Hp感染與胃癌患者陰性淋巴結(jié)中CK19和CK20表達(dá)的相關(guān)性研究

魏小果，高 翔，康國蘭，詹 麗

（甘肅省人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000）

幽門螺桿菌（Hp）是胃癌啟動因子，促進(jìn)胃癌發(fā)病及轉(zhuǎn)移的發(fā)生，為胃癌的預(yù)后影響因素，區(qū)域淋巴結(jié)（即陰性淋巴結(jié)）轉(zhuǎn)移直接影響患者長期生存[1-2]。目前對陰性淋巴結(jié)微小轉(zhuǎn)移灶已有研究，但尚無對Hp感染與陰性淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的相關(guān)性報道。本研究采用前瞻性對照研究，分析術(shù)前Hp感染與胃癌患者陰性淋巴結(jié)CK19、CK20表達(dá)的相關(guān)性，進(jìn)一步明確Hp感染與胃癌陰性淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 基本資料

收集2011年10月—2012年12月經(jīng)我院胃鏡及病理確診的胃癌患者64例，其中男性35例，女性29例；年齡34～76歲，平均年齡56.7歲；術(shù)前未經(jīng)放、化療，術(shù)后經(jīng)常規(guī)組織病理證實(shí)且排除遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。本研究獲得甘肅省人民醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，同時標(biāo)本采集得到了患者的知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 Hp 檢測 所有患者均于入院后次日行14C-尿素呼氣試驗(yàn)（14C-UBT）檢測Hp，操作流程嚴(yán)格按說明書進(jìn)行，以14C-UBT≥100dpm/mmolCO2為陽性判斷值。依照結(jié)果將患者分為Hp（+）組和Hp（-）組。

1.2.2 CK19、CK20 檢測 兩組患者術(shù)后共切除淋巴結(jié)846枚，中位數(shù)為12（6～16）枚，所有淋巴結(jié)均行常規(guī)病理檢查。將陰性淋巴結(jié)經(jīng)常規(guī)制備后連續(xù)切片（厚度3μm），分別用免疫組化法檢測CK19和CK20，操作流程嚴(yán)格按照試劑操作說明進(jìn)行。標(biāo)本檢測在24小時內(nèi)進(jìn)行。

陽性判斷：定位于細(xì)胞胞漿內(nèi)，如細(xì)胞胞漿經(jīng)免疫組化染色后出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性著色，終止反應(yīng)，顯微鏡下觀察結(jié)果。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移表現(xiàn)為單個散在和（或）數(shù)個聚集成小團(tuán)狀的癌細(xì)胞位于淋巴竇內(nèi)，以邊緣竇為主[3]。個別淋巴結(jié)巨噬細(xì)胞和漿細(xì)胞等內(nèi)可見AE1交叉反應(yīng)，結(jié)合細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)、部位及AE1染色特征可以明確區(qū)分。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS17.0軟件包統(tǒng)計分析，本研究數(shù)據(jù)為計數(shù)資料，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Hp（+）組與Hp（-）組胃癌患者分組情況

胃癌患者Hp感染率為54.7%，其中Hp（+）組胃癌患者35例，共檢出陰性淋巴結(jié)348枚；Hp（-）組胃癌患者29例，共檢出陰性淋巴結(jié)331枚。兩組比較經(jīng)χ2檢驗(yàn)，χ2=6.084，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 Hp（+）組與Hp（-）組胃癌患者陰性淋巴結(jié)中CK19、CK20的表達(dá)

Hp（+）組胃癌患者陰性淋巴結(jié)CK19陽性表達(dá)率為11.8%（41/348），Hp（-）組CK19的陽性表達(dá)率為6.3%（21/331），兩組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=6.004，P=0.014）。Hp（+）組胃癌患者陰性淋巴結(jié)CK20陽性表達(dá)率為9.2%（32/348），Hp（-）組CK20的陽性表達(dá)率為4.8%（16/331），兩組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.912，P=0.027）。具體見表1。

表1 Hp（+）組與Hp（-）組胃癌患者陰性淋巴結(jié)中CK19、CK20 的表達(dá)

3 討論

3.1 胃癌陰性淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的發(fā)生

胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，在甘肅河西走廊地區(qū)尤為高發(fā)[4]，進(jìn)展期胃癌根治術(shù)術(shù)后5年存活率約為40%，直徑<2mm的陰性淋巴結(jié)癌轉(zhuǎn)移灶即微轉(zhuǎn)移是腫瘤根治術(shù)后復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的重要原因之一[1]，同時微轉(zhuǎn)移也是臨床的難點(diǎn)[5]。胃癌可通過黏膜下、肌間或漿膜下的淋巴管蔓延、浸潤，因而淋巴轉(zhuǎn)移發(fā)生早[6]。同時，由于淋巴靜脈通路的存在，腫瘤細(xì)胞可以很容易地由淋巴系統(tǒng)進(jìn)入循環(huán)系統(tǒng)，反之亦然。所以胃癌患者行手術(shù)治療時，淋巴轉(zhuǎn)移率高達(dá)50%～70%。因而在常規(guī)病理檢查的基礎(chǔ)上，檢測陰性淋巴結(jié)的微轉(zhuǎn)移對于患者的預(yù)后判斷有重要意義。

3.2 CK19、CK20 表達(dá)與胃癌微轉(zhuǎn)移的檢測

CK19、CK20等所屬的細(xì)胞角蛋白家族是上皮細(xì)胞所特有的一種中間絲，特異性地表達(dá)于上皮組織和上皮來源的腫瘤，幾乎不表達(dá)于血液、淋巴組織和骨髓組織。因此，淋巴結(jié)中細(xì)胞角蛋白的表達(dá)提示存在癌細(xì)胞，即有微轉(zhuǎn)移的發(fā)生。應(yīng)用CK19、CK20等同步檢測，有助于提高胃癌陰性淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的檢出率，使胃癌在臨床上得以重新分期，對于判斷預(yù)后和指導(dǎo)治療均有一定意義。

3.3 Hp 感染影響胃癌陰性淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的機(jī)制

Hp能引起長期炎癥刺激，導(dǎo)致胃黏膜萎縮—腸化—異型增生的系列演化，是胃癌的主要病因之一[1]，其與胃癌的不良預(yù)后相關(guān)[7]。本研究提示，CK19、CK20在Hp（+）和Hp（-）的胃癌患者陰性淋巴結(jié)中存在不同表達(dá)，其中Hp（+）胃癌患者CK表達(dá)增高，部分組織學(xué)分化較差、術(shù)后分期較高的患者CK表達(dá)更高，提示Hp感染可能促進(jìn)腫瘤微轉(zhuǎn)移的發(fā)生，從而使微轉(zhuǎn)移的指標(biāo)高表達(dá)。Hp促進(jìn)微轉(zhuǎn)移的發(fā)生是通過促進(jìn)胃癌細(xì)胞之間的分離、增強(qiáng)癌細(xì)胞與基質(zhì)成分的黏附作用、加快細(xì)胞外基質(zhì)的降解及癌細(xì)胞的移出等來實(shí)現(xiàn)的。分子機(jī)制的研究指出，Hp感染直接刺激胃癌細(xì)胞釋放巨噬細(xì)胞移動抑制因子（MIF），而MIF可能通過上調(diào)基質(zhì)降解酶（MMP）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達(dá)來促進(jìn)腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移[8-9]。

實(shí)際上，少量癌細(xì)胞進(jìn)入淋巴結(jié)后，在淋巴結(jié)內(nèi)的轉(zhuǎn)歸也不盡相同，包括：（1）增生形成大的轉(zhuǎn)移瘤；（2）被機(jī)體免疫系統(tǒng)清除；（3）暫時進(jìn)入G0期，環(huán)境適宜時再增生形成大的轉(zhuǎn)移瘤[10]。因此，即使是免疫組化證實(shí)的微轉(zhuǎn)移，預(yù)后也并非一定不良。胃癌患者早期檢測Hp，術(shù)后檢測陰性淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移，對改善患者預(yù)后有一定意義。研究者也意識到，由于微轉(zhuǎn)移的影響因素眾多，同時限于樣本量，Hp與陰性淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的相關(guān)性仍需要在后續(xù)工作中繼續(xù)研究、證實(shí)。

[1]Olbermann P，Josenhans C，Moodley Y，et al. A global overview of the genetic and functional diversity in the Helicobacter pylori cag pathogenicity island[J]. PLoS Genet，2010，6（8）:1001-1069.

[2]IARC. International Agency for Research of Cancer. Schistosomes，liver flukes and Helicobacter pylori. Monographs on the evalution of carcinogenic risks to humans [J].World Health Organization，1994（1）：241.

[3]趙愛蓮，李吉友，孫文清.常規(guī)檢查淋巴結(jié)陰性胃癌的淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移研究[J].中華腫瘤雜志，2000，22（3）：222-224.

[4]劉玉琴，祿韶華，張小棟，等.甘肅省胃癌死亡率變化及近期預(yù)測[J].中國腫瘤臨床，2010（5）：314-318.

[5]王貴英，李勇，王士杰，等.胃癌患者外周血及骨髓微轉(zhuǎn)移檢測的臨床意義[J].中國腫瘤臨床，2004（7）：405-407.

[6]王建馗，馮義朝.幽門螺桿菌感染與胃癌局部浸潤的相關(guān)性[J].世界華人消化雜志，2010，18（3）：268-271.

[7]羅彥麗，于東紅，周蕾，等.幽門螺桿菌L 型感染與胃癌浸潤和轉(zhuǎn)移的關(guān)系[J].癌變·畸變·突變，2009，21（5）：384-387.

[8]歐玉榮，康敏，周蕾，等.胃癌中幽門螺桿菌L 型感染與MIF、MMP9、VEGF 表達(dá)的關(guān)系[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2014（2）：180-186.

[9]于觀貞，陳穎，顧小強(qiáng)，等.CK7、CK14、CK19 和CK20 在胃腸癌轉(zhuǎn)移診斷中價值的新發(fā)掘[J].腫瘤，2006，26（11）：1015-1019.

[10]岳欣，王家倉.31 例胃癌患者區(qū)域淋巴結(jié)組織中CK19 的表達(dá)[J].腫瘤防治雜志，2005（12）：900-902.