AP-1 和Smad3 雙功能誘騙寡核苷酸對L929 成纖維細胞增殖及纖維化介質表達的影響

亓俊華 聶 剛 徐 祥 黃 宏 劉曉萍 王曉慧 吳 梅

瘢痕形成是高等哺乳動物創傷愈合的自然結局，但瘢痕異常增生則會導致病理性瘢痕產生［1］。病理性瘢痕是創面過度修復和組織纖維化的結果，增厚的瘢痕組織不僅嚴重影響美觀，而且后期較易發生攣縮導致組織或器官移位變形，引起不同程度的功能障礙［2］。病理性瘢痕包括增生性瘢痕和瘢痕疙瘩兩種，其形成主要是由于不同原因所引起成纖維細胞的異常增殖和膠原纖維大量合成，最終導致細胞外基質中膠原成分過度沉積［4］。其中，成纖維細胞又被認為是病理性瘢痕形成的關鍵效應細胞［5］。對于病理性瘢痕的預防和治療一直是臨床上亟待解決的難題之一［3］。

本研究以病理性瘢痕形成和組織纖維化的關鍵環節為突破口，試圖設計并合成可同時抑制Smad3(small mothers against decapentaplegic 3)和AP - 1(activator protein 1)兩種轉錄因子轉錄活性的雙功能誘騙寡核苷酸轉染L929 成纖維細胞，競爭抑制活化AP-1 和Smad3 與啟動子區域的結合位點結合，進而抑制了L929 成纖維細胞的生長、增殖，旨在為進一步研發并制備治療病理性瘢痕和組織纖維化疾病的藥物奠定基礎。

材料與方法

1.材料:L929 成纖維細胞購自ATCC。脂質體轉染試劑LipofectamineTM2000(美國Invirtogen 公司)，96 孔酶聯板(美國Active Motif 公司的TransAMTMTranscription factor assay kits)，RPMI1640 培養基(Gibco 公司)，胎牛血清(杭州四季青公司)。D-Hanks、胰酶、TGF -β1、BSA(Hyclone 公司)。Fn抗體、TGF-β1 抗體、PAI -1 抗體、c -fos 抗體、Col1α2 抗體、CTGF 抗體和β-actin 抗體、二抗(Cell Signaling 公司)。隨機誘騙核苷酸序列、AP-1 陽性誘騙核苷酸序列、Smad3 陽性誘騙核苷酸序列及AP -1 和Smad3 雙功能誘騙核苷酸序列由華大基因合成