超高效液相色譜法檢測雞肉中磺胺二甲嘧啶殘留量的研究

李宏娟，曹秀梅，林艷青，陳有旺

（1.秦皇島市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗中心河北秦皇島066000；2.廊坊職業(yè)技術(shù)學(xué)院動物科學(xué)與技術(shù)系河北秦皇島065000）

超高效液相色譜法檢測雞肉中磺胺二甲嘧啶殘留量的研究

李宏娟1，曹秀梅1，林艷青1，陳有旺2

（1.秦皇島市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)督檢驗中心河北秦皇島066000；2.廊坊職業(yè)技術(shù)學(xué)院動物科學(xué)與技術(shù)系河北秦皇島065000）

采用超高效液相色譜儀-紫外檢測器，建立雞肉組織中磺胺二甲嘧啶的檢測方法。雞肉組織中磺胺二甲基嘧啶用乙酸乙酯提取、0．1 mol/L鹽酸溶劑轉(zhuǎn)換、正己烷溶脂、MCX柱凈化，在270 nm檢測波長處用超高液相色譜儀-紫外檢測器檢測。結(jié)果表明：雞肉組織中磺胺二甲嘧啶的保留時間為0．88 min，檢出限為2．0 μg/kg，定量限為5．0μg/kg，在10～200μg/kg范圍內(nèi)添加回收率為60%～85%，相關(guān)系數(shù)R2=0．999 5該方法具有快速、簡單、回收率高、重現(xiàn)性好、檢測限低等優(yōu)點(diǎn)。

磺胺二甲嘧啶；殘留物分析；超高液相色譜

磺胺二甲基嘧啶是最廣泛應(yīng)用的磺胺類藥物之一，具有抗菌譜廣、抗球蟲和價廉易得等優(yōu)點(diǎn)，至今仍在獸醫(yī)臨床和畜牧業(yè)中廣泛應(yīng)用，但食品殘留和污染問題比較嚴(yán)重，據(jù)文獻(xiàn)報道磺胺二甲基嘧啶具有致癌作用[1]。歐盟、美國、日本、韓國等國家均將磺胺二甲基嘧啶等磺胺類藥物列為畜禽飼養(yǎng)過程中限制使用的藥物,其動物組織最大殘留限量一般為50～100μg/kg[2]。

國內(nèi)外文獻(xiàn)報道的磺胺二甲基嘧啶的檢測方法有微生物法、分光光度法、酶聯(lián)免疫法、薄層色譜法、毛細(xì)管電泳法、高效液相液相色譜法（HPLC），鮮有報道使用超高效液相色譜法（UPLC）進(jìn)行檢測。超高效液相色譜（UPLC），與傳統(tǒng)的HPLC技術(shù)相比，提供了更高的效率，具有更強(qiáng)分離度、超高速度和超高靈敏度等優(yōu)點(diǎn)。因此建立快速、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好、適合批量檢測的超高效液相-紫外檢測法，檢測雞肉組織中磺胺二甲基嘧啶殘留。

1 實(shí)驗部分

1.1 儀器

Waters ACQUITY UPLC配紫外檢測器；法國吉爾森固相萃取儀；瑞士BUCHI旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；北京斯珀特氮空吹掃濃縮儀。

1.2 試劑與耗材

磺胺二甲基嘧啶對照品，Sigma公司購置。乙酸乙酯、乙腈、甲醇、甲酸、正己烷均為色譜純；鹽酸、氨水為分析純；實(shí)驗用水為超純水；MCX柱60 mg/3 mL。

1.3 色譜條件

色譜柱：Waters UPLC BEH C18色譜柱（50 mm×2.1 mm，1.7μm）流動相：流動相A：0.1%甲酸水溶液；流動相B：乙腈；A∶B（83∶17）;流速：0.4mL/min；檢測器：紫外檢測器；檢測波長：270 nm;柱溫:30℃；進(jìn)樣量:5μL。

1.4 樣品制備

稱取均質(zhì)試料（5±0.05）g，于50 mL聚四氟乙烯離心管中，加乙酸乙酯20 mL，渦動2 min，4000 r/min離心5 min，取上清液于100 mL雞心瓶中，殘渣中加乙酸乙酯20 mL，重復(fù)提取1次，合并2次提取液。雞心瓶中加0.1 mol/L鹽酸溶液4.0 mL，于40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至少于3.0 mL，轉(zhuǎn)至10 mL離心管中。用0.1 mol/L鹽酸溶液2.0 mL洗雞心瓶，轉(zhuǎn)至同一離心管中。再用正己烷3.0 mL洗雞心瓶，將正己烷轉(zhuǎn)至同一離心管中，渦旋混和30 s，3 000 r/min離心5 min，棄正己烷。再次用正己烷3.0 mL洗雞心瓶，轉(zhuǎn)至同一離心管中，渦旋混和30 s，3 000 r/min離心5 min，棄正己烷，取下層液備用。

MCX柱依次用甲醇2.0 mL和0.1 mol/L鹽酸溶液2 mL活化，取備用液過柱，控制流速1.0 mL/min。依次用0.1mol/L鹽酸溶液1.0 mL和50%甲醇乙腈溶液2.0 mL淋洗，用洗脫液4.0 mL洗脫，收集洗脫液，于40℃氮?dú)獯蹈桑?.1%甲酸乙腈溶液1.0 mL溶解殘余物，濾膜過濾，供超高效液相色譜測定。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作

精密量取10 μg/mL磺胺二甲嘧啶標(biāo)準(zhǔn)工作液，用流動相溶液逐級稀釋，配制成濃度為10、50、100、250、500、2 500 μg/L的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，供高效液相色譜測定。以測得峰面積為縱坐標(biāo)，對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求回歸方程和相關(guān)系數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)色譜圖和樣品加標(biāo)色譜圖

按照以上測定方法得到磺胺二甲基嘧啶標(biāo)準(zhǔn)色譜圖和樣品加標(biāo)色譜圖（見圖1），圖中峰1為磺胺二甲基嘧啶。

圖1 空白樣品、樣品添加、標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖

在超高效液相色譜條件下,S/N＞3時雞肉組織中磺胺二甲嘧啶檢出限為2.0μg/kg，S/N＞10時雞肉組織中磺胺二甲嘧啶定量限為5.0μg/kg。磺胺二甲嘧啶質(zhì)量濃度在10～2 500μg/L內(nèi)線性顯著，峰面積（Y，μV·s）與其質(zhì)量濃度（X,μg/L）線性方程為Y=4.95e+001X-1.15e+003，相關(guān)系數(shù)為0.999 5，詳見圖2。

圖2 檢測方法校準(zhǔn)曲線

2.3 回收率、準(zhǔn)確度、精密度

GB/T 27404-2008動物性食品中獸藥最高殘留限量中規(guī)定動物組織中磺胺類藥物最高殘留限量（MRL）為100μg/kg，根據(jù)GB/T27404-2008實(shí)驗室質(zhì)量控制規(guī)范相關(guān)規(guī)定，本實(shí)驗采用1/2MRL、MRL、 2MRL三點(diǎn)水平進(jìn)行平行添加計算回收率，每個樣品重復(fù)測定6次計算精密度，根據(jù)日間三水平平行添加比較計算準(zhǔn)確度，結(jié)果見表1。

表1 磺胺二甲基嘧啶回收率、精密度、準(zhǔn)確度

我試驗室三人采用該方法，對雞肉組織中添加10～200μg/kg濃度水平的回收率均能達(dá)到60%～85%。

3 結(jié)論

文獻(xiàn)報道使用高效液相法（HPLC）對動物組織中磺胺二甲基嘧啶殘留檢測出峰時間一般在4 min左右[2,3]，本實(shí)驗利用超高液相（UPLC）檢測，磺胺二甲基嘧啶出峰時間大約在0.88 min左右，明顯縮短了檢測時間，對于實(shí)際工作中進(jìn)行大批量檢測能大大節(jié)省時間，提高檢測效率。■（編輯：狄慧）

[1] 李國柱,陳灝,張廣源.動物源性食品中磺胺類藥物殘留及控制對策[J].廣東畜牧獸醫(yī)科技,2013,38(4)：30-31.

[2] 林紅英,陸桂萍，沈子龍.豬肉中磺胺二甲基嘧啶殘留量的高效液相色譜法測定[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報,2006,22(3):285-288.

[3] 張利環(huán)，張春善，韓河平.高效液相色譜法測定肉鴨組織中磺胺二甲基嘧啶的殘留量[J].中國抗生素雜志,2006,31(5):309-310.

雞、鴨每天采食量的換算模式

采食量按1 000羽計算：

1）肉雞：采食量為：5 g×25 d×1 000羽÷1 000=125 kg。

2）817肉雜雞：采食量為白羽肉雞的1/2。即1 000羽817肉雜雞第25日齡的采食量為：5 g×25 d×1 000羽÷1 000÷2=62．5 kg

3）蛋雞：每只雞每天的采食量為：(單位為g)前1～9日齡，采食量為日齡數(shù)加2；第10～19日齡，采食量為日齡數(shù)加1；20～49日齡，采食量為日齡數(shù)；第50～120日齡，采食量為50+(日齡數(shù)-50)÷ 2；121日齡之后每天的采食量維持在120～125 g之間。即1 000羽蛋雞第25日齡的采食量為：25 g×1 000羽÷1 000=25 kg。

4）肉鴨：采食量為：日齡×鴨只×0．016，即1000羽肉鴨第25日齡的采食量為：25 g×1 000羽× 0．016=200 kg

5）青腳麻雞、快三黃雞：公式參考817肉雜日采食量計算公式。

6）慢三黃：參考蛋雞日采食量計算公式。（楊杰）

Determination of Residues Analysis of Sulfadimidine in Chicken Tissues by UPLC

Li Hongjuan1,Cao Xiumei1,Lin Yanqing1,Chen Youwang2
(1.Qinhuangdao City Agricultural Product Quality Safety Supervision and Inspection Center, Hebei Qinhuangdao,066000; 2.Animal Science and Technology of Langfang Polytechnic Institute,Hebei Qinhuangdao,066000)

A rapid determination method for sulfadimidine in chicken tissues was established using UPLC-UV. Sulfadimidine in chicken tissues were extracted with ethyl acetate,followed solvent conversion with 0.1M hydrochloric acid and removed fats with n-hexane,then Purified with MCX column and finally determined by UPLC with a UV detector at awavelength of 270 nm.The retention time of sulfadimidine was 0.88min,The limit of detection(L0D)is 2.0μg/kg and the limit of quantification(L0Q)is 5.0μg/kg in chicken.Recoveries are in a range of 60%～85%at spiked levels of 10～200μg/kg，respectively were obtained for the method.This method is fast,esay and accurate for determination of sulfadimidine residues in chicken.

sulfadimidine;residue analysis；UPLC

10.3969/j.issn.1008-4754.2015.02.027