響應面法優化黑曲霉深層發酵產內切型菊粉酶工藝

李 娟，曹澤虹，李 超，高明俠，高兆建，王 春，陳 闊，靳衛濤，張晨杰，林占勝，李雪晴，王 娟

響應面法優化黑曲霉深層發酵產內切型菊粉酶工藝

李 娟，曹澤虹*，李 超，高明俠，高兆建，王 春，陳 闊，靳衛濤，張晨杰，林占勝，李雪晴，王 娟

（江蘇省食品資源開發與質量安全重點建設實驗室，江蘇省食品與生物工程實驗中心，徐州工程學院食品（生物）工程學院，江蘇 徐州 221008）

以黑曲霉菌種作為菌源，利用深層發酵法生產內切型菊粉酶。通過測定發酵液酶活力，從20株黑曲霉菌株篩選得到產菊粉酶活力最高的1 株黑曲霉菌株，酶活力為3.05 U/mL。通過單因素試驗對最佳工藝條件進行研究，結果表明：培養基裝液量為100 mL/250 mL、培養溫度30 ℃、接種量1 cm2/250 mL、轉速180 r/min、pH 5.0。在單因素試驗的基礎上，采用中心組合試驗原理設計響應面法優化工藝條件，得到最佳工藝條件為：發酵液裝液量 99 mL/250 mL、接種量0.99 cm2/250 m L、培養溫度31 ℃、轉速 180 r/min、pH 5.0。在此條件下，測得內切型菊粉酶的酶活力為 6.43 U/mL，比初始酶活力提高了 111%。

菊粉酶；黑曲霉；深層發酵；響應面法；工藝優化

低聚果糖（fructooligosaccharides）是在蔗糖分子的果糖殘基上以β-1,2-鍵結合1～3 個果糖的低聚糖。它是一種良好的雙歧因子和水溶性膳食纖維，低聚果糖甜度高、易溶解、能避免由蔗糖、葡萄糖引起的齲齒。其發熱量少，是功能食品原料之一[1-2]。工業上生產低聚果糖有兩種方法，一種是由蔗糖經β-果糖轉移酶（β-fructosyl transferase）或轉化酶（invertase）的轉果糖基反應而生成的蔗果糖類，其產品中副產物葡萄糖和蔗糖多，反應不易控制。另一種是由內切型菊粉酶水解菊粉而成，產物為低聚果糖和少量果糖，與傳統的以蔗糖作為原料生產低聚果糖的工藝相比，具有工藝簡單、生產成本低、低聚果糖含量高（70%～90%）等優點。微生物產生的菊粉酶是低聚果糖工業化生產的主要酶制劑。霉菌所產菊粉酶的最適溫度高、熱穩定性好、適宜偏酸性的環境，對于菊粉酶用于低聚果糖工業化生產及防止生產中的污染十分有利[3]。

目前，我國對于該項研究重點是高產菊粉酶菌株的篩選和發酵條件的確定。目前外切型菊粉酶的報道較多，而對于內切型菊粉酶的研究報道較少。華僑大學的羅顛輝[4]從腐爛的牛蒡根際土壤中篩選出1菌株，為黑曲霉AC1，利用牛蒡菊糖為原料生產低聚果糖，酶活力可達26.41 U/mL。湖北工業大學的陳雄[5]利用固體發酵篩選得到1 株克魯維酵母S120高產菊粉酶菌株，酶活力達118.28 U/g干質量。河北農業大學的祝彥忠等[6]用黑曲霉Ur-2利用紫外線和60Co ?射線誘變選育出菊粉酶高產菌株，其酶活力達180.33 ?mol/（min·mL）。在我國，中國農業科學院飼料研究所、湖北大學、大連輕工業學院、西北農業大學等已經開展研究，利用菊芋、雪蓮果等植物中的菊粉作為原料，通過黑曲霉、酵母等微生物產生的菊粉酶進行酶法生產低聚果糖，并申請了相關的國家發明專利。但利用菊糖生產低聚果糖的生產卻仍未實現[7]。

本實驗以徐州工程學院食品與生物工程實驗中心酶工程實驗室保藏的黑曲霉菌種作為菌源，利用深層發酵法生產內切型菊粉酶；利用單因素試驗和響應面法對內切型菊粉酶發酵生產工藝進行優化，以期獲得內切型菊粉酶生產的最佳工藝條件, 為利用牛蒡生產低聚果糖的工業化生產奠定一定的理論基礎。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與培養基

牛蒡 徐州市百惠佳美時超市；菊糖 美國Sigma公司。

20 株黑曲霉菌株為徐州工程學院食品與生物工程實驗中心酶工程實驗室保藏。

初篩培養基：牛蒡汁3 mL（0.2g/mL）、蛋白胨1 g、酵母膏1 g、瓊脂2 g、水100 mL，pH值自然。誘導培養基：牛蒡汁10 mL（0.2 g/mL）、酵母膏1 g、磷酸氫二鉀1.5 g、瓊脂 2g、水100 mL，pH值自然。發酵培養基：牛蒡汁2 mL（0.2 g/mL）、牛肉膏1.6 g、磷酸氫二鉀0.5 g、磷酸氫二銨1.6 g、氯化鈉0.5 g、瓊脂2 g、水100 mL，pH值自然[4-7]。以上培養基配制好后，在121 ℃溫度條件下高壓滅菌30 min。

1.2 儀器與設備

7230G型可見分光光度計、FA2104N電子天平 上海精密科學儀器有限公司；PC-1000數顯式電熱恒溫水浴鍋、GZX-DH-600電熱恒溫干燥箱 上海躍進醫療器械廠；HYG型回旋式恒溫調速搖瓶機 上海欣蕊自動化設備有限公司；YXQ-SG46-280S手提式壓力蒸汽滅菌鍋 上海博迅實業有限公司醫療設備廠；250D恒溫光照培養箱 常州國華電器有限公司；SW-CJ-IF潔凈工作臺 蘇州安泰空氣技術有限公司；BCD-13OH TB海爾冰箱 青島海爾股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 牛蒡汁的制備

取鮮牛蒡去皮、洗凈，稱取濕質量300 g加入沙冰機中，加適量水攪碎，用四層紗布過濾，濾渣適量加水重復壓濾，濾液濃度為300 g牛蒡出300 mL汁（即為0.2 g/mL牛蒡汁），pH值自然，0.1 MPa滅菌30 min備用。

1.3.2 內切型菊粉酶酶活力的測定[3-8]

內切型菊粉酶酶活力的測定方法：發酵液經過6 000 r/min離心10 min，取一定濃度的酶液1.0 mL，加4.0 mL的牛蒡菊糖溶液，50 ℃條件下反應10 min，用3,5-二硝基水楊酸法測定產生還原糖的量，即向各管中加入3,5-二硝基水楊酸1.5 mL混勻，置于沸水浴中加熱5 min，取出立即用自來水冷卻至室溫，加蒸餾水定容至25 mL，充分混勻，在540 nm波長處測定各管的OD540nm值，以葡萄糖含量為橫坐標和OD540nm值為縱坐標繪制出標準曲線，獲得回歸方程y＝0.018x－0.004 9（R2=0.999 1），計算酶活力。內切型菊粉酶活力單位定義為：在pH 5、50 ℃條件下每分鐘水解菊糖生成1 μmol還原糖所需的酶量為1 個酶活力單位。

1.3.3 黑曲霉菌株的活化與篩選[6-14]

活化3 代，將保藏的20 株菌株分別接種于初篩培養基斜面培養基上，30 ℃恒溫培養3 d；待黑曲霉孢子長出后，再接種于初篩培養基斜面上30℃恒溫培養2 d；待黑曲霉孢子長出后，再接種于誘導培養基在培養皿上30 ℃恒溫培養2 d。待黑曲霉孢子長出后，取1 cm2的孢子及培養基接種于裝有80 mL發酵培養基的250 mL三角瓶中，置于搖瓶中，在30 ℃、180 r/min的條件下培養4 d，發酵液過濾后，取1 mL測定發酵液的酶活力，篩選出酶活力最高的菌株。

1.3.4 內切型菊粉酶發酵生產工藝單因素試驗[3-6,10]

1.3.4.1 最佳發酵培養基裝瓶量的選擇

在250 mL的錐形瓶中分別加入60、80、100、120、140 mL的發酵培養基，將酶活最高的菌株接種于發酵培養基中，接種量為1.0 cm2的孢子及培養基/250 mL，在30 ℃、180 r/min條件下搖瓶培養4 d后，測定發酵液的酶活力，確定最佳發酵培養基裝瓶量。

1.3.4.2 最佳接種量的選擇

在250 mL的錐形瓶中加入100 mL的發酵培養基，再分別加入0.2、0.6、1.0、1.4、1.8 cm2的孢子及培養基，在30 ℃、180 r/min條件下搖瓶培養4 d后測定發酵液的酶活，確定最佳菌種接種量。

1.3.4.3 最佳發酵溫度的選擇

在250 mL的錐形瓶中加入100 mL的發酵培養基，再接入1.0 cm2的孢子及培養基，分別在24、27、30、33、36 ℃溫度下，在180 r/min條件下搖瓶培養4 d后，測定發酵液的酶活，確定最佳發酵溫度。

1.3.4.4 最佳轉速的選擇

在250 mL的錐形瓶中加入100 mL的發酵培養基，再接入1.0 cm2的孢子及培養基，分別用120、150、180、210、240 r/min的轉速，在30 ℃條件下搖瓶培養4 d后，測定發酵液的酶活，以確定最佳轉速。

1.3.4.5 最佳pH值的選擇

在250 mL的錐形瓶中加入100 mL的發酵培養基，再接入1.0 cm2的孢子及培養基，分別在pH 4.0、4.5、5.0、5.5和6.0條件下，30 ℃、180 r/min條件下搖瓶培養4 d后，測定酶活力，確定最佳pH值。

1.3.5 響應面法優化發酵工藝條件[15-22]

在單因素試驗結果基礎上，采用中心組合試驗（central composite design，CCD）原理設計方案，對裝液量（X1）、接種量（X2）和溫度（X3）進行曲面響應試驗設計，并以＋1、0、－1分別代表變量的水平，按方程xi＝（Xi－X0）/ΔX對自變量進行編碼，其中，xi為變量的編碼值，Xi為變量的真實值，X0為試驗中心點變量的真實值，ΔX為變量的變化步長，酶活力為響應值（Y）。采用SAS對實驗數據進行回歸分析。

1.3.6 黑曲霉的菌種鑒定[23-25]

將菌樣寄給生工生物工程（上海）股份有限公司進行菌種鑒定，對菌種的18S rDNA進行全序列分析，然后利用基因庫進行比對，最后建立系統進化樹，確定菌種所屬。

2 結果與分析

2.1 黑曲霉菌株的活化與篩選

以牛蒡汁為碳源，20 株黑曲霉菌株在發酵培養基中產生的酶活力結果如表1所示。菌株08013的酶活力最高，為3.05 U/mL，后期實驗以08013菌株作為實驗菌株。

表1 20 株黑曲霉菌株的酶活力Table 1 Endoinulinase activities of twenty Aspergillus niger strains

2.2 內切型菊粉酶發酵工藝條件單因素試驗

2.2.1 最佳發酵培養基裝瓶量的確定

圖1 發酵培養基裝瓶量對內切型菊粉酶活力的影響Fig.1 Effect of culture medium volume on the endoinulinase activity

如圖1所示，當發酵培養基的裝瓶量從60 mL/250 mL到 100 mL/250 mL時，內切型菊粉酶的酶活力呈上升趨勢，當發酵培養基的裝瓶量為100 mL/250 mL時，內切型菊粉酶的酶活力最高，為6.27 U/mL；當裝瓶量繼續增加時，內切型菊粉酶的酶活力呈下降趨勢，說明在100 mL/250 mL時，發酵培養基中的營養物質的量與微生物的接種量達到最合適的比例，因此內切型菊粉酶的酶活達到最高。

2.2.2 最佳菌種接種量的確定

圖2 菌種接種量對內切型菊粉酶活力的影響Fig.2 Effect of inoculum concentration on the endoinulinasec activity

如圖2所示，當菌種接種量從0.2 cm2/250 mL到1 cm2/250 mL時，內切型菊粉酶的酶活力呈上升趨勢，當菌種接種量為1 cm2/250 mL時，內切型菊粉酶的酶活力最高，為6.41 U/mL；當菌種接種量從1.0 cm2/250 mL到1.8 cm2/250 mL時，內切型菊粉酶的酶活力呈下降趨勢，說明在菌種接種量為1 cm2/250 mL時，菌種數量和培養基的營養物質的量達到最適合的比例，因此內切型菊粉酶的酶活力達到最高。

2.2.3 最佳發酵溫度的確定

圖3 發酵溫度對內切型菊粉酶活力的影響Fig.3 Effect of culture temperature on the endoinulinase activity

如圖3所示，當發酵溫度從24 ℃升至30 ℃時，內切型菊粉酶的酶活力呈上升趨勢，當發酵溫度為30 ℃時，內切型菊粉酶的酶活力最高，為6.42 U/mL；當發酵溫度從30 ℃升至36 ℃時，內切型菊粉酶的酶活力呈下降趨勢，說明在30 ℃時，菌株的生長達到最佳狀態，酶活力達到最高。

2.2.4 最佳轉速的確定

圖4 搖瓶機轉速對酶活力的影響Fig.4 Effect of shaking speed on the endoinulinase activity

如圖4所示，當搖瓶機轉速從120 r/min升至180 r/min時，內切型菊粉酶的活力呈上升趨勢，當搖瓶機轉速為180 r/min時，內切型菊粉酶的活力最高，為6.42 U/mL；當轉速繼續升高時，內切型菊粉酶的活力呈下降趨勢，說明當搖瓶機轉速為180 r/min時，培養基中的含氧量最適合菌種的發酵生產，酶活力也最高。

2.2.5 最佳pH值的確定

如圖5所示，當發酵培養基pH值從4.0升至5.0時，內切型菊粉酶的活力呈上升趨勢；當pH值為5.0時，內切型菊粉酶的活力最高，為6.28 U/mL；當pH值從5.0升至6.0時，內切型菊粉酶的活力呈下降趨勢，說明該酶適合在偏酸性條件下發揮作用。

圖5 pH值對內切型菊粉酶活力的影響Fig.5 Effect of medium pH on the endoinulinase activity

2.3 響應面法優化發酵工藝條件

2.3.1 模型的建立及其顯著性檢驗

根據以上單因素試驗結果，選取發酵培養基裝瓶量、菌種接種量和發酵溫度這3 個影響比較大的因素為主要因素，采用CCD響應面試驗設計方案，試驗結果和方差分析如表2、3所示。

表2 CCD優化試驗設計方案及結果Table 2 Central composite design scheme and results for the optimization of fermentation conditions

由表3可知，模型具有極顯著性（P＜0.01），失擬項（P＞0.05）不顯著以及R2Adj＝0.985和信噪比（RSN）為33.292，遠大于4，可知回歸方程擬合度和可信度均很高，試驗誤差較小，說明模型相關度很好，自變量與響應值之間存在線性關系，模型是非常顯著的，因此，回歸方程可以較好地描述各因素與響應值之間的真實關系，可以用于最佳發酵工藝條件的優化，所以可以使用該模型來分析響應值的變化。

表3 回歸方程的方差分析Table 3 Analysis of variance for the regression equation

2.3.2 響應曲面分析與優化

根據回歸分析結果，作出相應曲面圖和等高線圖，如圖6所示。響應值存在最大值，各參數間的等高線呈橢圓形，相互作用顯著，而且能清晰地看到最高點。說明裝瓶量與接種量之間、裝瓶量與溫度之間、溫度與接種量之間的相互作用顯著，所以可以對裝瓶量、接種量、溫度3 個作用比較顯著的因素進行分析計算，從而得出最佳發酵工藝條件。

經SAS軟件分析計算，得到最佳發酵工藝條件為：發酵培養基裝瓶量99 mL/250 mL、菌種接種量0.99 cm2/250 mL、溫度31 ℃，此時酶活力可達6.43 U/mL，比初始菌株的酶活力提高了111%。

2.3.3 驗證實驗

為檢驗CCD試驗設計所得結果的可靠性，在上述最優條件下進行3 次平行實驗，實際測得的平均酶活力為6.42 U/mL，與預測值基本相符，因此基于CCD驗設計所得的最佳發酵工藝條件準確可靠，具有實用價值。

2.4 黑曲霉菌株的鑒定

通過對實驗菌株08013的18S rDNA進行全序列分析，得到1 308 bp長的序列。將該序列用GenBank進行比對，根據同源性分析表，建立系統進化樹如圖7所示。08013菌株與GU226429菌株黑曲霉（Aspergillus niger）的同源性達到99%，所以鑒定菌株08013為黑曲霉（Aspergillus niger）。

圖7 黑曲霉菌株的系統發育進化樹Fig.7 Phylogenetic tree of Aspergillus niger strains

3 結 論

對實驗室原有保藏的20 株黑曲霉菌株活化和發酵，通過測定發酵液酶活，篩選出1 株編號為08013的內切型菊粉酶菌株，其酶活力為3.05 U/mL。通過對08013菌株的發酵生產工藝的單因素試驗，得出各單因素的最佳條件：最佳發酵培養基裝瓶量為100 mL/250 mL，最佳溫度為30 ℃，最佳菌種接種量為1 cm2/250 mL；最佳轉速為180 r/min；最佳pH值為5.0。在單因素試驗的基礎上，采用CCD響應面法軟件優化工藝條件，得到最佳工藝條件為：發酵液裝瓶量99 mL/250 mL、菌種接種量 0.99 cm2/250 mL、溫度31 ℃、轉速180 r/min、pH 5.0，在此條件下，測得內切型菊粉酶的酶活為 6.43 U/mL。通過對發酵工藝條件的優化，使最終酶活力比初始酶活（3.05 U/mL）提高了111%。

通過對實驗菌株08013的18S rDNA進行全序列分析，再進行基因庫比對，建立系統進化樹，得知08013菌株為黑曲霉（Aspergillus niger）。

[1] VISWANATHAN P, KULKARNI P R. Full factorial design to study fermemtative production of inulinases using inulin from kuth (saussurealappa) root powder by Aspergillus niger van teighemu UV11 mutant[J]. Bioresource Technology, 1995, 54: 117-121.

[2] GOUDA M K. Some properties of inulinase from Aspergillus fumigatus[J]. Biological Sciences, 2002, 5(5): 589-593.

[3] 李文利, 曹澤虹, 董玉瑋, 等. 黑曲霉原生質體誘變選育內切型菊粉酶生產菌株的研究[J]. 食品科學, 2012, 33(9): 144-148.

[4] 羅巔輝, 王昭晶. 利用牛蒡菊糖篩選產菊糖酶菌株的研究[J]. 福建師范大學學報: 自然科學版, 2006, 22(4): 88-96.

[5] 陳雄. 內切型菊粉酶高活力菌株的篩選[J]. 湖北農業科學, 2003(3): 93-94.

[6] 祝彥忠, 賈英民, 桑亞新, 等. 黑曲霉Uγ- 2菊粉酶發酵條件的研究[J]. 中國食品學報, 2006, 6(4): 58-60.

[7] 華承偉, 王建華, 滕達, 等. 菊粉化學和微生物菊粉內切酶研究進展[J].中國食品學報, 2004, 4(4): 103-108.

[8] CASTRO G R, BAIGORI M D, SINERIZ F. A plate technique for screening of inulin degrading microorganisms[J]. Microbiological Methods, 1995, 22: 51-56.

[9] CASTRO G R, BAIGORI M D, SINERIZ F. A plate technique for screening of inulin degrading microorganisms [J]. Microbiological Methods, 1995, 22: 51-56.

[10] 唐艷斌, 許波, 唐湘華, 等. 產菊粉酶曲霉菌株的篩選和發酵條件的優化[J]. 飼料研究, 2008(7): 32-35.

[11] FLOOD A E, RUTHERFORD P P, WESTON E W. Effects of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid on enzyme systems in Jerusalem artichoke tubers and Chicory roots[J]. Nature, 1967, 214: 1049-1053.

[12] 李云雁, 胡傳榮. 試驗設計與數據處理[M]. 2版. 北京: 化學工業出版社, 2009: 199-201.

[13] 北京大學生物系生物化學教研室. 生物化學實驗指導[M]. 北京: 高等教育出版社, 1979: 122-241.

[14] 袁玉蓀, 朱婉華, 陳鈞輝. 生物化學實驗[M]. 2版. 北京: 高等教育出版社, 1988: 118-121.

[15] 孫子羽, 遲乃玉, 李兵, 等. 響應面法優化產低溫生淀粉糖化酶發酵培養基[J]. 食品工業科技, 2008, 29(4): 50-89.

[16] 陶躍中, 姜輝, 舒志愚, 等. 響應面法優化茯苓菌絲體多糖的提取工藝研究[J]. 安徽農業科學, 2010, 38(17): 9095-9097; 9364.

[17] 田智斌, 董超, 史延茂, 等. 納豆激酶固態發酵工藝參數的兩種不同設計方法優化[J]. 食品與發酵工業, 2013, 39(1): 134-141.

[18] 吳現芳, 趙成愛, 余梅燕, 等. 響應面法優化八寶景天葉總黃酮的超聲提取工藝[J]. 食品工業科技, 2013, 34(1): 224-228.

[19] 楊曉紅, 王元秀, 鄭明洋. 響應面法優化啤酒酵母海藻糖提取工藝[J].濟南大學學報: 自然科學版, 2013, 27(3): 270-274.

[20] 葛靜微, 羅均, 李小定, 等. 響應面分析法優化血紅素提取工藝[J].食品科學, 2010, 31(8): 60-64.

[21] 楊濤, 盛歡歡, 李巖. 星點設計-響應面法優化穿心蓮提取工藝[J]. 中國藥學雜志, 2011, 46(3): 208-213.

[22] 黃元紅, 衛天喜, 張發生, 等. 星點設計-響應面法優選丹參提取工藝[J].中國實驗方劑學雜志, 2010, 16(17): 28-31.

[23] 李秀婷, 孫寶國, 宋煥祿, 等. 一株高產木聚糖酶的枝鏈霉菌的分離鑒定及產酶[J]. 微生物學通報, 2010, 37(6): 791-797.

[24] 李輝, 劉光全, 程池. 2株酸梅湯飲料污染霉菌的分離與鑒定研究[J].中國食品學報, 2009, 9(6): 182-186.

[25] 汪鵬榮, 劉偉芬, 陳文靜, 等. 1株高產多糖紅曲霉菌株的分離鑒定及生物學特性研究[J]. 微生物學雜志, 2011, 31(2): 13-16.

Optimization of Submerged Fermentation Conditions by Response Surface Analysis for Endoinulinase Production by Aspergillus niger

LI Juan, CAO Ze-hong*, LI Chao, GAO Ming-xia, GAO Zhao-jian, WANG Chun, CHEN Kuo, JIN Wei-tao, ZHANG Chen-jie, LIN Zhan-sheng, LI Xue-qing, WANG Juan

(Jiangsu Key Construction Laboratory of Food Resource Development, Quality and Safety, Jiangsu Experiment Center of Food and Biological Engineering, College of Food (Biology) Engineering, Xuzhou Institute of Technology, Xuzhou 221008, China)

Aspergillus niger 08013, showing the highest endoinulinase activity of 3.05 U/mL was screened from 20 Aspergillus niger strains conserved in our laboratory. The results of one factor-at-a-time experiments showed that the appropriate fermentation conditions were 100 mL of medium in a 250-mL triangular flask, 30 ℃, an inoculum size of 1 cm2/250 mL, shaking at a speed of 180 r/min and pH 5.0. The optimal fermentation conditions were determined by central composite design and response surface methodology to be 99 mL of medium in a 250-mL triangular flask, 31 ℃, an inoculum size of 0.99 cm2/250 mL, shaking at a speed of 180 r/min and pH 5.0. Under the optimized conditions, the activity of endoinulinase produced by the strain 08013 was 6.43 U/mL, which was increased by 111% as compared to the initial activity before the optimization, 3.05 U/mL.

inulinase; Aspergillus niger; submerged fermentation; response surface analysis; optimization

TS201.3

A

1002-6630（2014）09-0207-06

10.7506/spkx1002-6630-201409041

2013-09-29

江蘇省高校自然科學研究計劃項目（07KJD550202）；徐州市科技發展指導性計劃項目（XZZD1204）；徐州工程學院校級培育課題（XKY2011109）；2013年度國家星火計劃項目（2013GA690418）；江蘇省高校自然科學研究項目（13KJD550006）；徐州市科技計劃項目（XF12C028）；江蘇省大學生實踐創新訓練計劃項目（XCX2014039）

李娟（1991—），女，本科，研究方向為食品加工技術。E-mail：82484948@qq.com

*通信作者：曹澤虹（1963—），女，副教授，本科，研究方向為食品生物技術與酶工程。E-mail：czh001001@163.com