酸脂清膠囊對實驗大鼠急性痛風性關節炎模型IL-10和IL-1Ra的影響

朱金鳳 吳 萍

（青海大學醫學院，西寧，810010）

酸脂清膠囊對實驗大鼠急性痛風性關節炎模型IL-10和IL-1Ra的影響

朱金鳳 吳 萍

（青海大學醫學院，西寧，810010）

目的：通過觀察酸脂清膠囊的不同提取物對實驗大鼠痛風性關節炎模型IL-10和IL-1Ra的影響，研究酸脂清膠囊的抗炎機制和對痛風性關節炎軟骨破壞的影響，進一步指導臨床用藥。方法：酸脂清膠囊不同提取物（水提物，醇提物）給大鼠灌胃7d后，以尿酸鈉晶體造成大鼠急性痛風性關節炎模型，分別在造模后9 h和12 h隨機抽取8只大鼠測量踝關節直徑，下腔靜脈取血Elisa檢測IL-10和IL-1Ra的量。結果：三個藥物組的IL-10和IL-1Ra較模型組均有不同程度的升高，但水提組升高最為明顯（P＜0.05）。結論：酸脂清膠囊通過提高IL-10和IL-1Ra的水平，達到抗炎、保護關節軟骨的作用，尤以水提組為優。

酸脂清膠囊；急性痛風性關節炎；IL-10；IL-1Ra

急性痛風性關節炎是一種嚴重危害人類健康的代謝性疾病，急性發作主要表現為關節劇烈紅腫疼痛，病情多持久遷延，嚴重的滑膜炎癥伴隨痛風性關節炎反復發作會導致關節軟骨破壞。酸脂清膠囊是青海大學醫學院文紹敦教授開發的中藥膠囊制劑，臨床研究表明酸脂清膠囊對痛風及痛風性關節炎有良好的治療作用。大量炎癥因子參與疾病的發展導致嚴重的關節炎癥和軟骨破壞，但也有一部分炎癥因子有拮抗炎癥的作用，其中炎癥因子IL-10和IL-1Ra有明顯的抗炎及關節保護作用。本實驗擬通過酸脂清膠囊對急性痛風性關節炎模型大鼠IL-10和IL-1Ra的影響，研究其抗炎及關節保護作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 二級Wistar大鼠（200±20）g，雄性，蘭州大學醫學院實驗動物中心提供。

1.1.2 試驗藥物 酸脂清提取物的制備：按大黃100 g，姜黃33 g，土茯苓27 g的比例入藥，采用清水煎煮和95%乙醇索氏提取、濃縮后，稀釋成0.7 g/mL（生藥折合量）的溶液。羧甲基纖維素鈉（蒸餾水配制，2%）溶液中加入研細的秋水仙堿片制成5 mg/L的混懸劑。

1.1.3 主要試劑 尿酸鈉（批號：20120827，上海江萊生物科技有限公司提供），秋水仙堿片（批號：120401，通化盛和藥業股份有限公司提供），羧甲基纖維素鈉（批號：20120915，天津市百世化工有限公司提供），磷酸緩沖鹽溶液（緩沖液，Phosphate Buffersaline，PBS）為自行配制，高溫高壓滅菌備用。

1.1.4 主要設備 索氏提取器，旋轉蒸發儀RE-3000（上海亞榮生化儀器廠），恒溫水浴鍋，低溫冰箱（-80℃），TG16-WS高速離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發有限公司），恒溫箱（上海一恒科學儀器有限公司），酶標定量測定儀（深圳雷杜生命科學有限公司），游標卡尺（桂林可立德量器有限公司）。

1.1.5 Elisa試劑盒（48T） IL-10（批號：JFCX2876）、IL-1Ra（批號：JFCX1321）北京久峰潤達生物技術有限公司提供。

1.2 方法

1.2.1 實驗分組及給藥 按組間均衡原則，將80只大鼠隨機分為空白組、模型組、陽性對照組（秋水仙堿組）、水提酸脂清組、醇提酸脂清組，每組16只。空白組和模型組分別給予生理鹽水灌胃、三個藥物組分別給予秋水仙堿和酸脂清膠囊的水提物和醇提物10 mL/kg，2次/d，共7 d。

1.2.2 尿酸鈉晶體（尿酸鈉，Monosodium Urate，MSU）局部注射誘導大鼠急性關節炎模型 模型組及各藥物組于灌胃第7天最后一次灌胃0.5 h后大鼠抓握固定后測量右踝關節直徑，并選定踝關節外側后方為穿刺點向關節腔注入20 mg/mL MSU溶液100μL，誘導急性關節炎模型，空白組注射等體積的PBS。

1.2.3 樣本采集 造模9 h后各組隨機抽取實驗大鼠8只，以20%烏拉坦0.4 mL/100g腹腔麻醉，測量踝關節直徑，開腹下腔靜脈取血，存于普通真空采血管中，靜置0.5 h后3000 r/min離心10 min，取血清分裝于1.5 mL離心管中，-20℃保存。12 h后對剩余大鼠同樣進行麻醉后測量關節直徑、取血。

1.2.4 指標檢測 IL-10、IL-1Ra均按照實試劑盒說明書操作進行濃度檢測。

1.3 統計學方法 各檢測指標組間采用單因素方差分析，各指標9 h和12 h之間的比較采用獨立樣本t檢驗。

2 實驗結果

2.1 一般情況 除空白組外，造模后大鼠右踝關節均不同程度的紅腫、活動受限，部分出現三足行走現象。大鼠造模前后關節直徑變化見表1。

表1 造模前后大鼠關節直徑變化（mm，±s）

表1 造模前后大鼠關節直徑變化（mm，±s）

注：與空白組比較，△P＜0.05；與模型組比較，▲P＜0.05，與水提組比較，□P＜0.05，與醇提組比較，■P＜0.05。

時間空白組模型組水提組醇提組秋水仙堿組9 h 0.08±0.05 0.85±0.25△0.5±0.26△▲0.62±0.18△▲0.67±0.2△▲□12 h 0.07±0.05 0.91±0.17△0.71±0.25△▲0.75±0.25△▲1.02±0.35△□■t 0.114 4.386-0.303-0.627-0.350 P 0.916 0.012 0.313 0.548 0.548

2.2 酸脂清膠囊對實驗大鼠痛風關節炎模型IL-10和IL-1Ra的影響 造模9 h、12 h后，各組的IL-10和IL-1Ra均有不同程度的改變（見表2），模型組因炎癥反應抗炎因子濃度下降，各藥物組IL-10和IL-1Ra有不同程度的升高，部分藥物組IL-10和IL-1Ra濃度可以超過空白組（P＜0.05），其中以水提組IL-10和IL-1Ra濃度最高。

表2 IL-10和IL-1Ra檢測結果（ng·L-1，±s）

表2 IL-10和IL-1Ra檢測結果（ng·L-1，±s）

注：與空白組比較，*P＜0.05；與模型組比較，△P＜0.05；與水提組比較，▲P＜0.05，與醇提組比較，□P＜0.05。

組別IL-10 9 h 12 h P IL-1Ra 9 h 12 h P 00 59.395±3.654 0.987模型組44.376±4.837 45.167±4.987 0.704 52.618±8.896 51.065±6.343 0.805水提組64.791±9.175*△66.503±13.929*△0.824 71.276±10.21*△71.680±6.176*△0.942醇提組48.781±9.767▲50.154±9.475▲0.827 69.000±5.488△65.839±6.131△0.415秋水仙堿組61.379±8.561*△□51.355±8.424▲0.099 71.721±7.687*△64.290±10.598△空白組51.111±3.600 51.351±3.633 0.938 59.238±3.7 0.240

3 討論

3.1 酸脂清膠囊對痛風性關節炎關節炎癥的影響體外實驗表明細胞因子如IL-4、IL-10可抑制促炎癥性細胞因子的活性[1]。滑膜組織培育實驗表明IL -10可抑制IL-1β和TNF-α的生成，影響促炎性細胞因子mRNA的穩定性，使其水平下降[2]，還可增加由脂多糖刺激的單核細胞IL-1Ra的生成。IL-1Ra為滑膜細胞分泌的IL-1受體的天然拮抗劑，是一種IL-1與IL-1R相互結合的競爭性抑制物，可抑制IL-1β的信號傳遞，是IL-1有效的拮抗劑[3-4]。本實驗結果顯示酸脂清膠囊提取物可明顯升高模型大鼠血IL-1Ra和IL-10的濃度，表明酸脂清膠囊可通過升高血IL-1Ra和IL-10濃度發揮良好的抗炎作用，其中水提物效果較好。

3.2 酸脂清膠囊對關節軟骨破壞的影響 多種細胞因子可多方向調節軟骨細胞功能，IL-10是一種抑制或阻止軟骨細胞分解的細胞因子[5-7]，除可抑制直接破壞軟骨的IL-1[8]和TNF等炎性細胞因子的合成，還可抑制軟骨細胞NOS和MMPs的表達[9]，抑制滑膜組織中的組織蛋白酶K、骨性蛋白配體等[10]，從而阻止軟骨和關節破壞，同時它還提高I型膠原蛋白的合成水平，對關節軟骨有保護和修復作用[11-12]。IL-1Ra能特異性地抑制T細胞表面IL-1R與IL-1結合[13]，可抑制關節軟骨細胞凋亡[14]，在關節炎中起重要的關節保護作用。本實驗結果顯示痛風模型組IL -1Ra和IL-10濃度較其余各組顯著降低，說明痛風性關節炎發作時軟骨保護機制降低。酸脂清膠囊提取物可顯著升高血IL-1Ra和IL-10的濃度，Zhang等[15]使用基因轉染的手段把IL-1Ra基因注射到兔膝關節，使IL-1Ra的表達量增多，結果觀察到了關節軟骨損傷的減輕，故說明酸脂清膠囊有良好的關節軟骨保護作用，其中水提物作用較為明顯。

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（2013-05-22收稿 責任編輯：徐暉）

The influence of Suanzhiqing Capsules on IL-10 and IL-1Ra in Rats M odel w ith Acu te Gouty Arthritis

Zhu Jinfeng，Wu Ping
（Qinghai University，Qinghai810010，China）

Objective：To observe the effects of differentextractions of Suanzhiqing capsules on ratswith acute gouty arthritis.To study on the anti-inflammation mechanism and effect on cartilage damages in acute gouty arthritis rats.Methods：Water extractions and ethanol extractions of Chinesemedicines Suanzhiqing capsules were administrated intragastrically to the model rats.Seven days later，the ratswere given uric acid sodium to cause acute gouty arthritis.And after 9 hours and 12 hours，eight ratswere randomly selected each time in each group tomeasure the diameter of the ankle joint，and the contents of IL-1and IL-1Ra through Elisa method on the blood taken from inferior vena cava.Results：The level of IL-10 and IL-1Ra in themedicine groups were increased to some extent compared with the control group.Themost significant increase was observed in the water extraction group.Conclusion：Suanzhiqing capsules can raise the level of IL-10 and IL-1 to cure inflammation and protect articular cartilage，especially with itswater extraction group.

Suanzhiqing capsules；Acute gouty arthritis；IL-10；IL-1Ra

R243；R684.3

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.01.028

2012年度青海大學醫學院中青年教師科研基金團隊項目（編號：2012-KYT-01）

朱金鳳，E-mail：814043555＠qq.com