天冬種子油營養成分分析及 鎮靜催眠作用觀察

王森弘，唐 清，尚芳紅，周衍晶，徐曉玉

天冬種子油營養成分分析及 鎮靜催眠作用觀察

王森弘，唐 清，尚芳紅，周衍晶，徐曉玉*

（西南大學藥學院，重慶市藥效評價工程技術研究中心，重慶 400716）

目的：研究天冬種子油的理化性質和營養成分含量，觀察天冬種子油對小鼠的鎮靜催眠作用，并評價其急性毒性。方法：采用中國油脂標準方法測定天冬種子油基本營養成分和理化性質；氣相色譜-質譜聯用法分析不皂化物成分；原子吸收分光光度計（atomic absorption spectrometry，AAS）法檢測 礦質元素含量；以KM種小鼠為受試動物，研究天冬種子的鎮靜催眠作用，并考察其急性毒性。結果：天冬種子油水分含量為1.87 g/100 g、灰分含量為0.15 g/100 g、粗脂肪含量為96.6 g/100 g、VE含量為405.55 μg/g；不皂化物主要為烷烴類化合物（17%）和甾醇類化合物（41.8%）；天冬種子油中含量較高的礦質元素有鈉（297.92 μg/g）、鎂（216.88 μg/g）、鈣（145 μg/g）；天冬種子油4.65 g/kg和2.33 g/kg劑量組對小鼠自主活動有明顯抑制 作用，且能顯著增加閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠只數；一次性灌胃最大給藥量40 mL/kg（37.24 g/kg），連續觀察14 d，未見死亡或體質量、活動等異常。結論：天冬種子油含有豐富的營養成分，具有安神鎮靜的作用，并且安全性較高。

天冬種子油；營養成分；安神鎮靜；急性毒性

天冬（Radix Asparagi）又名天門冬，屬百合科（Liliaceae）天門冬屬常綠藤本植物，是我國傳統的中藥材，2002年被衛生部列為藥食兩用植物，并且廣泛用于保健食品。在貴州、四川、廣西、浙江、云南等地有著大面積種植，其傳統入藥部分為天冬塊根，具有養陰清熱、潤肺滋腎的功效[1]。天門冬每年5—6月開花、9—10月果實成熟，漿果內含黑色種子1～3 粒[2]。天冬種子經二氧化碳超臨界萃取后可得橙黃色的種子油，出油率約為7.8%，其不飽和脂肪酸占總脂肪酸的82.85%，主要為油酸和亞油酸等[3]。

迄今為止有關天冬種子油成分的研究僅有1 篇碩士學位論文提及[3]，未見專門的研究論文發表。為了研究天冬種子油的營養成分和藥用價值，本實驗采用食用植物油脂營養與功能評價的重要指標[4]，對天冬種子油礦質元素和不皂化物等營養成分進行了分析，并初步分析天冬種子油的安神鎮靜作用和急性毒性實驗，為其食用、藥用價值及安全性進行初步評價。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

天冬種子油為橙黃色油狀液體，由重慶秀山縣紅星公司提供（批號：2 012092301）。以天冬種子原油為最高質量濃度0.931 g/mL，用吐溫-80分別將原油稀釋成0.465 g/mL和0.233 g/mL，儲存備用。

吐溫-80 北京鼎國生物技術有限公司；地西泮注射液（用吐溫-80稀釋成0.6 mg/mL溶液） 天津金耀氨基酸有限公司；戊巴比妥鈉片（50 mg/片） 美國Merck公司；其余試劑均為國產分析純。

1.2 動物

KM種小鼠（體質量18～22 g，SPF級） 重慶中藥研究院實驗動物研究所。其飼養和使用均符合中國《實驗動物管理條例》。

1.3 儀器與設備

2300型凱氏自動定氮儀 美國Foss公司；2010 plus型氣-質聯用儀（gas chromatography-mass spectrometer，GC-MS） 日本島津公司；TAS-990型原子吸收分光光度計 北京普析通用儀器有限責任公司；ZZ-6小鼠自主活動測試儀 成都泰盟科技有限公司；EL2046電子天平梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

1.4 方法

1.4.1 基本營養成分分析

水分：采用水分測定儀進行測定；灰分：參照GB/T5009.124—2003《食品中氨基酸的測定》馬弗爐灼燒法測定；粗蛋白：參照GB5009.5—2010《食品中蛋白質的測定》微量凱氏定氮儀法測定；粗脂肪：參照GB/T5009.6—2003《食品中脂肪的測定》，酸式水解法測定；VE：參照GB/T 5009.082—2003《食品中維生素A和維生素E 的測定》高效液相色譜法測定；酸值：參照GB/T 5530—2005《動植物油脂 酸值和酸度測定》測定；碘值：參照GB/T 5532—2008《動植物油脂 碘值的測定》測定；皂化值：參照GB/T 5534—2008《動植物油脂 皂化值的測定》測定。

1.4.2 不皂化物GC-MS分析

1.4.2.1 樣品處理

準 確稱取5.0 g試樣于燒瓶中，加入50 mL KOH乙醇溶液（18 g KOH溶于240 mL 95%乙醇），沸水浴回流1 h。停止加熱后，加入100 mL蒸餾水稀釋，冷卻后將溶液移至分液漏斗。用100 mL乙醚分次洗燒瓶，合并洗液至分液漏斗。靜置分層，取上層液用乙醚重復萃取3次，合并萃取液于一個裝有40 mL蒸餾水的分液漏斗，震搖，靜置分層后棄去下面水層。用KOH水溶液洗滌提取液至中性，沸水浴上蒸干，105 ℃烘干，準確稱質量，計算不皂化物質量分數。將殘留的不皂化物溶于三氯甲烷中，以10 000 r/min離心10 min后取上清液檢測。

1.4.2.2 色譜條件

色譜柱為DB-5MS（30 mm×0.25 mm，0.25 μm）柱；載氣為氦氣；進樣口溫度280 ℃；分流進樣，分流比20∶1；程序升溫：起始溫度120 ℃，以10 ℃/min速率升溫至280 ℃后保持5 min；電離方式EI，電子轟擊能量70 eV，離子源溫度250 ℃，傳輸線溫度280 ℃，質量掃描范圍m/z 40～400，電子倍增器電壓1.0 kV，進樣量1 μL。各種成分的定性均與NIST05.LIB譜庫對照，定量計算用峰面積歸一化法計算其相對含量[5]。

1.4.3 礦質元素分析

稱取天冬種子油樣品1.0 g置于50 mL錐形瓶中，加入消化液10 mL（V（硝酸）∶V（高氯酸）=4∶1）混勻，150 ℃油浴加熱消化至澄清透明。放冷，用5%硝酸溶液洗滌錐形瓶，洗液轉入25 mL容量瓶中，稀釋至刻度，原子吸收光譜法（atomic absorption spectrometry，AAS）進行檢測[6]。檢測條件如表1所示。

表1 原子吸收光譜儀工作條件Table 1 AAS working conditions

1.4.4 天冬種子油鎮靜催眠作用的研究

1.4.4.1 天冬種子油對小鼠自主活動的影響

KM種雌性小鼠55 只，編號后按隨機數表法分為5組，分別為吐溫-80溶劑對照組、地西泮對照組（6 mg/kg）、天冬種子油9.31 g/kg組、4.65 g/kg組、2.33 g/kg（以體質量計）組，每組11 只。將小鼠放入ZZ-6小鼠自主活動測試儀中，每個小室放1 只小鼠，適應5 min，然后記錄5 min內小鼠自主活動次數作為正常值。根據之前配好的藥物濃度，各組均按0.1 mL/10 g腹腔注射給藥，給藥30 min后，測定小鼠5 min內自主活動次數，統計各組小鼠活動次數，并對結果用t檢驗進行組間比較，若P＜0.05，則認為有統計學差異[7]。

1.4.4.2 天冬種子油對閾下劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠只數的影響

取雌性KM種小鼠55 只，編號后按隨機表法隨機分為5 組，每組11 只。分別為溶劑對照組、地西泮組（6 mg/kg）、天冬種子油9.31 g/kg組（以體質量計，下同）、4.65 g/kg組、2.33 g/kg組。根據之前配好的藥物濃度，各組均按0.1 mL/10 g腹腔注射給藥1 次，給藥30 min后，腹腔注射閾下劑量戊巴比妥鈉45 mg/kg，以小鼠翻正反射消失1 min以上為入睡指標。統計各組入睡小鼠數，組間比較用卡方檢驗進行統計分析，若P＜0.05，則認為有統計學差異。

1.4.5 急性毒性實驗

KM種小鼠20 只，雌雄各半，體質量為（20±2）g。適應性飼養3 d后，按預實驗得出的最大灌胃量40 mL/kg，一次性灌胃給藥。給藥前禁食12 h，不禁水，給藥3 h后恢復給食。連續觀察14 d，異常觀察指標參照《急性毒性試驗異常現象與可能涉及的靶點對照表》[8]。分別稱量給藥后3、7、14 d小鼠體質量，統計小鼠體質量變化情況。14 d后，處死小鼠，解剖觀察其內部臟器變化。

1.5 數據處理

所有實驗數據均采用SPSS 18.0進行處理。

2 結果與分析

2.1 基本營養成分

天冬種子油中水分含量為1.87 g/100 g，灰分含量為0.15 g/100 g，VE含量為405.6 μg/g，樣品中未能檢測出蛋白質。測定結果顯示，天冬種子油的酸值為（11.30±0.32）mg KOH/g、碘值為（98.47±0.24）g/100 g、皂化值為（ 186.35±0.45）mg KOH/g、密度為（0.93±0.15）g/mL。

2.2 不皂化物測定結果

通過計算得出天冬種子油中不皂化物含量為1.98%，經NIST05.LIB譜庫對照，共確定19種不皂化物成分。對天冬種子油的GC-MS分析總離子流圖如圖1所示，各物質含量如表2所示。天冬種子油中不皂化物成分主要為甾醇類化合物（41.08%）、異瑟模環烯醇（9.36%）、薯蕷皂苷元（10.08%）和烴類化合物（15.04%）。其中，甾醇類化合物以菜油甾醇和豆甾醇為主，占到了總量的23.9%。此外，天冬種子油中還含有少量三花生精、γ-生育三烯酚、反式角鯊烯等活性物質。

圖1 天冬種子油不皂化物的GC-MS總離子流圖Fig.1 TIC of unsaponifiable matters in Radix Asparagi seed oil

表2 天冬種子油不皂化物組成Table 2 Composition of unsaponifiable matters in Radix Asparagi seed oil

2.3 礦質元素分析結果

表3 天冬種子油礦質元素含量Table 3 Mineral contents of Radix Asparagi seed oil

由表3可知，通過原子吸收分光光度法檢測，天冬種子油中常量元素有鈣、磷、鉀、鈉、鎂，微量元素有鐵、錳、鉻、鎳、銅、鋅。其中鈉元素的含量最高，為297.92 μg/g；其次是鎂元素和鈣元素，分別為216.88 μg/g和145.00 μg/g，微量含量較少，錳元素僅為1.05 μg/g。

2.4 天冬種子油與其他油類營養成分比較

由表4可知，將天冬種子油中蛋白質、脂肪、維生素、礦質元素含量與市場上的色拉油、花生油、菜籽油等常見油類做橫向對比[9]，這些油脂中其蛋白質含量均不能檢出，而天冬種子油脂肪含量更低，維生素含量很高僅低于芝麻油，微量元素及其礦物質含量更高。

表4 天冬種子油與其他油類營養成分的對比Table 4 Nutrient contents ofRadix Asparagi seed oil as compared with those of other vegetable oils

2.5 天冬種子油鎮靜催眠實驗結果

2.5.1 天冬種子油對小鼠自主活動的影響結果

圖2 天冬種子油對小鼠自主活動的影響Fig.2 Effect of Radix Asparagi seed oil on autonomic activities in mice

如圖2所示，同溶劑對照組相比，各劑量天冬種子油均對小鼠自主活動有抑制作用，9.31 g/kg劑量組雖然活動次數減少，但統計結果無顯著性差異（P＞0.05）。4.65 g/kg劑量組、2.33 g/kg劑量組使小鼠的自主活動顯著減少（P＜0.01），結果說明低劑量的天冬種子油具有鎮靜作用。

2.5.2 天冬種子油對閾下劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠只數的影響結果

圖3 天冬種子油對閾下劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠只數的影響Fig.3 Effect of Radix Asparagi seed oil on the number of sleeping mice

如圖3所示，與溶劑對照組比較，天冬種子油9.31 g/kg組對閾下劑量戊巴比妥鈉誘導的小鼠入睡率有所增加，但差異無統計學意義（P＞0.05）。天冬種子油4.65 g/kg組、2.33 g/kg組對閾下劑量戊巴比妥鈉誘導的小鼠入睡率有明顯增加，差異具有顯著統計學意義（P＜0.01）。

2.6 急性毒性實驗結果

表5 天冬種子油對小鼠的急性毒性Table 5 Acute toxicity off Radix Asparagi seed oil on mice as indicated by body weight and mortality rate

由表5可知，以40 mL/kg體質量的劑量給藥后2 h內，小鼠自主活動減少，10 h后逐漸恢復正常。通過分析小鼠第3、7、14 天體質量，顯示其隨著時間的增加而增加，變化趨勢符合正常組小鼠的生長曲線[10]。在兩周觀察期內小鼠全部活動正常，且無一死亡；經解剖觀察，其主要臟器也未見明顯變化。

3 討 論

在食用油脂中不皂化物具有重要的生物活性[4]。植物甾醇是一種重要的天然活性物質，它具有維持生物體內環境穩定、控制糖原和物質代謝、調節應激反應等生理作用[11]，同時還可通過阻礙膽固醇的吸收起到降血脂的作用[12]。但人體不能合成植物甾醇，只有通過體外攝取。薯蕷皂苷元有降血脂、抗菌、消炎等作用[13]，而且是一種潛在的抗腫瘤活性物質，它可以誘導白血病巨核細胞分化，對多種腫瘤細胞具有明顯的抑制作用[14]。生育三烯酚與生育酚一樣“僅由植物合成”，但生育三烯酚在植物中的分布并不廣[15]，生育三烯酚則具有抗氧化、抗癌、降低膽固醇、預防動脈粥樣硬化以及保護神經系統等作用[16-17]。

本實驗對天冬種子油不皂化物進行分析顯示，其不皂化物中植物甾醇相對含量為41.8%，主要是菜油甾醇、豆甾醇等。薯蕷皂苷元相對含量為10.08%，生育三烯酚含量為3.41%。這些物質都擁有降血脂、降低膽固醇、抗腫瘤的共性，因此推斷，天冬種子油可能也具有這些藥效作用。

同市售常見食用油相比[9]，各種油中蛋白質含量均為零，天冬種子油脂肪含量要低3%左右，主要是因為油中還含有一些不皂化物成分。VE含量為405.55 μg/g，高于色拉油。礦質元素對生長和發育起著至關重要的作用，它們經常同蛋白質的形成相關[18]。天冬種子油中常量元素含量相對較高，鈉元素為297.92 μg/g、鎂元素為216.88 μg/g、鈣元素的含量為145 μg/g，其中鈉是細胞外液中帶正電的主要離子，參于水的代謝，是保證體內水的平衡的主要離子[19]。

鎮靜催眠作用初步實驗提示，中低劑量（4.65 g/kg和2.33 g/kg）的天冬種子油能明顯抑制小鼠的自主活動，并增加對閾下劑量戊巴比妥鈉所致小鼠睡眠只數，而高劑量組（9.31 g/kg）雖然有鎮靜催眠的趨勢，但不具備統計學意義。天冬種子油鎮靜催眠作用有待進一步驗證，有關藥效物質及其機制有待進一步研究分析。

急性毒性實驗結果顯示，天冬種子油的最大耐受劑量大于40 mL/kg，說明天冬種子油對小鼠沒有明顯的急性毒性[20]，可初步確定天冬種子油的食用安全性。但天冬種子油是否具有長期毒性還需要做進一步的毒理實驗證明。

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Nutritional Composition Analysis of Radix Asparagi Seed Oil and Its Sedative and Hypnotic Effects

WANG Sen-hong, TANG Qing, SHANG Fang-hong, ZHOU Yan-jing, XU Xiao-yu*
(Chongqing Engineering Research Center for Pharmacodynamics Evaluation, College of Pharmacetical Sciences, Southwest University, Chongqing 400716, China)

Objective: The aims of this study were to research the physico-chemical properties and nutrient contents of Radix Asparagi seed oil, to observe the sedative-hypnotic effects in mice and to evaluate its acute toxicity. Methods: The physicochemical properties of Radix Asparagi seed oil were determined according to the Chinese national standard method. Its unsaponifiable matters were detected by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). The contents of mineral elements were measured by atomic absorption spectrophotometry (AAS). KM mice were used to evaluat e its acute toxicity and to observe its effects on spontaneous motion and synergism with pentobarbital sodium at a subliminal dose in mice. Results: The contents of moisture, ash, crude fat and vitamin E of the seed oil were determined to be 1.87 g/100 g, 0.15 g/100 g, 96.6 g/100 g and 405.55 μg/g, respectively. The results of GC-MS analysis showed that the unsaponifiable matters mainly contained sterol compounds (41.8%) and hydrocarbon compound (17%), etc. A variety of minerals were detected, with sodium, magnesium and calcium being d ominant at levels of 297.92, 216.88 and 145 μg/g, respectively. When administered at doses of 4.65 and 2.33 g/kg, the oil had obvious inhibitory effect on spontaneous motion in mice, and greatly incr eased the number of sleeping mice induced by pentobarbital sodium at subliminal dose. During the 14-day observation period after a maximum single dose of the seed oil, no mice died and no abnormality in body weight or motion was observed. Conclusion: Radix Asparagi seed oil is rich in nutrients, has the sedative-hypnotic effect and is of high safety.

Radix Asparagi seed oil; nutritional components; sedative-hypnotic effect; acute toxicity

TS22

A

1002-6630（2014）09-0264-05

10.7506/spkx1002-6630-201409052

2013-07-03

2013年重慶高校創新團隊建設計劃項目；秀山縣人民政府資助項目（XS20120610）

王森弘（1989—），男，碩士研究生，研究方向為藥物分析。 E-mail：senhong1516@yahoo.cn

*通信作者：徐曉玉（1956—），女，教授，碩士，研究方向為中藥藥理。 E-mail：xxy0618@sina.com