藥性理論指導的附子配伍減毒試驗研究

張廣平朱曉光楊海潤張思玉葉祖光

（1中藥復方新藥開發國家工程研究中心，北京，100075；2中國中醫科學院，北京，100700）

“973”專題——確有療效的有毒中藥科學應用關鍵問題的基礎研究

藥性理論指導的附子配伍減毒試驗研究

張廣平1朱曉光1楊海潤1張思玉1葉祖光2

（1中藥復方新藥開發國家工程研究中心，北京，100075；2中國中醫科學院，北京，100700）

目的：以附子為研究對象，試驗研究基于藥性理論的附子配伍減毒的科學性，以探討附子配伍減毒的新途徑。方法：對以寒制熱、以甘緩毒、以柔克剛、調正抑毒等四種附子配伍減毒理論進行驗證性的毒理學試驗，在試驗中采用急性毒性和心臟毒性相結合的試驗方法。結果：附子配伍寒性藥物具有配伍減毒作用，和其他三種配伍減毒相比較，以寒制熱的配伍減毒作用最強。結論：以藥性理論為指導的配伍減毒可以使有毒中藥配伍減毒一種新的思路和方法。

藥性理論；配伍減毒；附子

附子為毛茛科植物烏頭（Aconitum carmichaeli Debx.）的子根的加工品，味辛、甘，性溫、大熱，有毒，入心、脾、腎經，始載于《神農本草經》，被譽為“回陽救逆第一品藥”。附子為藥典“有毒”中藥，臨床常見的不良反應為心律失常[1]。我國古代先賢應用附子積累了豐富的配伍減毒的經驗，如附子相殺、相畏配伍減毒理論已經被現代研究證實具有一定的科學性[2]。除了上述相殺相畏配伍減毒之外，通過對含附子方劑的文獻學研究，發現用于附子配伍減毒的藥性理論大致有四種[3]：以寒制熱、以甘緩毒、以柔克剛、調正抑毒。本實驗的宗旨則是基于上述中藥藥性理論進行附子配伍減毒的研究。

1 實驗材料

藥材：附子（黑順片），產地，四川；大棗，產地，山東；木通，產地，四川；梔子，產地，江西；大黃，產地，四川；黃芩，產地，河北；黃連，產地，四川。

均購自北京仁衛飲片廠。

實驗藥物的制備：附子加10倍量水浸泡45 min，水沸騰后第1次煎煮30 min，第2次加6倍量水，水沸后煎煮30 min。4層紗布過濾，合并2次煎液，將濾液水?。?0℃）濃縮后置冰箱冷藏保存備用。附子與其他各藥物不同比例（3∶1，1∶1，1∶3）煎劑制備方法同附子。

儀器：16道生理記錄儀：美國BIOPAC公司生產。

實驗動物：ICR小鼠，SPF級，18～22 g；SD大鼠，SPF級，230～250 g，動物合格證號：SCXK（京）2006-0008，購自北京大學醫學部。動物房實驗設施為屏障系統，溫度20～24℃，相對濕度為40%～70%，人工光照，12 h明暗周期。為大、小鼠標準顆粒飼料。

2 實驗方法

2.1 不同配伍比例藥物對附子急性毒性影響 ICR小鼠，體重18～22 g，雌雄各半，適應性觀察3 d。小鼠禁食16 h，按照設計的劑量給藥1次，給藥體積0.4 mL／10 g體重。給藥當天，尤其是給藥后4 h密切觀察動物的毒性反應情況（如一般表現、呼吸、活動及有無驚厥等）、中毒癥狀發生的時間、持續時間、恢復情況，記錄所觀察到的變化，采用Bliss法計算半數致死劑量（LD50）。

2.2 不同配伍比例甘草對附子心臟毒性的影響 SD大鼠，體重230～250 g，雌雄各半。大鼠在實驗前禁食不禁水16 h，稱重，3%戊巴比妥腹腔注射麻醉（30 mg／kg體重），動物仰面固定，使用MedLab生物信號采集系統記錄動物心電圖狀況，正向電級插入動物右上肢，負向電級插入動物左下肢，底線接右下肢，連續觀察10 min，心電圖有異常者棄用，選用心電圖正常動物進行下一步實驗。動物腹部75%乙醇消毒，打開動物腹腔，從胃幽門部進針，十二指腸注射給藥，2 m L／100 g體重。藥后，使用MedLab生物信號采集系統連續觀察60 min，以心臟出現各類型的心律失常為心臟中毒的觀察指標。

3 實驗結果

3.1 附子配伍各藥物后對附子急性毒性和心臟毒性表現影響 單用附子急性毒性，小鼠灌胃給藥后，動物精神萎靡，中毒動物出現喘氣，繼而呼吸停止死亡；部分動物出現驚厥。給藥后20 min動物開始出現死亡，存活動物在給藥后12 h恢復正常飲水和進食。附子配伍各藥物組的動物中毒表現特征同單用附子。附子對大鼠的心臟毒性主要表現為異常的QRS波。心律失常主要發生在給藥后20～45 min之間。附子配伍各藥物的合煎液心臟毒性表現的與單用附子相似。

3.2 附子配伍各藥物后對附子LD50的影響 以寒制熱選擇附子配伍大黃；附子配伍黃芩、黃連；附子配伍梔子；附子配伍木通觀察配伍前后對附子毒性的影響。

實驗結果：同單用附子比較，附子配伍各藥后能夠不同程度的增加附子的半數致死劑量，附子配伍大黃、黃芩三種不同比例由于給濃度的限制未能夠測出LD50。附子配伍黃連、梔子、木通在配伍藥物高比例時減毒明顯。心臟毒性與急性毒性具有良好的一致性。大黃、黃芩、黃連、梔子、木通能夠提高附子急性毒性的LD50和心臟毒性的TD50，提示具有拮抗附子毒性的作用。對附子的減毒作用：大黃＞黃芩＞木通＞梔子＞黃連。結果見表1。

3.3 以甘緩毒 選擇附子配伍甘草；附子配伍大棗通觀察配伍前后對附子毒性的影響。

實驗結果：之前研究結果顯示[4]，附子配伍甘草有明顯的減毒作用，且減毒作用與甘草比例有一定的關系。附子配伍大棗后對附子的毒性沒有明顯影響。心臟毒性與急性毒性具有良好的一致性。結果見表2。

表1 附子配伍各藥LD50和TD50

表2 附子配伍各藥LD50和TD50

3.4 以柔克剛 選擇附子配伍地黃（熟地黃、生地黃）；附子配伍山藥；附子配伍白芍通觀察配伍前后對附子毒性的影響。

實驗結果：單用附子配伍山藥急性毒性LD50升高，但是對心臟毒性沒有明顯影響。附子配伍生地黃、熟地黃、白芍后對其毒性沒有明顯影響，結果見表3。

表3 附子配伍各藥LD50和TD50

3.5 調正抑毒 選擇附子配伍人參；附子配伍黃芪；附子配伍白術；附子配伍茯苓通觀察配伍前后對附子毒性的影響。

實驗結果：同單用附子比較，附子配伍人參能夠增加半數致死劑量和半數中毒劑量。附子配伍白術、茯苓對附子毒性沒有明顯影響。心臟毒性與急性毒性具有良好的一致性。結果見表4。

表4 附子配伍各藥LD50和TD50

4 討論

本實驗以附子為研究對象，通過方劑配伍中兩味或多味藥物之間藥性功能、作用特點等方面相互對立、相互統一、相制相用的配伍關系，從而達到糾偏減毒的作用，探討以藥性理論為指導的有毒中藥配伍減毒的研究思路。

收集和整理含有附子方劑，統計出與附子常用的配伍藥物，從中藥藥性的角度對數據進行分析，結合歷代本草及方論中有關附子配伍的闡述，確定附子藥性配伍規律：以寒制熱，寒熱者，陰陽之化也，以寒制熱是中醫陰陽對立制約理論指導藥物配伍的重要原則。附子辛熱燥烈，易傷陰劫液，配以寒涼降泄之品，寒涼以制燥烈之偏，降泄以導熱毒外出，可達減毒之效。常用配伍大黃、黃芩、黃連、梔子、木通。以甘緩毒，甘味藥具有緩急、緩和的作用，可調和藥性，緩急解毒。附子燥熱峻猛毒烈，配伍甘潤之品可收和藥緩急制毒之效。常用配伍甘草、大棗。以柔克剛，附子通行十二經脈，善扶五臟之陽，為通脈止痛，助陽散寒之良藥，但其性燥烈辛熱，用之不當，每能耗散陰津，產生流弊，不僅于病無益，反使正氣愈傷，病情愈為復雜，所謂“寒病未已，熱病復起”。對素體陰津不足或津血已傷之患者，尤須慎重。配以地黃、山藥、白芍等甘潤陰柔之品，則可糾弊防偏。調正抑毒，附子辛熱走散，固然可以溫陽逐寒，但因其剛燥辛烈，若逕情直往，或反復使用，每易耗散正氣，使機體耐毒排毒能力減弱而更易中毒；而對元陽欲脫之證，逕用大辛大熱，則有暴散虛陽之虞。配伍甘補扶弱之品如人參、黃芪、甘草等，可調正固本以制其毒。即《神農本草經集注》所謂：“世方動用附子，皆須甘草或人參……相配者，正以制其毒故也?！迸湮槿藚?、甘草、白術、茯苓，可奏調正抑毒之功[3]。

在實驗中采用急性毒性和附子毒性靶器官心臟毒性等兩種毒性試驗方法評價附子配伍各藥物后對附子毒性的影響。在以寒制熱、以甘緩毒、以柔克剛和調正抑毒等四種基于藥性理論的配伍減毒試驗中，附子配伍大黃、黃芩、黃連、梔子、木通等幾味寒性中藥均有一定的減毒作用，其中以大黃和黃芩的減毒作用最強；以甘緩毒的配伍減毒試驗中，在受試的兩味藥物中，只有甘草具有明顯的減毒作用[4]，而另一味甘味中藥大棗沒有明顯減毒作用；在以柔克剛的配伍減毒試驗中，在附子配伍地黃（熟地黃和生地黃）、山藥和白芍等滋陰藥物中，僅有山藥在急性毒性中具有減毒作用，而其他藥物均沒有明顯的減毒作用；在扶正抑毒的試驗中，附子配伍人參、白術和茯苓的試驗中，附子配伍人參具有一定減毒作用，其他皆無減毒作用。比較上述四種配伍減毒的實驗結果，以寒制熱配伍理論指導下的附子配伍減毒作用最強，這不僅表現在減毒作用的效能上，而且還表現在受試藥出行陽性結果的比例上，以寒制熱均優于其他三種配伍類型。這一研究結果可能對附子的臨床安全用藥具有一定的參考意義。此外，在上述配伍減毒的試驗中，多數結果表明附子配伍各藥物的急性毒性和心臟毒性兩種實驗結果有較好的一致性，這說明這些具有減毒作用的配伍中藥可能是通過拮抗附子心臟的毒性或者保護心臟而達到配伍減毒作用的，例如黃芩拮抗附子心臟毒性，最近有人報道黃芩的有效成分黃芩苷具有明顯的心臟保護作用[5]。

如前所述，附子配伍寒性藥物具有減毒作用，但其減毒的同時是否對附子藥效也有影響（減毒存效）以及附子配伍寒性藥物減毒的機理有待于下一步研究。

[1]朱林平.附子毒性研究概況[J].江西中醫藥，2004，25（6）：54.

[2]張廣平，解素花，朱曉光，等.附子相殺、相畏懼配伍減毒的實驗研究[J].中國中藥雜志，2012，37（15）：2215-2217.

[3]王均寧，張成博，鮑捷，等.基于方劑組成統計分析的附子減毒配伍規律探討[J].中國中醫藥信息雜志，2011，18（5）：23-26.

[4]解素花，張廣平，孫桂波，等.附子甘草不同配伍比例配伍減毒實驗研究[J].中國中藥雜志，2012，37（15）：2210-2213.

[5]Wei-Tien Chang，Jing Li，Matthew S.Vanden Hoek，Xiangdong Zhu，Chang-Qing Li，Hsien-Hao Huang，Chin-Wang Hsu，Qiang Zhong，Juan Li，Sy-Jou Chen，Terry L.Vanden Hoek and Zuo-Hui Shao[J]. Am J Chin Med，2013，41（2）：315-318.

（2014-01-06收稿 責任編輯：洪志強）

Research on Reducing Fuzi’toxicity under Guidance of Theory of Medicinal Nature

Zhang Guangping1，Ye Zuguang2
（1 State Research Center for New TCM medicinal formula，Beijing 100075，China；2 China Academy of Chinese Medicinal Sciences，Beijing 100700，China）

Objective：In accordance with the theory of medicinal nature，we explored new ways of reducing toxicity of Fuzing by combining it with other medicinal herbs.Methods：By conducting toxicological experiments（acute toxicity in combination with cardiac toxicity），we tested four combination theories，i.e.using cold medicinal to inhibit hot medicinal，using sweet medicinal to relieve toxicity，using soft medicinal to curb tough medicinal，modifying toxicity.Results：Compared with combining with medicinal of sweet，or soft，or modifying nature，the combination with cold medicinal proved to be most significant at reducing Fuzi’toxicity.Conclusion：The theory of medicinal nature provides a new thinking and method to reduce Chinese medicine’s toxicity.

Theory of medicinal nature；Reducing toxicity by medicinal combination；Fuzi

R229；R285.1

A

10.3969／j.issn.1673-7202.2014.02.001

國家重點基礎研究發展計劃（973計劃）課題：有毒中藥配伍減毒原理和方法學研究（編號：2009CB522806）第一作者：張廣平，助理研究員，研究方向：中藥藥理毒理，Tel：（010）87632551，E-mail：iamzgp＠163.com

葉祖光，研究員，藥理毒理專家，Tel：（010）87632551，E-mail：yezuguang＠sina.com