紅細胞稀釋液中的表面活性劑使紅細胞和白細胞腫脹并輕微損傷細胞膜以便染料進入細胞，網織紅染液中的聚次甲基染料使RNA和DNA染色。由于紅細胞和網織紅細胞的RNA含量不同，所以可以將紅細胞和網織紅細胞區分出來；由于網織紅細胞和白細胞DNA和RNA含量不同，可以將網織紅細胞和白細胞區分出來。

3.2 網織紅細胞試劑對檢測結果的影響 大部分儀器網織紅細胞檢測是在單獨的通道使用單獨的試劑，因此網織紅細胞試劑不會影響到其他結果的檢測。該試劑的質量只會對網織紅細胞的相關參數產生影響。

4 有核紅細胞試劑（有核紅細胞溶血素、染液）

4.1 有核紅細胞試劑作用原理 有核紅細胞溶血劑中表面活性劑可使成熟紅細胞破碎，有核紅細胞的核暴露，同時在白細胞膜上打孔。染液中的聚次甲基熒光染液進入白細胞和有核紅細胞內對核酸進行染色。應用半導體激光束照射標本，根據側向熒光和前向散射光信號的強弱即可辨認有核紅細胞并進行計數。

4.2 有核紅細胞試劑對檢測結果的影響 有核紅細胞染液的熒光性能（吸收光束的能力）、對細胞膜的滲透性、對靶細胞成分發出熒光的強度以及其化學穩定性都會影響到有核紅細胞的檢測結果。同網織紅細胞、幼稚粒細胞一樣，有核紅細胞的試劑只會對有核紅細胞的檢測結果產生影響，不會影響到其他結果計數。

5 鞘 液

5.1 鞘液作用原理 大部分高端血液分析儀為了提高檢測的精度，都應用了鞘流原理，主要應用的試劑就是鞘液。鞘流形式有單鞘流和多鞘流，目的都是使細胞呈一條直線經過檢測部。在鞘流池中（一般分為前后鞘流池或者內外鞘流池）采用正壓方式將鞘液注入，鞘液在鞘流池中形成固定方向的渦流，這個時候再把樣本用正壓的形式注入，那么所有的標本無一例外只能按流動方向流過鞘流池，這就形成鞘流方向，在這個方向上進行電阻計數或者吸光度計數或者光散射計數，就能充分保證正確計數每個細胞，并且保證足夠的通過數量，還可以保證計數后的樣本不會回流回來，由于有鞘流保護，樣本會在鞘流的正中心通過計數管道或孔，因此不會出現偏差的干擾信號，可以保證每個細胞的游離。

5.2 鞘液對檢測結果的影響 由于鞘液需要包裹著被檢測樣本經過檢測部接受激光照射或者電阻抗法計數，因此鞘液的潔凈度、吸光度、PH值、滲透壓都要滿足儀器的設計要求，否則都將會對儀器的檢測結果產生影響。

5.3 白細胞分類試劑對檢測結果的影響 從上文白細胞分類試劑作用原理我們可以看出，白細胞分類試劑種類繁多，而且起到的作用也各不相同，嗜堿溶血素只影響白細胞的總數和嗜堿細胞計數，對白細胞另外四類不會產生影響；嗜酸溶血素和染液共同作用于白細胞其他四分類，它們試劑質量有問題，則會造成白細胞分類不好或者不分類。

6 可以對血細胞進行等體積球形化處理的稀釋液

有的血液分析儀還需要在稀釋液中加入戊二醛和十二烷基硫酸鈉等試劑，目的是計數前先對血細胞進行等體積球形化處理，這樣計數時就可以避免因體積大小不同造成對血細胞計數造成的影響。

以上闡述了血液分析儀試劑的作用原理及對檢測結果的影響，從中可以看出每一種試劑都有不同的作用，如何防止試劑對檢測結果的影響，則需要我們在完善試劑質量控制體系，以及研發適用于配套試劑及儀器的標準物質方面多下功夫。

參考文獻

[1] 晉淑媛，主編.現代醫院檢驗科規范化管理與診斷治療標準實用手冊[S].

[2] 葉應嫵，王毓三，申子瑜，主編.全國臨床檢驗操作規程[S].