氯化錦葵色素-3-半乳糖苷對TNF-α誘導內皮細胞炎癥的抑制作用

王 健，黃午陽，李春陽，鄭其升，劉婭梅

氯化錦葵色素-3-半乳糖苷對TNF-α誘導內皮細胞炎癥的抑制作用

王 健1,2，黃午陽1,*，李春陽1，鄭其升3，劉婭梅3

（1.江蘇省農業科學院農產品加工研究所，江蘇 南京 210014；2.南京農業大學食品科技學院，江蘇 南京 210095；3.江蘇省農業科學院 國家獸用生物制品技術研究中心，江蘇 南京 210014）

目的：研究氯化錦葵色素-3-半乳糖苷對細胞腫瘤壞死因子（tumour necrosis factor-α，TNF-α）誘導人臍靜脈內皮細胞（human vascular umbilical endothelial cells，HUVEC）所產生炎癥的抑制作用。方法：設立分組，空白組（二甲基亞砜）、10 μg/L TNF-α刺激組、濃度為1、10、50、100 μmol/L氯化錦葵色素-3-半乳糖苷＋10 μg/L TNF-α刺激組，通過酶聯免疫吸附劑測定方法檢測細胞上清中可溶性細胞間黏附因子（intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1）蛋白含量的變化；用實時熒光定量聚合酶鏈式反應檢測細胞中ICAM-1 mRNA表達量變化；Western blotting檢測ICAM-1及核因子κB抑制蛋白（IκBα）蛋白含量的變化；通過免疫熒光方法測定核轉錄因子κB（nuclear transcription factor-κB，NF-κB）核異位的變化。結果：氯化錦葵色素-3-半乳糖苷呈濃度依賴性的抑制TNF-α誘導HUVEC相應蛋白表達，同時結果顯示抑制作用與NF-κB信號通路有關。結論：氯化錦葵色素-3-半乳糖苷抑制TNF-α誘導HUVEC的炎癥反應。一般心血管疾病產生的原因中包括因促炎癥因子引起的內皮功能障礙及產生的炎癥，氯化錦葵色素-3-半乳糖苷的抗炎癥作用為防治心血管疾病提供了一定的理論基礎。

氯化錦葵色素-3-半乳糖苷；人臍靜脈內皮細胞；腫瘤壞死因子；炎癥反應；細胞間黏附因子；核轉錄因子

細胞炎癥引起的內皮細胞損傷可以促使白細胞及單核細胞聚集，繼而黏附于血管內壁引發血管功能障礙[1]。細胞間黏附因子（intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1）主要表達于活化的T細胞、血管內皮細胞等表面，在正常情況下很少表達或不表達，當受到細胞因子刺激時表達明顯增加[2]。促炎癥細胞因子（TNF-α、IL-6、Ang-Ⅱ）可以誘導內皮細胞表達相應蛋白，能顯著增強血管內皮細胞ICAM-1蛋白和mRNA的表達，促進炎癥發生及發展進程[3-4]。

抗氧化物質對氧化應激引起的血管內皮系統損傷具有防治作用[5-6]。花青素是迄今為止所發現的最有效的天然水溶性抗氧化劑。藍莓作為功能性食品，其果實中花青素含量很高而且種類豐富，具有抗炎癥、增強心臟功能、改善循環、防止腦神經衰老、明目及抗癌等獨特功效[7]。研究也發現抗氧化物質花青素中重要組分如錦葵色素-3-葡萄糖苷及白藜蘆醇具有抗動脈粥樣硬化作用[8-9]。

對于藍莓花青素的提取分離及抗氧化能力方面研究甚多，但在分子基礎研究藍莓花青素抗炎癥的很少，而野生種藍莓中各花青素中錦葵色素的含量最高[10]。本研究以氯化錦葵色素-3-半乳糖苷為對象，研究其在內皮細胞內抑制炎癥因子的作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

3～6代人臍靜脈內皮細胞 江蘇省農科院國藥中心保存；氯化錦葵色素-3-半乳糖苷 美國Sigma公司；ICAM-1 ELISA試劑盒、兔抗人ICAM-1一抗、鼠抗人β-actin一抗、羊抗兔IgG、羊抗鼠IgG 博士德公司；兔抗人IκBα一抗、NF-κB核轉運試劑盒 碧云天公司；Trizol、逆轉錄試劑盒、SYBR Premix Ex Taq試劑盒 日本TaKaRa公司。

1.2 儀器與設備

YDS-10B液氮罐 四川西亞低溫設備有限公司；Airtech超凈工作臺 蘇州安泰空氣技術有限公司；5% CO2細胞培養箱 美國Thermo Electron公司；Axiovert-40C倒置顯微鏡、熒光顯微鏡 德國蔡司公司；TDZ4-W5小型離心機 上海啟湘儀器有限公司； BG25金屬浴 明基公司；Western blotting電泳儀 美國Bio-Rad公司；JY-300C轉膜儀 北京君意儀器公司；酶標儀Awareness技術公司；凝膠成像系統 美國UVP公司；PCR儀 日本TaKaRa公司。

1.3 方法

1.3.1 細胞培養、傳代[11]

復蘇液氮凍存的3～6代人臍靜脈內皮細胞，37℃融化，1 000 r/min離心3 min，吹打細胞，37℃，5% CO2培養箱培養24 h換液，繼續培養待細胞長至80%～90%，進行傳代。

1.3.2 樣品制備

取1.891 mL二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）溶解1 mg的氯化錦葵色素-3-半乳糖苷制備成1 μmol/mL的原液，根據要求分別稀釋到最終濃度為1、10、50、100 μmol/L。

細胞進行6 孔板培養，設立分組：空白組 （DMSO）、TNF-α （10 μg/L）刺激組、濃度為1、10、50、100 μmol/L氯化錦葵色素-3-半乳糖苷（malvidin-3-galactoside chloride，Mv-3-gal-Cl）＋10 μg/L TNF-α刺激組，預先加入不同質量濃度的氯化錦葵色素-3-半乳糖苷刺激18 h，再加入10 μg/L TNF-α刺激6 h。

1.3.3 酶聯免疫吸附測定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）法測定細胞上清可溶性ICAM-1蛋白含量[12]

細胞經不同分組藥物刺激，取細胞上清，按一定比例稀釋，根據ELISA試劑盒進行操作，在酶標儀450 nm波長處測定OD值。

1.3.4 Western blotting測定細胞中ICAM-1及IκBα蛋白含量[13]

棄6 孔板培養液，裂解細胞得到蛋白樣品，12%十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）進行電泳。PVDF膜進行濕轉1.5 h，取膜37 ℃封閉、孵育一抗各1 h，TBST洗5 次，每次6 min， 37℃孵育二抗1 h，TBST洗滌，DAB顯色，拍照分析數據。

1.3.5 實時熒光定量PCR測定細胞中ICAM-1 mRNA含量

在GenBank查詢到目的基因β-actin、ICAM-1的mRNA序列，根據引物原則設計引物。β-actin：正向引物5’-CCACAGTCACCT-ATGGCAAC-3’和反向引物5’-AGTGTCTCCT GGCTCTGGTT-3’；ICAM-1：正向引物5’-CCACAGTCACCT-ATGGCAAC-3’和反向引物5’-AGTGTCTCCT GGCTCTGGTT-3’。棄6孔板培養基進行細胞總RNA提取[14-15]，根據PrimeScript RT Master Mix配制反應體系，37 ℃，15 min，85 ℃，5 s；繼而PCR反應，根據瓊脂糖電泳檢驗cDNA及引物質量；根據SYBR Real Time PCR 反應試劑盒配制PCR反應液，用所有的測試樣本和校準樣本，采用2-’Ct計算細胞中ICAM-1 mRNA表達水平比率。

1.3.6 免疫熒光法檢測NF-κB核轉運變化[16]

將細胞懸浮液鋪96孔細胞板，設立分組與重復，待細胞長至90%時棄培養液，根據碧云天NF-κB激活-核轉運檢測試劑盒進行操作，在熒光顯微鏡下觀察NF-κB（p65）紅色熒光和細胞核藍色熒光亮度變化。

1.4 統計方法

數據以SPSS 18.0統計軟件進行統計分析。所有變量以x±s表示。多組均數間采用單因素方差分析，兩兩之間比較采用Dunnett-t檢驗。

2 結果與分析

2.1 氯化錦葵色素-3-半乳糖苷對細胞表達ICAM-1蛋白的影響

表1 不同濃度Mv-3-gal-Cl對TNF--α誘導的人臍靜脈內皮細胞ICAM--1蛋白表達的影響（x±s，n=3）Table 1 Effect of Mv-3-gal-Cl on TNF-α-induced ICAM-1 protein expression in HUVECss (x±s, n=3)

圖1 不同濃度Mv-3-gal-Cl對TNF--α誘導的人臍靜脈內皮細胞中ICAM-1表達的影響Fig.1 Effect of Mv-3-gal-Cl at various concentrations on TNF-αinduced ICAM-1 protein expression in HUVECs

由表1和圖1可知，通過ELISA及Western blotting方法檢測不同濃度Mv-3-gal-Cl對細胞上清和細胞中ICAM-1蛋白水平的表達影響時發現，正常HUVEC細胞在未激活的狀態下只有少量ICAM-1蛋白表達，在受到TNF-α誘導刺激下，ICAM-1表達顯著增加。在細胞孵育不同濃度Mv-3-gal-Cl與TNF-α后，ICAM-1的表達明顯下降，并呈濃度依賴性。濃度為1～50 μmol/L時，細胞上清中ICAM-1可溶性蛋白抑制效果明顯（P＜0.01）；濃度為100 μmol/L時，抑制效果差異性很顯著（P＜0.001）。在濃度為10、50、100 μmol/L時，細胞中ICAM-1蛋白水平比較降低明顯，抑制率分別為45.38%、54.61%、93.84%，具有顯著性差異（P＜0.05）。

2.2 氯化錦葵色素-3-半乳糖苷對細胞表達ICAM-1 mRNA的影響

為了檢測Mv-3-gal-Cl如何在mRNA水平上抑制細胞表達ICAM-1，即采用實時熒光定量PCR檢測細胞中ICAM-1 mRNA表達量的變化，用內參歸一法確定相對表達量，由圖2可知，單獨TNF-α刺激細胞時ICAM-1 mRNA的表達量明顯增加；同時孵育不同濃度的Mv-3-gal-Cl和TNF-α時，ICAM-1的相對mRNA的表達量隨濃度的增加而降低。在濃度為1 μmol/L時，細胞中ICAM-1 mRNA表達量相對較低（P＜0.05）；在濃度為10、50、100 μmol/L時，細胞中ICAM-1 mRNA表達量相對單獨TNF-α刺激組的抑制率為79.96%、87.94%、106.26%，具有明顯顯著性差異（P＜0.01），從而對細胞具有一定的保護作用。

圖2 不同濃度Mv-3-gal-Cl對TNF--α誘導的人臍靜脈內皮細胞中ICAM-1 mRNA 表達的影響Fig.2 Effect of Mv-3-gal-Cl at various concentrations on TNF-αinduced ICAM-1 mRNA expression in HUVECs

2.3 氯化錦葵色素-3-半乳糖苷對細胞IκBα表達的影響

圖3 不同濃度Mv-3-gal-Cl對TNF-α誘導的人臍靜脈內皮細胞中IIκBα表達的影響Fig.3 Effect of Mv-3-gal-Cl at various concentrations on TNF-αinduced IκBα expression in HUVECs

圖4 不同濃度Mv-3-gal-Cl對TNF-α誘導的人臍靜脈內皮細胞中IIκBα表達的影響Fig.4 Effect of Mv-3-gal-Cl at various concentrations on TNF-αinduced IκBα expression in HUVECs

采用Western blotting檢測細胞質中IκBα蛋白表達量的變化，由圖3、4可知，正常細胞未受到刺激時IκBα未被酸化，含量很高。在受到TNF-α刺激時，細胞質中IκBα相對含量明顯降低，IκBα被降解。當不同濃度的Mv-3-gal-Cl和TNF-α同時作用時，Mv-3-gal-Cl明顯抑制TNF-α誘導的內皮細胞中IκBα的泛酸化降解，并且呈濃度依賴性。在濃度為1 μmol/L時，細胞中IκBα相對含量低（P＜0.05）；在濃度為10、50、100 μmol/L相比單獨TNF-α刺激組具有顯著性意義（P＜0.01）。

2.4 氯化錦葵色素-3-半乳糖苷對細胞核NF-κB表達的影響

圖5 不同濃度的Mv-3-gal-Cl對TNF-α誘導的人臍靜脈內皮細胞中NNFF--κB核異位的變化Fig.5 Effect of Mv-3-gal-Cl at various concentration on TNF-αinduced NF-κB nuclear translocation in HUVECs

由圖5可知，通過免疫熒光法檢測NF-κB轉入核內情況發現，細胞未受刺激時核內NF-κB的含量很低，熒光強度很弱。在單獨受到TNF-α刺激時，NF-κB被激活，大量的轉入細胞核內，捕捉的熒光強度變強。不同濃度Mv-3-gal-Cl和TNF-α同時作用下Mv-3-gal-Cl抑制了核轉錄因子NF-κB的激活，阻止其進入核內進而轉錄翻譯各種相應蛋白，因而熒光強度漸漸變弱，抑制作用呈濃度依賴性。濃度為100 μmol/L時，熒光強度接近于正常組，具有顯著意義。

3 結論與討論

眾所周知，細胞因子網絡不僅參與維護正常血管的功能，而且參與涉及血管的各種病理過程。近年研究表明，心血管疾病的發生及發展是細胞通過分泌生長因子、趨化因子及其他細胞因子而相互調控的結果。ICAM-1在靜息的白細胞、內皮細胞呈低水平表達，維持正常的細胞生理作用[17]。然而當細胞受到外界炎癥因子TNF-α、IL-6、IFN-γ的刺激作用下，ICAM-1在纖維細胞、內皮細胞、淋巴細胞等表達迅速上調，影響細胞活力及正常功能[18-19]。大量的研究證實氧化應激亦可引起血管內皮功能障礙，而抗氧化物質對細胞具有保護作用，可抑制炎癥的發生發展[20]。本研究從分子機理上研究抗氧化物藍莓花青素氯化錦葵色素-3-半乳糖苷的抗炎癥作用機理，結果顯示氯化錦葵色素-3-半乳糖苷通過抑制NF-κB信號通路的激活減少TNF-α誘導的炎癥因子ICAM-1蛋白和mRNA的過表達，并且抑制活性呈濃度依賴性。

TNF-α刺激內皮細胞表達ICAM-1蛋白主要是通過激活NF-κB信號傳導途徑實現[21]；本研究通過Western blotting檢測細胞質中IκBα蛋白得出，正常細胞中IκBα相對含量比較高，當受到TNF-α介導時，IκBα蛋白含量降低，驗證了IκBα被磷酸化，隨即被泛酸連接酶識別而被降解[22]；而當孵育不同濃度氯化錦葵色素-3-半乳糖苷時，IκBα相對表達量相比刺激組呈濃度依賴性，具有顯著性抑制作用。此外，通過免疫熒光檢測NF-κB核轉運情況也得到相應結果，單獨TNF-α組捕捉的NF-κB熒光強度最強，NF-κB是與它的抑制性亞基IκB分開并進人核內激活靶基因轉錄[23]；隨著不同濃度的氯化錦葵色素-3-半乳糖苷的刺激，NF-κB熒光強度相對于對照組漸漸變弱，證實了氯化錦葵色素-3-半乳糖苷能阻止NF-κB的激活進入核內轉錄翻譯。

總之，氯化錦葵色素-3-半乳糖苷作為花青素中的重要組成部分及營養物質，通過抑制NF-κB信號傳導途徑抑制黏附因子ICAM-1在蛋白及mRNA水平上的表達，從而對TNF-α誘導內皮細胞炎癥具有一定抑制作用，防止內皮細胞損傷及紊亂，具有抗炎癥作用。由于一般心血管疾病產生的原因中包括因為促炎癥因子引起的內皮功能障礙及產生的炎癥，氯化錦葵色素-3-半乳糖苷的抗炎癥作用為防治心血管疾病提供了一定的理論基礎。

[1] PRICE D T, LOSCALZO J. Cellular adhesion molecules and atherogenesis[J]. American Journal of the Medical Sciences, 1999, 107(1): 85-97.

[2] DUSTIN M L, ROTHLEIN R, BHAN A K, et al. Induction by IL-1 and interferon-gamma: tissue distribution, biochemistry, and function a natural adherence molecule (ICAM-1) [J]. Journal of Immunology, 1986, 137(1): 245-254.

[3] ZHOU Zhe, LIU Yong, MIAO A D, et al. Protocatechuic aldehyde suppresses TNF-α-induced ICAM-1 and VCAM-1 expression in human umbilical vein endothelial cells[J]. European Journal of Pharmacology, 2005, 513(1/2): 1-8.

[4] CHAI Hui, WANG Qiuyan, HUANG Lifeng, et al. Ginsenoside Rb1 inhibits tumor necrosis factor-alpha-induced vascular cell adhesion molecule-1 expression in human endothelial cells[J]. Biological Pharmaceutical Bulletin, 2008, 31(11): 2050-2056.

[5] AQIL F, GUPTA A, MUNAGALA R, et al. Antioxidant and antiproliferative activities of anthocyanin/ellagitannin-enriched extracts from Syzygium cumini L.(Jamun, the Indian blackberry) [J]. Nutrtion and Cancer: an International Journal, 2012, 64(3): 428-438.

[6] NIE, ZHAO Zhiping, CHEN Guoping, et al. Brassica napus possesses enhanced antioxidant capacity via heterologous expression of anthocyanin pathway gene transcription factors[J]. Journal of Plant Physiology, 2013, 60(1): 108-115.

[7] SMITH M A L, MARLEY K A, SEIGLER D, et al. Bioactive properties of wild blueberry fruits[J]. Journal of Food Science, 2000, 65(2): 352-356.

[8] PAIX?O J, DINIS T C P, ALMEIDA L M. Malvidin-3-glucoside protects endothelial cells up-regulating endothelial NO synthase and inhibiting peroxynitrite-induced NF-κB activation[J]. Chemico-Biological Interactions, 2012, 199: 192-200.

[9] 沈陽輝. 白藜蘆醇抗動脈粥樣硬化作用分子機制的研究[D]. 福州:福建醫科大學, 2007.

[10] HOSSEINIAN F S, BETA T. Saskatoon and wild blueberries have higher anthocyanin contents than other Manitoban berries [J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2007, 55(26): 10832-10838.

[11] FINKENZELLER G, GRANER S, KIRKPATRICK C J, et al. Impaired in vivo vasculogenic potential of endothelial progenitor cells in comparison to human umbilical vein endothelial cells in a spheroid-based implantation model[J]. Cell Proliferation, 2009, 42(4): 498-505.

[12] BELLA J, KOLATKAR P R, MARLOR C W, et al. The structure of the two amino-terminal domains of human ICAM-1 suggests how it functions as a rhinovirus receptor and as an LFA-1 integrin ligand[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences, 1998, 95(8): 4140-4145.

[13] YUAN Mingjie, HUANG Congxing, TANG Yanhong, et al. A novel peptide ghrelin inhibits neural remodeling after myocardial infarction in rats[J]. European Journal of Pharmacology, 2009, 618(1/3): 52-57.

[14] ZAPATA E, VENTURA J K, RODRIGUEZ E, et al. Dehydroepiandrosterone inhibits the proliferation of HUVEC by enhancing the expression of p53 and p21, restricting the phosphorylation of RB, and is androgen- and estrogen-receptor independent[J]. Federation of European Biochemical Societies Journal, 2005, 272(6): 1343-1353.

[15] MIGEON C J, KELLER A R, LAWRENCE B, et al. Dehydroepiandrosterone and androsterone levels in human placenta. Effect of age and sex: dayto-day and diural variations[J]. Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism, 1957, 17: 1051-1062.

[16] XU Zhiwei, LIN Shiqing, WU Weikang, et al. Ghrelin prevents doxorubicin-induced cardiotoxicity through TNF-alpha/NF-kappaB pathways and mitochondrial protective mechanisms[J]. Toxicology, 2008, 247(2/3): 133-138.

[17] HUANG W Y, CHAKRABART S, MAJUMDER K, et al. Eggderived peptide IRW inhibits TNF-α-induced inflammatory response and oxidative stress in endothelial cells[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2010, 58(20): 10840-10846.

[18] HUNG C F, HUANG T F, CHEN B H, et al. Lycopene inhibits TNF-α-induced endothelial ICAM-1 expression and monocyte-endothelial adhension[J]. Journal of Pharmacology, 2008, 586(1/3): 275-282.

[19] 丁偉斌, 梁統, 周克元. 原花青素二聚體B2對大鼠滑膜細胞NF-κB核轉運及炎癥因子表達的影響[J]. 中國藥理學通報, 2012, 28(6): 803-806.

[20] NOGUCHI N, HANYU R, NONAKA A, et al. Inhibition of THP-1 cell adhesion to endothelial cells by alphatocopherol and alphatocotrienol is dependent on intracellular concentration of the antioxidants[J]. Free Radical Biology and Medicine, 2003, 34(12): 1614-1620.

[21] ZHOU Z, CONNELL M C, MacEWAN D J. TNFR1-induced NF-κB, but not ERK, p38MAPK or JNK activation, mediates TNF-induced ICAM -1 and VCAM-1 expression on endothelial cells [J]. Cell Signal, 2007, 19(6): 1238-1248.

[22] HAYDEN M S, GHOSH S. Signaling to NF-kappaB[J]. Genes & Development, 2004, 18(18): 2195-2224.

[23] YAMOMOTO Y, GAYNOR R B. IκB kinses: key regulators of the NF-kappaB pathway[J]. Trends Biochemistry Science, 2004, 29(2): 72-79.

Inhibitory Effect of Malvidin-3-Galactoside Chloride on TNF-α-Induced Inflammation in Endothelial Cells

WANG Jian1,2, HUANG Wu-yang1,*, LI Chun-yang1, ZHENG Qi-sheng3, LIU Ya-mei3

(1. Institute of Farm Product Processing, Jiangsu Academy of Agricultural Science, Nanjing 210014, China; 2. College of Food Science and Technology, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China; 3. National Technical Research Centre of Veterinary Biological Products, Jiangsu Academy of Agricultural Science, Nanjing 210014, China)

Objective: The effect of malvidin-3-galactoside chloride (Mv-3-gal-Cl) on TNF-α-induced inflammation in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) was investigated in this study. Methods: HUVEC were treated with TNF-α (10 μg/L) alone and combined with Mv-3-gal-Cl (1, 10, 50 and 100 μmol/L), respectively. DMSO was used as control. The soluble ICAM-1 protein content in cell supernatant wa s detected by ELISA. The change in ICAM-1 mRNA expression level in cells was detected by RT-PCR. The expression of ICAM-1 and IкBα was assessed by Western blotting. The activity of NF-кB was evaluated by immunofluorescence. Results: Mv-3-gal-Cl appeared to specifically down-regulate the TNF-α-induced cell surface expression of ICAM-1 and ICAM-1 mRNA expression and protein release from HUVEC cells in a concentration-dependent manner. The inhibitory effect of Mv-3-gal-Cl on protein expression might be associated with the suppression of NF-κB in HUVECs. Conclusion: Mv-3-gal-Cl can inhibit TNF-α-induced inflammation in HUVECs. The anti-inflammatory effect of Mv-3-gal-Cl provides a theoretical basis for preventing and treating pro-inflammatory cytokinesinduced endothelial dysfunction and cardiovascular diseases resulting from inflammation.

malvidin-3-galactoside chloride (Mv-3-gal-Cl); human umbilical vein endothelial cell (HUVEC); tumor necrosis factor-α; inflammatory effect; intercellular cell adhesion molecule-1 (ICAM-1); NF-kappa B

R329.25；R332

A

1002-6630（2014）09-0241-05

10.7506/spkx1002-6630-201409047

2013-06-09

國家自然科學基金青年科學基金項目（NSFC31101264）；江蘇省自然科學基金項目（RK2011677）；

江蘇省農業自主創新項目（cx（12）5029）

王健（1988—），女，碩士研究生，研究方向為營養與功能食品。E-mail：wangjian454348952@126.com

*通信作者：黃午陽（1979—），女，副研究員，博士，研究方向為營養與功能食品。E-mail：wuyanghuang@hotmail.com